β-谷甾醇对人自然杀伤细胞杀伤胰腺癌SW-1990细胞的影响

目的研究β-谷甾醇对人自然杀伤(NK)细胞和人胰腺癌细胞株SW-1990增殖率和功能的影响,并探讨其可能的作用机制。方法采用本室建立的专用培养液培养NK细胞。不同浓度的β-谷甾醇作用于NK细胞及胰腺癌SW-1990细胞,四甲基偶氮唑蓝法测定β-谷甾醇对NK细胞及胰腺癌SW-1990细胞生长的影响;流式细胞仪检测胰腺癌SW-1990细胞生长周期和凋亡情况;乳酸脱氢酶法评价经不同浓度β-谷甾醇干预后,NK细胞对胰腺癌SW-1990细胞杀伤活性的变化。结果浓度为1.25～10.00μg/mL的β-谷甾醇作用48h后,NK细胞生长抑制率呈负数,较对照组明显降低(P<0.05),但浓度增加到40～80μg/mL后,NK细胞生长抑制率较对照组显著增高(P<0.05);浓度为10～80μg/mL的β-谷甾醇对胰腺癌SW-1990细胞生长有明显抑制作用(P<0.05);浓度为10μg/mL的β-谷甾醇作用后胰腺癌SW-1990细胞凋亡率为27.18%,较对照组及低浓度组明显增加(P<0.05);β-谷甾醇使SW-1990细胞周期主要停滞于S期;浓度为1.25及2.5μg/mL的β-谷甾醇作用48h后,NK细胞对胰腺癌SW-1990细胞的杀伤活性显著高于对照组(P<0.05),且在1.25μg/mL时达最高峰(76.3%);当β-谷甾醇浓度大于5μg/mL,NK细胞的杀伤活性随药物浓度的增加逐渐下降。结论β-谷甾醇能够有效提高NK细胞对胰腺癌SW-1990细胞的杀伤能力。     

The effect of Fufangkushen on gastric cancer cell killing by lines SGC-7901 human γδT cell

Objective To explore the effect of Fufangkushen on gastric cancer cell killing by human γδT cells. Methods Isopentenyl pyrophosphate method was used to amplify human peripheral blood γδT cells in vitro. Fufangkushen at various concentrations was used to induce γδT cells and gastric cancer cell lines SGC-7901 for 24 hours, MTr assays was used to detect inhibitory effect of Fufangkushen on these cell lines, LDH assays was used to measure the cytotoxic activity of γδT cells, and flow cytometry was used to detect apoptosis of γδT cells and SGC-7901 before and after the treatment. Results Ten days after cultivation, proliferation ra-tio of γδT cells increased from 4.21% to 70.35% and CD44 was up to 94.0%. Inhibitory rate of Fufangkush-en on SGC-7901 at various concentrations was significantly higher than that on γδT cells (22.3% vs-22.4%, P<0.05). The negative inhibitory ratio on γδT cells showed a dose-dependent manner with Fufangkushen's concentrations ranging from 1/5 to 1/400. γδT cells cytotoxic activity to SGC-7901 induced by Fufangkushen for 24 h was higher than control group, (83.6% vs 71.2%, P<0.05). Apoptotic rate was significantly lower in γδT cells than in SGC-7901 (4.64% vs49.23%, P<0.05). Conclusion Fufangkushen, within routine concentration ranges, can promote γδT cells' proliferation, inhibit tumor cell growth and enhance γδT cells' cytotoxic activity. This may be beneficial to tumor adoptive immunotherapy and provide evidence for the appli-cation of Fufangkushen in the treatment of tumors.     

手术分娩时机对母婴血中CD4+ CD25+ CD127low调节性T细胞的影响

目的探讨手术分娩时机对母、婴血中CD4+CD25+CD127low调节性T细胞(Treg)的影响。方法正常初产妇60例,按分娩方式分为阴道分娩(VD)、择期手术分娩(PCS)、急诊手术分娩(ECS)三组,每组20例,用流式细胞仪检测分娩时母体外周血和新生儿脐血T细胞中Treg百分数。结果新生儿脐血中Treg三组间比较差异无统计学意义(P>0.05),但PCS组明显高于VD组(P<0.05);母体外周血中Treg,三组中ECS组>PCS组>VD组,ECS组显著性高于VD组(P<0.01);三组母体、新生儿血中Treg均无相关性(P>0.05)。结论 PCS时新生儿血中Treg增高,可能会对婴儿免疫系统发育有一定的影响;分娩过程异常的ECS母体血中Treg增高可能与产妇免疫失衡有关。     

酶联免疫吸附试验检测胸水中结核菌抗原

结核性胸膜炎在目前尚无敏感的诊断方法。胸水中找抗酸杆菌阳性率很低,结核菌培养阳性率也只有4.7～10.5%.我们以卡介苗作抗原,建立酶联免疫吸附试验(ELISA)检测胸水中结核杆菌抗原,获得了较为满意的结果,现报告如下.一、材料和方法1.特异抗体制备:取皮内接种卡介苗(卫生部上海生物制品研究所),对灭菌生理盐水透析24h,干凝胶中浓缩后(均在4℃下进行),作为菌体抗原。选     

血清乳酸脱氢酶-免疫球蛋白复合物测定的初步探讨

1964年Wildig 首先在一患者血清中发现球蛋白结合性淀粉酶(Globulin-bound amylase)。从而引起了许多学者的注意,相继对球蛋白结合性酶复合物进行了深入研究,并陆续地发现了LDH、ALP、CK 等酶-免疫球蛋白复合物。     

