siRNA降低COX-2基因表达对肝癌细胞系HepG2增殖的影响

目的: 探讨小干扰R N A 降低环氧化酶-2(cyclooxygenase-2, COX-2)基因对肝癌细胞He pG2增殖与细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)表达的影响.方法: 将人肝癌细胞株HepG2细胞分为4组:COX-2 siRNA干预组、阴性对照siRNA组、空脂质体组、空白对照组. 脂质体转染法将COX-2 siRNA转染入HepG2细胞; MTT法测定转染后24, 48, 72 h的增殖抑制率; 流式细胞仪测定转染后24 h的细胞周期分布; 半定量RTPCR与Western blot检测转染后24 h肝癌细胞COX-2和ERK1/2的表达.结果: COX-2 siRNA干预组的增殖抑制率明显高于阴性对照组和空脂质体转染组(67.08%vs 2.45%, 1.56%, 均P<0.01); COX-2 siRNA干预组G1期细胞明显增多, 与空白组、空脂质体组及阴性对照组相比, 均具有显著差异(72.80% vs 50.27%, 50.97%, 53.13%, 均P<0.05); RT-PCR显示: COX-2 siRNA干预组COX-2, ERK1, ERK2 mRNA表达(0.58, 0.32,0.48)明显降低, 与空白组(0.93, 0.76, 0.72)、空脂质体组(0.89, 0.64, 0.67)及阴性对照组(0.83, 0.71, 0.65)比较, 差异具有统计学意义(均P<0.05), Western blot显示以上各项指标表达趋势与RT-PCR相同.结论: 小干扰RNA可降低肝癌细胞He pG2的COX-2基因表达, 抑制肝癌细胞的生长.COX-2促进肝癌生长可能与ERK1/2通路调控有关.     

骨髓间充质干细胞和恶性肿瘤发生发展关系

骨髓间充质干细胞主要存在于骨髓中,具有多向风化能力,在致癌物作用下及体外培养时出现恶性转化,移植后存在潜在致瘤性,并影响肿瘤增殖、生长,具有肿瘤组织趋向性。骨髓间充质干细胞对恶性肿瘤的发生、发展起重要影响。其有望成为恶性肿瘤基因治疗的载体。     

甲状腺功能减退症患者非酒精性脂肪肝的初步调查

目的了解甲状腺功能减退症患者血脂水平变化及非酒精性脂肪性肝病的发生情况。方法检测甲状腺功能减退症患者和对照人群甲状腺功能和血脂水平,同时进行肝脏B超或CT检查比较两组脂肪肝的检出率。结果甲状腺功能减退症患者比对照组血脂水平升高,脂肪肝检出率（35．7％对10．7％,P〈0．001）明显增加;血脂水平与甲状腺激素水平呈负相关。甲状腺功能减退伴脂肪肝患者与无脂肪肝患者比,在年龄、体重指数和甲状腺激素水平方面均无显著性差异,而脂肪肝患者血脂水平显著高于非脂肪肝患者。结论与对照组比,甲状腺功能减退症患者血脂水平升高,非酒精性脂肪性肝病的发生率增加。     

骨髓间充质干细胞移植对大鼠肝纤维化的作用

目的探讨骨髓间充质干细胞（MSCs）移植在大鼠肝纤维化形成过程中的作用。方法应用密度梯度离心结合贴壁培养法分离纯化雄性SD大鼠MSCs,分别在四氯化碳诱导大鼠肝纤维化模型的第1天、第6周、第8周以5×10^6的剂量经尾静脉注入同种雌性大鼠体内。各组大鼠均在MSCs移植4周后,评价干预组与对照组的生存状态,并用Scheuer炎症活动度评分法和SchmidM纤维化评分法评价肝脏病理情况。结果第1天移植MSCs,干预组12只大鼠中有6只肝脏炎症活动度评分≤1分,对照组11只中仅有1只,两组Scheuer评分均值分别为1．50和2．55（t=2．894,P=0．009）;SchmidM评分均值分别为0．75和0．82（t=0．217,P=0．83）。第6周移植MSCs,干预组和对照组在炎症活动度方面无明显差异,Scheuer评分均值分别为3．58和3．73（P=0．559）;在纤维化方面,干预组12只大鼠中有3只≥6分,对照组11只中则有7只≥6分,SchmidM评分均值分别为4．75和5．54（t=2．424,P=0．024）;干预组与对照组的腹水发生率分别为25％和45．4％（t=2．241,P=0．036）。第8周移植MSCs,干预组与对照组炎症活动、纤维化程度及腹水发生率均无明显差异,Scheuer评分的均值分别为3．64和3．92（P=0．113）;SchmidM评分均值分别为5．27和5．67（t=1．207,P=0．241）;腹水发生率分别为18．2％和25％（t=0．703,P=0．490）。值得注意的是,对照组有5／12出现异形细胞,而干预组未见一例。结论早期移植MSCs可减轻四氧化碳引起的肝脏炎症,改善大鼠的肝纤维化程度,但对肝硬化无作用,MSCs移植可以减少肝硬化大鼠异形细胞发生的现象值得进一步探讨。     

