人类Foxm1b基因的原核表达、抗体制备及其对肝癌细胞中Foxm1b蛋白的识别

【目的】构建人类Foxm1b基因的原核表达载体，表达并纯化蛋白，制备多克隆抗体，并用此抗体检测肝癌细胞中Foxm1b基因的表达，为进一步研究Foxm1b基因的功能奠定基础。【方法】从GenBank中下载人类Foxm1b基因全长cDNA序列并用Pegene软件分析其可能的抗原表位，设计引物．应用RT—PCR获得含抗原表位的Foxm1b基因片段，重组人原核表达载体pET-28a，在大肠杆菌BL-21（DE31中诱导表达，应用亲和层析法获得纯度较高的原核表达蛋白并免疫大鼠制备多克隆抗体，用ELISA检测抗体滴度并用免疫细胞化学的方法检测此抗体对肝癌细胞中天然Foxm1b蛋白的识别。【结果】成功构建了Foxm1b基因重组表达载体pET-28a—Foxm1b，表达的蛋白经纯化后免疫大鼠得到了高滴度的多克隆抗体．该抗体可以识别肝癌细胞中的天然抗原。【结论】人类Foxm1b基因的原核表达载体的构建、重组蛋白的表达纯化及有诊断价值的抗体的制备为后续的研究提供了基础。     

中华医学会第九次全国消化疾病学术会议纪要

2009年12月4-6日,由中华医学会消化病学分会主办、广东省医学会承办的第九次全国消化疾病学术会议在广州白云国际会议中心隆重举行.在12月4日的消化病学院课程中,世界胃肠大会主席Richard Kozarek教授、中华医学会消化病学分会、肝病学分会及消化内镜分会的主任委员分别作了相关学科现况与进展的报告.     

UreA/KatA双价减毒沙门菌疫苗株抗幽门螺杆菌的免疫保护作用

目的探讨由2种幽门螺杆菌(Hp)抗原组合的双价疫苗在防治Hp感染中的作用以及减毒鼠伤寒沙门菌作为传递Hp抗原的活疫苗载体的可行性.方法PCR技术扩增尿素酶A亚单位(ureA)和过氧化氢酶(katA)基因片段,构建表达UreA/KatA融合蛋白的重组质粒,重组质粒宿主菌经IPTG诱导,用SDS-PAGE和Westernblot分析UreA/KatA的表达情况.将该重组质粒转入减毒鼠伤寒沙门菌SL3261株中构建重组口服活疫苗株,经口服免疫C57BL/6小鼠,再用Hp悉尼株进行攻击,用快速尿素酶试验和细菌定量培养对胃粘膜中Hp的定植及生长情况进行观察.结果SDS-PAGE电泳图上显示1条相对分子质量(Mr)约108×103的新生蛋白带,占细菌总蛋白的5%,并能与抗GST抗体发生特异性反应.动物实验结果显示,经UreA/KatA双价疫苗免疫的小鼠能有效防御Hp的感染.结论表达UreA/KatA融合蛋白的双价减毒沙门菌疫苗株能诱导抗Hp保护性免疫反应,有望在Hp感染及其相关性疾病的防治中发挥积极作用.     

肝硬化患者口服葡萄糖耐量试验的变化

目的　了解口服葡萄糖耐量试验的血糖值与肝硬化患者肝功能状况的关系。方法　 3 8例肝硬化患者按Child Pugh肝功能分级 ,分为A级 ( 10例 )、B级 ( 14例 )和C级 ( 14例 )三组。 11例健康者为对照组。抽取空腹血 2ml后 ,行糖耐量试验 ,以葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度。结果　肝硬化各组的基础血糖浓度与对照组比较无显著差异 ,60和12 0分钟血糖浓度均显著高于对照组 (P <0 .0 0 2～ 0 .0 5 ) ,且随着肝硬化严重程度的增加 (即A级→B级→C级 ) ,血糖浓度有增高的趋势。肝硬化各组的血糖12 0 /0 值均显著高于对照组 (P <0 .0 0 1～ 0 .0 0 2 ) ,并随着肝硬化严重程度的增加而增高。 12 0分钟血糖及血糖12 0 /0 值与血清白蛋白浓度呈显著负相关 (P <0 .0 0 1) ,与血清总胆红素浓度、凝血酶原延长时间、R151CG及Child Pugh肝功能评分呈显著正相关 (P <0 .0 0 1～ 0 .0 0 5 )。结论　口服葡萄糖耐量试验的 2小时血糖值及血糖12 0 /0 值与肝硬化患者的肝功能状况密切相关 ,是反映肝硬化患者肝功能状况的良好指标 ,有一定的临床应用价值。     