β-谷甾醇对人共刺激细胞杀伤胃癌SGC-7901细胞的影响及其机制的探讨

目的探讨β-谷甾醇对用多种细胞因子和刺激分子联合诱导培养的人外周血单个核细胞(共刺激细胞)杀伤胃癌SGC-7901细胞的影响及其机制。方法分离健康者外周血单个核细胞(PBMC)在体外经多种细胞因子诱导为共刺激细胞,不同质量浓度的β-谷甾醇分别作用于共刺激细胞及胃癌SGC-7901细胞24、48、72 h后,CCK8法检测共刺激细胞的生长,MTT法检测胃癌SGC-7901细胞的生长,FCM检测共刺激细胞PFP、GraB、CD107a、IFN-γ的表达;LDH释放法检测共刺激细胞对SGC-7901细胞的杀伤活性;Western blot检测共刺激细胞中p-ERK1/2、Bcl-2的表达情况。结果培养10 d后,共刺激细胞增殖倍数达高峰。与对照组比较,质量浓度2.5~10μg/ml的β-谷甾醇作用后共刺激细胞的增殖率显著提高(P0.05),质量浓度10~80μg/ml的β-谷甾醇对SGC-7901细胞生长抑制率显著提高(P0.05),并且0.3~5μg/ml的β-谷甾醇作用后的共刺激细胞对SGC-7901细胞的杀伤活性明显增强(P0.05),共刺激细胞中PFP、GraB、IFN-γ及p-ERK1/2、Bcl-2的表达较对照组显著增加(P0.05)。结论β-谷甾醇在一定质量浓度范围内能够促进共刺激细胞的增殖,并增强其对胃癌SGC-7901细胞的杀伤活性,其机制可能与β-谷甾醇上调共刺激细胞PFP、GraB、IFN-γ的表达,活化p-ERK1/2、Bcl-2有关。     

IL-21增强γδT细胞体外抗肿瘤活性的实验研究

探讨IL-21对人外周血γδT细胞抗肿瘤活性的影响。分离健康人外周血单个核细胞(PBMC),分别在有或无IL-21参与的条件下,加入到含异戊烯焦磷酸(isopentenyl pyrophosphate,IPP)、IL-2或IL-15的RPMI 1640完全培养基中诱导培养γδT细胞。在培养的第10天用台盼蓝染色计数细胞;采用流式细胞术检测各组γδT细胞的纯度及γδT细胞穿孔素、颗粒酶B和CD107a的表达;用CCK-8试剂盒检测γδT细胞对K562细胞的体外杀伤效应。结果显示,不同细胞因子组诱导10d后γδT细胞纯度均达到70%以上,IL-2+IL-21、IL-15+IL-21和IL-2+IL-15+IL-21组与IL-2、IL-15组相比,细胞纯度和扩增倍数没有显著性变化;IL-2+IL-21、IL-15+IL-21和IL-2+IL-15+IL-21组γδT细胞穿孔素、颗粒酶B和CD107a的表达及对K562细胞的杀伤活性均显著高于IL-2、IL-15单独组。以上结果表明,IL-21可通过上调γδT细胞穿孔素和颗粒酶B的表达增强其抗肿瘤活性。     

HCV胶体金试剂在急诊患者手术输血前的快速检测

目的应用HCV胶体金试剂对急诊手术患者输血前进行检测,并与抗-HCV ELISA法进行比较。方法对本医院2008年1～10月的3216例急诊手术患者,先应用HCV胶体金试剂检测抗体,再分别用试剂①、②两种抗-HCV试剂进行ELISA法检测。对HCV胶体金试剂、试剂①、②检测为阳性的标本,再进行HCV RNA RT—PCR荧光定量检测。结果3216份标本中HCV胶体金试剂检测阳性25份,抗-HCV试剂①ELISA法检测阳性33份,试剂②检测阳性34份（两种试剂均阳性26份,仅试剂①、②阳性的分别为7和8份）。HCV RNA RT—PCR荧光定量检测阳性28份。结论HCV胶体金法与抗-HCV ELISA法结果符合率为92．59％,与HCV RNA RT—PCR荧光定量法结果符合率89．29％,HCV胶体金试纸法假阳性率低,操作简便、快速,适合急诊患者手术前输血的筛选。     

手术分娩对产妇和新生儿血中T淋巴细胞的影响

目的 探讨手术分娩对产妇和新生儿T淋巴细胞亚群数量的影响.方法 足月分娩产妇60例,依据分娩方式及手术时机分为自然分娩(NL)组、择期剖宫产(PCS)组、急诊剖宫产(ECS)组各20例;分别采集分娩时的产妇外周血和新生儿脐血,应用流式细胞仪检测T细胞各亚群的百分比.结果 NL组、PCS组、ECS组产妇血中T淋巴细胞亚群CD3+(69.15±13.24)%、(73.50±4.86)%、(68.68±7.50)%;CD3+CD4+(32.03±9.44)%、(36.35±11.82)%、(34.88±7.54)%;CD3+CD8+(29.83±6.01)%、(30.59±7.30)%、(28.08±4.09)%;CD4+/CD8+1.09±0.37、1.33±0.65、1.25±0.27各组间差异均无统计学意义(P＞0.05);新生儿脐血:PCS组中由于CD4+的减少而呈现CD4+/CD8+的比值明显低于NL、ECS组,分别为2.71±0.86、3.52±1.50、3.30±1.03(P＜0.05).结论 产妇血中T淋巴细胞亚群数量不受手术分娩以及产程影响;PCS可能会加剧新生儿对某些病原体的易感性.