恶性疟原虫云南株富含组氨酸蛋白II部分基因的克隆和序列分析

目的：测定恶性疟原虫云南株富含组氨酸蛋白 Ｉ Ｉ部分序列,了解该虫株与其它虫株 Ｈ Ｒ Ｐ Ｉ Ｉ基因序列的差异。方法：采用 Ｐ Ｃ Ｒ 方法特异性扩增 Ｈ Ｒ Ｐ Ｉ Ｉ基因片段,并将该基因片段克隆于 Ｍ １３ 载体,用双脱氧链末端终止法进行测序,应用 Ｐ Ｃ Ｇ Ｅ Ｎ Ｅ软件对不同虫株恶性疟原虫 Ｈ Ｒ Ｐ Ｉ Ｉ进行基因序列分析。结果：我国云南株恶性疟原虫与 ７ Ｇ８ 及 Ｄ１０ 虫株 Ｈ Ｒ Ｐ Ｉ Ｉ基因有不同程度的差异,３ 虫株间 Ｈ Ｒ Ｐ Ｉ Ｉ氨基酸序列同源性为７０．３％ ,核苷酸序列同源性为 ６８．６％ 。结论：云南株与７ Ｇ８ 及 Ｄ１０ 虫株 Ｈ Ｒ Ｐ Ｉ Ｉ基因存在差异。     

恶性疟原虫乳酸脱氢酶活性测定及在药物疗效监测方面的初步观察

目的探讨疟原虫乳酸脱氢酶(Plasmodiumlactatedehydrogenase,pLDH)活性与原虫密度、培养时间的关系,以及在监测药物疗效等方面的作用。方法利用酶比色法对不同原虫密度、不同培养时间以及药物治疗前后患者的血样进行pLDH活性检测。结果pLDH的活性随恶性疟原虫感染率的提高、培养时间的增加而明显地升高,最大活性是在虫体培养36~48h之间,虫体主要处在裂殖体期和滋养体期;混合感染(恶性疟原虫和间日疟原虫)患者经药物治疗后血液中pLDH活性明显降低,治疗5d后已检测不到pLDH的活性。结论pLDH活性检测对于疟原虫克隆株鉴定、药物的疗效监测等方面具有一定的应用价值。     

抗恶性疟原虫重组HRP-Ⅱ单克隆抗体的制备与鉴定

采用恶性疟原虫重组富组氨酸蛋白 (HRP- )融合表达蛋白免疫 BAL B/ c小鼠 ,取脾细胞与 SP2 / 0细胞融合 ,经 3次 EL ISA筛选 ,共获得 6株分泌抗恶性疟原虫重组 HRP- 单克隆抗体的杂交瘤细胞株 (1B11、1D10、2 E7、3A3、3F9、4G5 ) ,用有限稀释法进行克隆、亚克隆及扩大培养 ,并用杂交瘤细胞经腹腔接种 BAL B/ c小鼠制备腹水。 6株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体 (Mc Ab)经琼脂双扩散鉴定均为 Ig G1亚类 ,Dot- EL ISA及 Western blot分析显示 6株 Mc Ab都能与重组 HRP- 抗原发生特异性反应 ,但其中只有 2 E7和 3A3在 Dipstick免疫胶体金反应中能与恶性疟原虫培养上清中的天然 HRP- 结合     

恶性疟原虫基因组文库的构建及未知抗原cDNA片段的筛选

恶性疟原虫FCC1／HN株基因组DNA经Sau3AⅠ部分酶切，取14－23kb片段连接入GEW-11λ噬菌体置换型载体构建基因组文库。所得重组体数目为7.3×104pfu，近达构建完整恶性疟原虫基因组文库理论值的10倍。随机挑取该库10个噬菌斑，抽提λDNA，用XhoⅠ酶切，得到14－23kb的插入片段和载体双臂，符合建库要求．以抗体筛选恶性疟原虫cDNA表达文库所获得的未知抗原cDNA片段为探针，在其中筛选到了阳性克隆，为阐明该未知cDNA对应的基因奠定了基础．     

Construction of a vaccinia virus vectored multi--epitope live vaccine candidate for Plasmodium falciparum

Theemergenceandrapidspreadofdrug--resistantPlasmodiumfalciparumandinsecticide--resistantmosquitoeshaveseriouslyimpairedtheeffectivenessofthecommontoolsformalariacontrol.Theneedsforaneffectivevaccineisthusurgentandofprimeimportancetothepreventionofmalaria[lj.Inconsiderationofseveralmajorobstaclestothedevelopmentofaneffectivevaccine,especiallythevariabilityofantigensandthespecifityofstageandspecies(strain)ofmalariaparasites,thelivevaccinebasedoneukeryoticexpressionandmultiplegenesispaidattention…     

