nanoLC-MS/MS检测未成熟树突状细胞与其外泌体蛋白组分差异的初步研究

  目的  采用一种相对快速、样品需求量少的纳升级液相色谱串联质谱（nanoLC-MS/MS）法初步探究未成熟树突状细胞DC2.4及其来源的外泌体（DC-Exo）蛋白组分差异。  方法  收集DC2.4细胞培养基上清,采用梯度离心法分离DC-Exo,使用蔗糖密度梯度超速离心进一步纯化而获得DC-Exo测定样品。采用Bradford法测定其蛋白总量,使用动态光散射法和透射电镜分别对DC-Exo粒度分布和形态进行考察。采用FASP酶解法制备DC2.4细胞和DC-Exo待测蛋白样品。nanoLC-MS/MS检测待测样品:采用μLPickUp上样模式,上样量仅1 μg,Transport liquid及Micro A相均为0.05%三氟乙酸-2%乙腈（V/V）aq.;nanoLC使用Acclaim? PepMap RSLC分析柱,流动相为（A）0.1%甲酸水溶液（V/V）和（B）0.08%甲酸-80%乙腈（V/V）,采用梯度洗脱,流速为0.3 μL/min;MS/MS采用LTQ Obitrap双重质谱,使用APCI nanospray离子源,“一拖十”数据采集模式。得到结果以Uniport Mouse (Fasta文件) 为蛋白数据库,采用SQUEST对DC2.4细胞及DC-Exo蛋白质谱信息进行搜索和匹配,并整理分析。  结果  得到产量较高、粒径为40～200 nm的DC-Exo。用FASP酶解法处理得到的DC2.4细胞和DC-Exo冻干蛋白样品复溶后可直接上样,且上样量仅需1 μg。搜库结果显示,DC2.4细胞含蛋白998种,其中高表达227种,特有蛋白535种;DC-Exo仅含蛋白348种,其中特有高表达18种;两者共有蛋白为306种,共有高表达蛋白7种。  结论  本实验采用的nanoLC-MS/MS法所需进样量少,可相对快速地初步检测DC2.4细胞及其外泌体的蛋白组分差异。     

大肠息肉临床与病理相关性研究

目的探讨大肠息肉患者的年龄、息肉发生部位、大小和息肉病理类型及癌变的相关规律。方法分析我院2005年1月-2010年12月电子肠镜检查中检出的大肠息肉患者的临床表现、内镜特点及病理资料。结果在4 630例肠镜检查患者中,发现大肠息肉824例,检出率为18%,其中,腺瘤性息肉495例,占60.1%;炎症性息肉193例,占23.4%;增生性息肉125例,占15.2%;幼年性息肉11例,占1.3%。不同病理分型的息肉分布部位比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。混合性腺瘤平均直径明显大于绒毛状腺瘤和管状腺瘤。本组共有25例息肉发生癌变,癌变率为3.03%。癌变患者息肉病理组织学均为腺瘤型,直径≥1.1 cm者21例,占84%。结论中老年人大肠息肉发病率较高;病理类型以腺瘤性息肉、炎症性息肉较常见;息肉直径≥1.1 cm或混合性腺瘤容易癌变;建议要重视36岁以后人群的肠镜检查。     

老年多脏器功能不全综合征--关于"发热伴轻度腹胀7天"的讨论

该患者的病程可分为三个阶段，第一阶段患者以发热、腹胀起病，临床表现符合不全肠梗阻，经灌肠、禁食、胃肠减压、补液治疗后肠梗阻缓解。肠镜检查未见异常，后未再出现梗阻表现，推断梗阻原因可能为粪块阻塞。此阶段应用抗感染治疗体温稍有下降但未完全恢复正常；第二阶段患者恢复进食后体温明显升高，曾有肠炎表现，血淀粉酶增加，影像学上有胆囊多发结石，考虑患者有胰腺炎，患者一般状况逐渐转差；第三阶段患者病情进展迅速，血尿淀粉酶升高明显，很快出现感染中毒性休克，多脏器功能不全表现（肝、肾、心、肺、血液、中枢系统），DIC，行持续血液滤过及呼吸机辅助治疗后，患者血流动力学情况好转，生命体征平稳，同时给予强力抗感染、保肝、补充凝血因子、小量抗凝、抑制胰酶分泌等治疗，患者各项指标逐渐恢复。     

