P3启动子调控融合基因质粒构建及在肝癌细胞中表达(英文)

目的：构建人胰岛素样生长因子Ⅱ基因（IGF-Ⅱ）P3启动子驱动单纯疱疹病毒胸苷激酶（tk）与增强型绿色荧光蛋白（EGFP）融合基因穿梭质粒，观察其在肝癌细胞系HepG2及宫颈癌细胞系HeLa细胞中的表达及其作用。方法：应用基因重组技术，构建IGF-Ⅱ P3启动子驱动EGFP与tk融合表达穿梭质粒载体，脂质体转染技术将其转入HepG2及HeLa中，48 h后荧光显微镜下观察荧光表达,RT-PCR法检测tk和EGFP mRNA表达，四甲基偶氮唑蓝（MTT）实验检测转染融合蛋白载体后给予不同浓度的GCV对HepG2及HeLa细胞毒作用。结果:酶切鉴定和测序分析证实重组质粒构建成功；转染此穿梭质粒的细胞中仅有HepG2细胞检测到绿色荧光；RT-PCR检测到tk和EGFP的mRNA仅在HepG2细胞中表达；GCV对转染了携此质粒载体的HepG2细胞有选择性细胞毒作用。结论:成功构建IGF-Ⅱ P3启动子驱动携带tk与EGFP融合基因穿梭质粒载体，转染后对人肝癌细胞系HepG2有选择性杀伤作用，为进一步靶向性肝癌腺病毒基因治疗奠定了基础。     

广东省62例自身免疫性肝炎的流行病学及临床特征分析

目的 研究自身免疫性肝炎(AIH)的流行病学及临床特征.方法 收集2002年11月1日-2014年3月31日在暨南大学附属第一医院诊断为AIH患者的住院资料,分析其流行病学、临床特征、免疫球蛋白IgG或γ球蛋白水平、肝功能及肝纤维化指标.结果 ①共纳入62个病例,其中男9例,女53例,男女比例1∶5.89,患者年龄15～79岁,中位年龄56岁.62例患者中,中年患者占40.3％(25例);乏力(61.3％)、肝大(54.8％)、纳差(53.2％)为最常见症状;Ⅰ型AIH占77.42％,Ⅱ型3.23％,Ⅲ型3.23％,Ⅳ型16.13％.②不同分型AIH患者性别、年龄构成比、临床表现及并发症发生率、血清IgG或γ球蛋白水平和肝功能指标之间的差异均无统计学意义.③Ⅰ型AIH患者男性腹胀、肝掌、蜘蛛痣、双下肢水肿、上消化道出血、自发性腹膜炎发生率均高于女性,而女性血清谷氨酰转肽酶(GGT)、碱性磷酸酶(ALP)浓度高于男性,血清透明质酸(HA)及层粘连蛋白(LN)浓度低于男性.Ⅰ型AIH患者各年龄组临床表现及并发症发生率、血清IgG或γ球蛋白水平、肝功能指标差异均无统计学意义.结论 AIH以中年女性多见,以乏力、肝大、纳差为最常见症状,Ⅰ型AIH最多,女性患者血清GGT、ALP浓度明显高于男性,而血清HA及LN浓度则低于男性.     

适量饮酒与脂肪性肝病或非酒精性脂肪性肝病发病风险的Meta分析

目的 系统评价适量饮酒与脂肪性肝病(FLD)或非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)发病风险的关系.方法 检索PubMed、EMbase、Wed of Science、The Cochrane Library、中国知网(CNKI)、万方数据库、维普数据库(VIP)中关于适量饮酒与FLD或NAFLD发病风险关系的研究.检索时限从建库至2015年11月.采用Stata12.0统计软件进行Meta分析.结果 共纳入16个研究,包括13个横断面研究,2个横断面加纵向研究,1个队列研究,研究对象共计76967例.Meta分析结果显示:①微量及少量饮酒可使FLD或NAFLD的发病风险分别降低17％及27％,而中量饮酒组边缘性地与FLD或NAFLD的发病风险降低相关.②不同性别亚组结果显示:女性微量及少量饮酒可使FLD或NAFLD发病风险分别降低29％及33％,但女性中量饮酒与对照组相比无统计学差异;男性少量饮酒可使FLD或NAFLD发病风险降低23％,但男性微量及中量饮酒与对照组相比无统计学差异,亚洲男性少量及中量饮酒可使FLD或NAFLD的发病风险分别降低29.7％及30.3％.结论 适量饮酒可能不增加FLD或NAFLD的发病风险;相反,女性微量及少量饮酒可显著降低FLD或NAFLD的发病风险,而男性,尤其是亚洲男性少量及中量饮酒亦可显著降低FLD或NAFLD的发病风险.     