恶性疟原虫保护性抗原复合基因——痘苗病毒重组活疫苗 …

用恶性疟原虫－痘苗病毒重组活疫苗候选株的家兔免疫血清及纯化的ＩｇＧ进行了恶性疟原虫的体外培养抑制试验，并与该目的基因的原核表达蛋白及全虫抗原进行了比较。结果在疟原虫的第一个生长周期内，重组痘苗病毒组的免疫血清抑制虫作用最强，其次为全早主原核蛋白组，ＩｇＧ则在第一及第二个生长周期均以原核表达蛋白组抑虫作用最强，其次为重组痘苗病毒及全虫抗原组，说明重组痘苗病毒免疫血清及ＩｇＧ具有一定的体外抑制恶性疟原     

鼠疟模型作为恶性疟原虫多表位疫苗保护性的探索试验

目的为寻找恶性疟原虫基因工程多表位疫苗保护性评价的模型动物，利用小鼠约氏疟原虫(Plasmodiumyoelii)及小鼠伯氏疟原虫(Plasmodiumberghei)模型对本实验室构建的恶性疟原虫(Plasmodiumfalciparum)多阶段、多表位基因工程候选疫苗进行了体内保护性及免疫模式探索试验。结果在约氏疟原虫模型，先用该疫苗基因的大肠杆菌表达蛋白免疫，后用含同一基因的重组痘苗病毒加强免疫组，与野生型痘苗病毒免疫组及空白对照组相比，小鼠的死亡时间延长(P<0.01)。结果初步显示，约氏疟原虫鼠疟模型可用作该基因工程多表位恶性疟原虫候选疫苗的保护性评价。     

恶性疟原虫保护性抗原复合基因——痘苗病毒重组活疫苗株免疫猴血清对恶性疟原虫的体外抑制试验

用重组痘苗病毒、非重组对照痘苗病毒免疫猴血清及正常对照猴血清进行了恶性疟原虫的体外培养抑制试验。结果培养渡中加人重组痘苗病毒免疫猴血清后，疟原虫感染率逐渐下降，第4天后原虫感染率维持在较低水平(0．1％以下)，第12天后血片中没有原虫检出；加入非重组对照痘苗病毒免疫猴血清的培养瓶中疟原虫感染率的变化与正常对照猴血清无明显的差异，说明重组痘苗病毒免疫猴血清对体外培养的恶性疟原虫具有一定抑制作用。     

抗恶性疟SERA噬菌体抗体库的构建及单链抗体的筛选与鉴定

目的 研制用于疟疾简便,快速诊断试剂盒的试剂。方法 利用噬菌体抗体库技术,构建抗恶性疟原虫丝氨酸重复抗原（SERA）的噬菌体抗体库。经3轮“吸附－洗脱－扩增”的富集反应后,从中筛选抗SERA的阳性克隆株,并进行可溶性诱导表达,最后用ELISA和Western blot等进行鉴定。结果 成功地构建了中等库容的噬菌体抗体库,并从中筛选到9株抗SERA的阳性克隆株,表达的单链抗体的相对分子质量大小约为31kDa,能与SE47‘抗原起特异性结合反应。结论 成功地构建了抗SE47‘的噬菌体抗体库,从中筛选制备的单链抗体为研制疟疾快速诊断试剂盒奠定了基础。     

恶性疟原虫云南株环子孢子蛋白部分基因的克隆和序列分析

目的：测定我国恶性疟原虫环子孢子蛋白部分基因序列，了解我国虫株与其它虫株CS蛋白基因序列的差异。方法：采用PCR方法特异性扩增CS蛋白基因片段，并将该基因片段克隆于M13噬菌体，取3个阳性克隆制备M13－CSP单链DNA，用双脱氧链末端终止法测定该基因片段核苷酸序列。应用PCGENE软件对六个虫株CS蛋白基因序列进行了一系列比较分析。结果：我国恶性疟原虫云南株（PFD－3／YN）与T4、Welcome、NF54、3D7及7G8等虫株CS蛋白基因序列有不同程度的差异，其中一个有意义核苷酸突变发生在P．fTh／Tc抗原表位区。结论：云南株与其它虫株CS蛋白基因存在差异。