问号钩端螺旋体lipL21基因改建及其表达产物免疫原性变化和定位

目的:改建问号钩端螺旋体(简称钩体)lipL21基因核苷酸序列以提高表达产量并了解基因改建前后表达产物免疫原性变化,确定外膜脂蛋白LipL21在钩体表面的定位。方法:参照大肠杆菌偏爱密码子设计,合成lipL21基因核苷酸序列并构建其原核表达系统。采用SDS-PAGE和BioRad凝胶图象分析系统检测改建前后lipL21基因表达量变化。采用钩体TR/Patoc抗血清为一抗的Western blot鉴定改建前后两种目的重组蛋白rLipL21s的免疫反应性,显微镜凝集试验(MAT)比较改建前后rLipL21s抗血清对不同钩体血清群的交叉免疫凝集效价变化。应用免疫电镜技术对LipL21进行定位。结果:改建前后lipL21基因表达量分别为细菌总蛋白的8.5%和46.5%。两种rLipL21均能与TR/Patoc抗血清发生免疫结合反应,免疫家兔后均能产生特异性抗体。两种rLipL21兔抗血清对我国15群15型钩体参考标准株MAT效价相近,均为1∶80~1∶320。LipL21位于钩体外膜表面。结论:LipL21是钩体表面抗原。改建后的lipL21基因可明显提高原核表达产量,其产物可保持良好的抗原性和免疫反应性,其抗体具有广泛的交叉免疫凝集活性。     

问号钩端螺旋体属特异性LipL41s抗原膜定位及其患者血清抗体检测

目的确定问号钩端螺旋体（钩体）属特异性脂蛋白抗原LipL41s膜定位及其自然抗体应答情况和抗体类型。方法采用显微镜凝集试验（MAT）检测四川地区钩体病患者血清标本。IPTG诱导重组原核系统表达目的蛋白rLipL41／1和rLipL41／2，Ni—NTA亲和层析法提纯目的重组表达产物。采用Westernblot检测感染不同血清群问号钩体病患者血清与rLipL41s的免疫反应性。采用胶体金免疫电镜技术，对LipL41s进行膜定位。建立基于rLipL41s的ELISA，检测钩体病患者血清中特异性抗体水平及其类型。结果黄疸出血群是四川地区最主要的优势钩体血清群。不同血清群问号钩体病患者血清均能有效识别LipL41s。LipL41s是位于钩体外膜表面的蛋白分子。156例MAT阳性钩体病患者血清标本中，rLipL41／1和rLipL41／2特异性IgM阳性率分别为84．6％～87．8％和78．2％～83．3％，特异性IgG阳性率分别为69．2％～81．4％和75．0％～80．1％。结论LipL41s是钩体表面蛋白抗原。自然感染钩体时，LipL41／1和LipL41／2可诱导机体产生IgM和IgG两类血清抗体，且两者之间有广泛的抗原交叉反应。rLipL41／1和rLipL41／2可作为研制通用型钩体基因工程疫苗和检测试剂盒的候选抗原。     

CT导引细针抽吸在肺内病灶定性诊断中的应用

目的 探讨CT导引细针抽吸在肺内病灶定性诊断中方法和优势。方法 回顾性分析17例CT导引下肺穿刺抽吸病例的临床资料，总结操作经验．评价，临床效果．讨论并发症的原因及处理。结果 17个病例16例取得了细胞学结果，仅3例出现了轻微并发症。结论 CT导引细针抽吸是个安全有效、简便易行的获取病理资料的方法，值得推广。     

两种术式在骨质疏松性胸腰椎压缩性骨折患者中临床疗效的对比

目的:观察骨质疏松性胸腰椎压缩性骨折(Osteoporotic thoracolumbar compression frac-ture,OTCF)患者运用两种不同的治疗方式(经皮椎体成形术与经皮椎体后凸成形术)进行治疗的临床效果.方法:选择研究时间在2016年1月至2019年10月,于本院接受治疗的84例患者,均患有O...     

大鼠支气管哮喘模型气道平滑肌细胞上前列腺素E受体分布改变

目的：气道重塑是支气管哮喘(简称哮喘)的主要病理特征之一,它与气道平滑肌细胞迁移和增殖功能密切相关,前列腺素 E 受体(E-prostanoid,EP)对之有调控功能。本研究通过大鼠哮喘模型构建,评价了哮喘状态下气道平滑肌细胞上 EP 改变情况,为开发 EP 类药物治疗哮喘气道重塑方法提供理论依据。方法20只 SD 清洁级大鼠,随机分为卵白蛋白激发哮喘组和对照组,28 d 后处死,进行组织学检查,分离培养气道平滑肌细胞,用荧光定量 PCR 测定。结果大鼠哮喘模型经组织病理学检查符合哮喘气道重塑现象,气道平滑肌细胞 RNA 纯度 A260/280处于1.8~2.0之间,用 OligodTadaptor 作引物进行逆转录反应,以特异 miRNAs 引物为正向引物,以共同的与 adaptor 配对的通用引物为反向引物,进行实时荧光定量 PCR 扩增。用 GAPDH 作为内参。扩增反应体系为 miRNAQ-PCR 诊断试剂盒。EP1~4相对表达量(2-△△Ct )在对照组和哮喘组分别为(EP1：4.35±0.18,6.55±1.21;EP2：1.35±0.12,0.24±1.06;EP3：4.59±1.14,5.89±1.74;EP4：2.89±1.85,1.69±0.44)哮喘组 EP2/4显著下降,而EP1显著增高(P <0.01)。结论大鼠哮喘模型气道平滑肌细胞上 EP2/4减少,和 EP1表达增加,这可能是哮喘气道重塑的重要因素。     