幽门螺杆菌CagA及VacA基因的研究进展

幽门螺杆菌（Ｈｐ）为革兰染色阴性菌,定植于胃粘膜表面,如果不给予治疗,Ｈｐ感染可持续数十年甚至终生［１,２］．Ｈｐ感染是引起慢性胃炎、十二指肠溃疡和胃溃疡的主要病因,并且是胃癌和胃淋巴瘤发生的一个主要危险因素．然而,感染了Ｈｐ的人群中大约只有１５％的人发生这些疾病,造成上述不同结果的机制尚不十分清楚［３］．感染了Ｈｐ人群的发病,除了与宿主基因易感性和环境因素有关外,还与所感染Ｈｐ菌株的毒力有关［４］．近年随着分子生物学研究技术的发展,发现Ｈｐ菌株在基因水平存在差异．Ｈｐ的某些菌株具有细胞毒素相关…     

HBx蛋白对IGF-II基因P4启动子活性的影响

目的:构建乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)表达载体pEYFP-C1-X及人IGF-II基因P4启动子调控的荧光素酶报告载体pGL3-P4,并初步探讨HBx对IGF-II基因P4启动子活性的影响。方法:应用基因重组技术,将HBx基因及P4启动子分别克隆入pEYFP-C1及pGL3-Basic载体,构建重组质粒pEYFP-C1-X及pGL3-P4;将pEYFP-C1-X稳定转染HepG2细胞,进行G418筛选;将体外甲基化pGL3-P4瞬时转染HepG2-EYFP-X细胞,采用双荧光素酶实验检测P4启动子的转录调控活性。结果:(1)经酶切及测序鉴定,重组质粒中的目的片段HBx和P4启动子的大小分别为465bp及1246bp,序列与GenBank数据库一致。(2)获得了表达HBx的细胞系HepG2-EYFP-X,在荧光显微镜下呈现黄绿色荧光。(3)转染HepG2-EYFP-X细胞的甲基化P4启动子的荧光素酶活性明显高于其对照细胞HepG2-EYFP(P0.01)。结论:HBx可增加P4启动子的转录活性。     

抗肝癌单链抗体二聚体的制备及其对肝癌细胞株增殖的影响

目的:探讨特异性抗肝癌单链抗体二聚体在毕赤酵母中高效表达、纯化和鉴定其生物学活性的方法,并观察其对肝癌细胞增殖的影响.方法:构建酵母表达我体pGAPZαA-BDM,转化感受态大肠埃希菌DH5a,选择测序正确的阳性克隆进行扩增后,电转化酵母细胞,表达抗体二聚体,对表达抗体进行纯化、二聚体相对分子质量及形成比例和浓度检测,鉴定其对肝癌细胞的结合活性,免疫组化检测二聚体对肝癌组织抗原的特异性,MTT法观察二聚体抗体对肝癌细胞株增殖的影响.结果:测序及SDS-PAGE显示,成功构建及在酵母中表达抗体二聚体BDM,纯化后的抗体经凝肢过滤色谱检测,二聚体的相对分子质量为62×103,二聚体形成比例为92%;表达量为30 mg/L菌液.BDM与3株肝癌细胞结合效价为1:128,高于其亲本单链抗体.免疫组化显示,BDM与肝癌、肝硬化、胃癌、肠癌及正常肝组织反应的阳性率分别为40.0%、11.0%、6.7%、5.0%和0,P值均<0.05;MTT显示,二聚抗体BDM显示较好的抑瘤性,对肝癌细胞株的抑制率为30%,且有浓度依赖性.结论:成功制备高表达量、高特异性、较好的活性及较高稳定性的抗肝癌单链抗体二聚体BDM,其对肝癌细胞株的增殖有明显抑制作用,为后续将该抗体用于肝癌的放射免疫诊断和靶向治疗研究奠定了基础.     

原发性腹主动脉瘤十二指肠瘘1例

腹主动脉瘤消化道瘘是腹主动脉瘤少见但极为严重的并发症,是消化道出血的少见病因。本文报道1例原发性腹主动脉
瘤十二指肠瘘患者,以腹痛、便血、呕血为主要症状,经电子结肠镜、腹部增强CT及血管三维重建等检查确诊,及时行手术等治
疗,病人痊愈。
     

以腹部症状为首要表现的系统性硬化病1例

患者,女,53岁。因腹痛伴反酸、嗳气2年余,加重伴吞咽困难1个月,于2010年10月6日入院。患者2年前无明显诱因下出现腹痛,呈阵发性胀痛,以剑突下及上腹部为主,下午及夜间发作,持续约2 h后缓解,与进食无明显关系,伴反酸、嗳气。于多家医院就诊,考虑"慢性胃炎",给予抑酸剂、胃黏膜保护剂等药物治疗,症状未见明显缓解。1个月前上述症状加重,并伴吞咽困难、双侧手指发硬。患者自发病以来,睡眠精神欠佳,胃纳差,大小便正常,体重无     

妊娠剧吐与幽门螺杆菌感染的相关性研究

妊娠剧吐至今病因不明 ,一般认为与孕期血中绒毛膜促性腺激素 (ｈＣＧ)及雌激素水平升高有关。妊娠剧吐多见于年轻的初孕妇[1] 。本研究通过血清学试验检测患者的幽门螺杆菌 (Ｈｐ)感染状况 ,初步探讨Ｈｐ感染与妊娠剧吐的相关性。一、资料与方法1.资料来源与分组 :研究组 :1998年 7月～ 1999年 10月在武汉大学人民医院、武汉军工总医院以及铁道部大桥局中心医院门诊诊断为妊娠剧吐的孕妇共 72例 (年龄 2 3～ 35岁 ) ,诊断标准参考文献 [1]。对照组 :为同期常规产前检查 ,年龄及孕周相近的正常孕妇 10 0例。2 .方法 :第 1次就诊时 ,抽取肘静…