乙型肝炎病毒基因型、基础核心启动子和C区变异与干扰素疗效的观察

目的 探讨HBV基因型、基础核心启动子(BCP)和C区变异与IFNα抗病毒疗效的相关性.方法 选择IFNα-1b治疗6个月的HBeAg阳性慢性乙型肝炎(CHB)患者,随访6个月.应用限制性片段长度多态性(RFLP)法检测HBV基因型,PCR测定BCP、前C/C区核苷酸序列.计量资料采用t检验、方差分析,计数资料采用卡方检验、Fisher确切概率法,并进行多因素条件Logistic回归分析.结果 共39例CHB患者完成观察,治疗结束时,应答16例,占41.0%;随访结束时,应答者中持续应答12例,占30.8%,复发4例,占10.3%.其中B基因型29例,占74.4%,C基因型10例,占25.6%.基因型型别差异与IFNα-1b疗效无关.8例患者BCP区T1762/A1764双变异,占20.5%,与IFNα-1b疗效无相关.8例患者检出A1896变异,占20.5%,随访结束时获得疗效的3例A1896变异株感染者均复发.C区非淋巴细胞表位测序发现,15例患者L60V变异,占38.5%,14例为I97L变异,占35.9%.与60V比较,表现为60L的患者在随访结束时的HBeAg血清学转换率和HBV DNA阴转率明显低(Fisher确切概率法,P=0.0126、0.0069).与97L比较,表现为97I的患者在治疗结束时和随访结束时的HBV DNA阴转率明显低(Fisher确切概率法,P=0.0484、0.0024).Logistic回归分析显示,基因型、C区变异与IFNα-1b疗效无相关.结论 HBV基因型、BCP双变异与IFNα的疗效无关,C区非淋巴细胞表位L60V及I97L变异可能有利于IFNα的治疗.

Abstract：

Objective To investigate the association between hepatitis B virus (HBV)genotype, the mutations in HBV basic core gene promoter(BCP), pre C/C gene region and treatment response to interferon (IFN)α-1b. Methods Hepatitis B e antigen (HBeAg)-positive chronic hepatitis B (CHB) patients were treated with IFNα-Ib for 6 months and were followed up for 6 months after the end of treatment. Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP) was used for determining HBV genotype. HBV DNA was amplified by polymerase chain reaction (PCR) and analyzed for BCP and pre C/C gene region by sequencing. Measurement data were compared using t test and analysis of variance. Enumeration data were compared using chi-square test, Fisher exact probability test.Logistic regression analysis was utilized for multi-factor analysis. Results There were 39 patients who completed the treatment and follow up in this study. At the end of treatment, 16(41.0%) patients showed response to the IFNα-lb treatment. At the end of follow-up, four out of 16 patients who achieved on treatment response relapsed. Among 3a patients, 29 (74.4 %) were infected with genotype B and 10 (25. 6%) with genotype C. The treatment response rates were not significant different between the groups with different genotypes. The double mutation pattern (T1762/A1764) was found in eight (20. 5%) patients. The response rates to IFNα-lb treatment were not significant different between the group with and without double mutation pattern. A1896 mutation was detected in eight patients at baseline. Three of them became HBeAg negative at the end of treatment and returned to HBeAg positive during follow-up. The non-lyphocyte epitope mutations, L60V and I97L, were found in 15 patients (38. 5%) and 14 patients (35.9%), respectively. At the end of follow-up, the patients with 60V had a significantly lower HBeAg seroconversion rate and HBV DNA undetectable rate compared to the patients with 60L (Fisher exact probability test; P = 0.0126 and 0.0069,respectively). The HBV DNA undetectable rates in the patients with 97I were significantly lower than those in patients with 97L both at the end of treatment and the end of follow-up (Fisher exact probability test; P= 0.0484 and 0. 0024, respectively). Logistic regression analysis results showed that there was no association between the above viral mutations and the treatment response to IFNαlb. Conclusions There is no association between HBV genotype, BCP double mutation pattern and IFN-α treatment response. The non-lyphocyte epitope mutations, L60V and I97L, may have impact on IFN-α treatment response.     

肝细胞癌自发消退的机制研究

恶性肿瘤的自发消退(SRC)是一种罕见现象,1956年首次报道[1],较常见于恶性黑色素瘤、神经母细胞瘤、乳腺癌、肾细胞癌等.肝细胞癌(HCC)是最常见的恶性肿瘤之一,其发病率居世界第6位,病死率居世界第3位[2].HCC自发消退的发生率约0.406％[3].HCC自发消退的机制目前仍不明确,可能的机制分为两类:一是肿...     