“仿真医院”建设是基于工作过程教改的有效途径

目的：研究基于工作过程的教学改革。方法：2007年开始护理专业校内实训基地建成仿真医院,实行基于工作过程的教学改革,体现“校内基地临床化”的原则。结果：几年的努力学生综合能力有了明显提高,课程改革、对外服务等取得了突显的成绩。结论：护理专业校内实训基地建成仿真医院是实现基于工作过程教学改革的有效途径。     

基于“软硬技能并重”理念的高职临床护理综合实训课程改革与实践

目的 借鉴全国职业院校护理技能大赛项目,基于“软硬技能并重”理念对高职临床护理综合实训课程进行改革,并探讨实践效果。方法 便利选取某高职院校2020级护理专业3个班学生为试验组（n=136）,3个班为对照组（n=138）。试验组教学内容基于全国职业院校护理技能大赛项目进行改革,采用以团队合作为基础的线上线下混合式教学,在教学中注重学生操作技能的同时,强化护患沟通、团队合作、分析解决问题、临床思维等软技能;对照组则采用传统方法组织教学。比较两组客观结构化临床考试（objective structured clinical examination,OSCE）成绩和对课程的评价,并通过试验组提交的反思报告了解其学习体会。结果 试验组OSCE考核得分为91.50(90.50,93.00)分,对照组得分为82.25(80.00,84.50)分,差异有统计学意义（Z=14.067,P<0.001）;试验组在课程提升实习信心及9种软硬技能的认可度均高于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;反思报告分析结果显示,学生认为本课程实践性与综合性强,能激发学习主动性,提升了专业综合能力与实习...     

嗜肺军团菌lvgA基因分析及实时荧光定量RT-PCR对军团菌的检测

目的确定不同嗜肺军团菌lvgA基因序列的差异性及其感染宿主细胞后转录水平的变化,建立基于lvgA基因检测嗜肺军团菌的荧光定量RT-PCR。方法通过使用NCBI/Blast,Pfam,TMHMMServer v.2.0等网络资源分析嗜肺军团菌lvgA基因编码蛋白的保守功能结构域、跨膜区域。根据参考序列设计引物,采用PCR技术从嗜肺军团菌基因组DNA中扩增lvgA基因,将其连接入克隆载体pMD18-T进行测序,并用cltust软件比较不同嗜肺军团菌菌株lvgA基因的核苷酸、氨基酸序列。根据lvgA基因和嗜肺军团菌16SrDNA序列内的特异保守区域设计引物,以实时荧光定量RT-PCR检测嗜肺军团菌在感染人单核巨噬样细胞THP-1后lvgA基因转录水平的变化,同时,采用基于lvgA基因的荧光定量RT-PCR对嗜肺军团菌患者血液样本进行检测。结果研究表明,嗜肺军团菌lvgA基因为军团菌毒力基因,其产物定位于外膜表面。不同嗜肺军团菌菌株中lvgA基因的核苷酸序列和氨基酸序列保守,相似度分别达:99%,96%,96%和99%,98%,98%。在感染宿主细胞后lvgA基因的转录水平上调明显,最高达4.3倍(P<0.05)。基于lvgA基因的荧光定量RT-PCR方法可有效地检测嗜肺军团菌患者血液样本中的嗜肺军团菌。结论 lvgA基因与嗜肺军团菌的毒力相关,建立的基于lvgA基因的荧光定量RT-PCR方法具有快速、敏感、稳定等优点,适用于嗜肺军团菌肺炎临床实验室的早期诊断。     

高护技能实训的分层教学实践

随着职业教育面向大众并向普及化方向发展，高职学生的总体素质参差不齐，个体差异也逐渐扩大。统一的教学方式在一定程度上已成为制约高职教学质量的瓶颈。分层教学是对传统教学方法的改革，包括教学目标、教学内容、教学进度、培养方向、练习和考核评价的分层。在高护技能实训教学中应用分层教学法，因人而异、因材施教能够实现教与学的最佳效果。     

用电子秤测量重量解决引流袋刻度问题的临床研究

[目的]寻找一种能快速准确测量引流液、减轻护士工作量、减少感染机会的方法。[方法]采用文献检索和电子秤测量的临床试验研究。[结果]用电子秤测量引流液重量和直接引流袋刻度读数的误差比较有统计学意义,电子秤测量误差较小;称重读数和引流袋刻度读数时间差异比较有统计学意义,称重读数时间较少。[结论]用电子秤测量引流液的重量来代替引流刻度评估引流量不仅准确而且省时。