广东地区幽门螺杆菌空泡毒素基因亚型及其与胃肠疾病的关系

目的：1)调查广东地区患感染幽门螺杆菌(Hp)的空泡毒素基因(vacA)亚型的流行情况;2)探讨不同的vacA亚型与协相关胃肠疾病问的关系。方法：自广东地区不同疾病患胃黏膜中分离得到191株Hp,抽提各株菌的总DNA,采用特定引物对各株菌vacA基因中间序列(m)及信号序列(s)进行PCR检测。结果：1)广东地区患感染Hp vacA基因亚型有sla／m2、sla／mlb、slb／m2、slb／mlb、s2／m2及sla／mlb—m2六种组合、各亚型所占比例分别为88．0%(168／191)、7．3％(14／191)、3．1％(6／191)、0．5％(1／191)、0．5％(1／191)及0．5％(1／191);2)vacA亚型在不同Hp相关胃肠疾病中的检出率无显性差异。结论：1)广东地区Hp vacA基因亚型以sla／m2占绝大部份;2)不能单纯以vacA亚型作为预测感染Hp后的疾病转归。     

广东地区幽门螺杆菌vacA基因亚型及其与胃肠疾病的关系

目的：探讨广东地区幽门螺杆菌（Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ）ｖａｃＡ基因亚型的流行情况及不同ｖａｃＡ亚型与Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ相关性胃肠疾病的关系。方法：自广东地区不同轩十二指肠疾病患者胃粘膜中分离得到１９１株Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ菌株,抽提各菌株总ＤＮＡ,用特定引物对各菌株ｖａｃＡ基因的信号序列（ｓ）及中间区等位基因（ｍ）行矛合酶链反应（ＰＣＲ）检测。结果：广东地区患者Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ的ｖａｃＡ亚型有ｓｌａ／ｍ２、ｓ     

豚鼠结肠肌间神经丛促皮质激素释放激素神经元的表达及其生理特性

目的：研究促皮质激素释放激素(corticotrophin releasing hormone，CRF)在豚鼠结肠肌间神经丛的表达和生理功能。方法：RT-PCR、免疫荧光组织化学染色检测CRF在结肠肠肌层神经丛的表达；细胞内电生理记录结合生物素示踪法研究CRF在肠道的生理功能。结果：豚鼠的肠肌间神经丛有CRF mRNA的表达；豚鼠结肠肠肌间神经丛中有表达CRF的神经元，其形态均为DogielⅠ型神经元。CRF对豚鼠结肠肌间神经丛有很强的兴奋作用，可诱发慢的兴奋性去极化反应，而且CRF所兴奋的神经元均为表达CRFI受体的神经元。结论：CRF是肠道神经系统的兴奋性神经递质。     

小肠出血病因分析及诊断方法评价--附40例报告

目的:探讨小肠出血的病因和诊断方法.方法:回顾性分析40例确诊的小肠出血病例的临床资料.结果:40例小肠出血病人分别经核素扫描、血管造影、钡餐、胶囊内镜、小肠镜或手术确诊.其中小肠肿瘤18例(45%),包括良性14例、恶性4例,小肠憩室9例(23%)、血管畸形5例(13%)、克罗恩病5例(13%)、出血坏死性肠炎2例、肠结核1例.结论:小肠出血病因以小肠肿瘤、憩室、血管畸形及克罗恩病较常见.胶囊内镜对小肠血管畸形、克罗恩病等疾病的诊断率较高.对于好发于十二指肠悬肌附近的小肠肿瘤、回肠远端憩室及末段回肠的克罗恩病,小肠镜是较好的诊断工具.     

雷尼替丁三联疗法对幽门螺杆菌阳性十二指肠溃疡的近期及远期疗效

对82例幽门螺杆菌(HP)阳性的十二指肠溃疡用雷尼替丁、羟氨苄青霉素和甲硝唑三联疗法2周,追踪1年,并与145例铋剂三联疗法病例对照。结果治疗组溃疡愈合率87.8%,HP根除率89.0%;对照组两参数为92.4%和85.7%(P均＞0.05)。治疗组副反应显著少。追踪1年,治疗组HP感染再燃9例(12.3%),重感染2例(2.7%),溃疡复发率HP阴转组1/61(1.6%),HP阳性组7/11(63.6%)(P＜0.01)。因再燃率高且在停药后4~8周发生,建议修定HP根除的标准时间,应从4周末延到8周末。