戊型肝炎IgM抗体诊断试剂的临床应用评价

目的评价2种戊型肝炎病毒(HEV)IgM抗体诊断试剂的可靠性。方法用捕获法试剂(E2 IgM)和间接法试剂(GL IgM)对349例临床诊断为急性戊型肝炎及急性非甲~戊型肝炎患者的血清进行HEV IgM检测。同时结合其HEV RNA检测结果作为戊型肝炎的确认标准,以此为依据对2种HEV IgM诊断试剂和以往常用的ELISA试剂的可靠性进行评估。同时检测69例散发性急性肝炎患者血清的HEV IgM及甲型肝炎病毒(HAV)IgM,分析HAV IgM对HEV IgM检测可能造成的干扰。结果E2 IgM试剂的敏感性为98.2%,特异性为100.0%;GL IgM试剂的敏感性仅为60.0%,特异性为91.7%;而传统诊断方法的敏感性为77.9%,特异性仅66.0%,三者差异有统计学意义(P<0.05)。E2 IgM、GL IgM及传统诊断方法的总符合率分别为99.1%、85.5%和70.5%。HAV IgM有可能导致GL IgM试剂的假阳性。结论E2 IgM试剂是一种良好的戊型肝炎急性诊断试剂,在临床应用中优于GL IgM试剂和传统诊断方法。     

慢加急性肝功能衰竭患者接受腹腔穿刺术后严重出血并发症的观察

目的：分析慢加急性肝功能衰竭（ACLF）患者腹腔穿刺后严重出血并发症的发生率及其危险因素。方法前瞻性选取2010年1月至2013年12月在福建医科大学附属第一医院住院治疗的确诊为 ACLF 且进行1次以上腹腔穿刺的患者,观察术后腹腔或腹壁出血并发症的发生率。记录每次操作前3 d 内的指标。连续变量采用 t 检验,离散变量采用卡方检验,采用二元 Logistic 回归方法分析术后出血的危险因素。结果2010年1月至2013年12月入组185例 ACLF 患者,共进行525次腹腔穿刺术,其中289（55．0％）次为诊断性腹腔穿刺,236（45．0％）次为腹腔穿刺放腹水治疗。最终观察到16（3．0％）例出血事件,其中4例为腹壁血肿,12例为腹腔内出血。根据是否出现出血并发症,将所有患者分为出血组和未出血组,两组在年龄、性别、Child-Pugh 评分、穿刺腹水量、是否存在肝硬化基础、血小板计数、凝血酶时间等方面差异无统计学意义（均 P ＞0．05）。出血组 PT、国际标准化比值（INR）、活化部分凝血活酶时间（APTT）及终末期肝病模型（MELD）评分显著高于未出血组,纤维蛋白原水平则低于未出血组（均 P ＜0．05）。多因素回归分析提示,低纤维蛋白原血症是腹腔穿刺后出血的独立危险因素（OR＝0．105,95％CI ：0．018～0．608,P ＝0．012）。随着纤维蛋白原水平的下降,出血的风险随之增高,当纤维蛋白原≤0．8 g／L 时,出血风险高达11．76％（12／102）。结论低纤维蛋白原血症是 ACLF 患者腹腔穿刺后严重出血并发症的独立危险因素。     

106例非甲～戊型肝炎临床分析

目的:探讨非甲～戊型病毒性肝炎的临床特点及其可能的致病因素。方法:通过对106例非甲～戊型病毒性肝炎患者的临床表现及生化检测来探讨其临床特点,对部分病例进行HGV RNA及TTV DNA检测来探讨可能的致病因素,并对其中4例病情持续波动超过6个月、HBsAb( )或HBsAb( )兼HBcAb( )的患者进行肝组织活检和采用肝组织免疫组织化学法(免疫组化)检测HBsAg和HBcAg。结果:106例非甲～戊型肝炎的临床表现、重症化比率与一般的病毒性肝炎相似,慢性化比率较一般的病毒性肝炎高,女性发病率较一般的病毒性肝炎高;男:女约为2:1。27例用PCR法检测HGV DNA为阴性,其中10例同时用PCR法检测TTV DNA也为阴性。4例HBsAb( )或HBsAb( )兼HBcAb( )的慢性肝炎患者,肝组织活检病理学改变与临床诊断相符,免疫组化显示HBsAg和HBcAg均阴性。结论:106例非甲～戊型肝炎的临床表现与一般的病毒性肝炎相似;慢性化、重症化比率较一般的病毒性肝炎高;女性发病率较一般的病毒性肝炎高;HGV、TTV可能不是非甲～戊型肝炎的主要致病因素;HBsAb( )者,肝组织内无HBsAg和HBcAg...     

肝移植免疫抑制的进展

经过40多年发展,肝移植已成为终末期肝病的有效治疗手段,目前1年的生存率达80%以上。相对肺脏、心脏和小肠等器官而言,移植的肝脏不易被受者免疫系统攻击。