二氢卟吩和全氟己烷共载脂质体的制备及其体外性质

目的 制备共载光敏剂二氢卟吩(Ce6)和氧载体全氟己烷(PFH)的长循环脂质体,对其进行表征,并进行小鼠黑色素瘤细胞摄取的初步研究.方法 采用薄膜超声分散法制备Ce6和PFH共载的PEG化长循环脂质体(Ce6-PFH@PEG-Lip),运用单因素筛选法依次筛选探头超声功率、有机溶剂种类、卵磷脂与胆固醇及DSPE-PEG...     

利福平固体脂质纳米粒的体外细胞摄取研究

目的 研究利福平固体脂质纳米粒的制备方法和体外细胞摄取.方法 采用薄膜分散法制备利福平固体脂质纳米粒(RFP-SLNs);用扫描电镜观察其形态,激光粒度仪测定其粒径大小和Zeta电位;用MTT法测定其对RAW 264.7、A549细胞的毒性,HPLC法测定其在这两种细胞中的摄取量.结果 RFP-SLNs的外观形态圆整,...     

血清N末端B型钠尿肽原在心功能评价及慢性充血性心力衰竭诊断中的初步应用

目的　通过观察血清N末端B型钠尿肽原 (NT proBNP)浓度与心功能分级 (NYHA分级 )、左室射血分数 (LVEF)等临床指标之间的关系 ,研究NT proBNP对心功能的评价作用及其在诊断慢性充血性心力衰竭中的初步应用。方法　选择我院 2 0 0 3年 10月至 2 0 0 4年 4月门诊及住院慢性心衰患者 111例 ,正常对照组 39名。采用电化学发光法测定血清NT proBNP浓度 ,超声心动测定受试者LVEF等指标。依据美国纽约心脏病协会 (NYHA)分级方案对心衰患者进行心功能分级。心衰诊断以临床医生依据病史、症状、体征、客观检查等作出的综合判断为金标准。结果　心衰组NT proBNP中位数 (316 5 pg/ml)显著高于对照组 (5 6 2 1pg/ml) (P <0 0 1)。NYHA分级与NT proBNP呈显著正相关 (r =0 818,P <0 0 1) ,LVEF与NT proBNP呈显著负相关 (r =- 0 6 36 ,P<0 0 1)。受试者工作特征 (receiveroperatingcharacteristics,ROC)曲线分析 ,NT proBNP诊断心衰和左室收缩功能不全的诊断界值 (cutoff值 )分别为 12 7 2 pg/ml和 6 6 7pg/ml,此时诊断心衰和左室收缩功能不全的灵敏度和特异度分别为 73%、10 0 %和 91 7%、85 7% ;诊断心衰的阳性预测值为 10 0% ,阴性预测值为 5 7%。结论　NT proBNP可以客观准确评价心功能 ,对心衰及左室收缩     

1例门诊患者检查部位错误的SHEL分析

运用SHEL模型对1例门诊患者检查部位错误事件发生的软件、硬件、环境和人为因素进行风险识别和系统改进。通过完善查对流程,加强信息准确传递,优化门诊信息系统,实现门诊患者分流就诊,加强教育培训等方式提升诊疗安全性。改进措施实施后,未发生同类事件;医院总体纠纷发生率从2015年的0.94‰持续下降至2018年的0.6‰,患者满意度始终保持在90%以上。建议将信息系统作为质量管理手段,采取多种措施鼓励不良事件上报,确保患者安全。     

协作学习理论指导下的患者安全探索与实践

患者安全行为管理是复杂的系统工程,在现今医学知识条件下,医疗机构间对于患者安全认识存在差异,需要全社会共同关注。医院管理者需借助现代医院管理模型,构建协作学习环境,衔接多要素间的逻辑关系并形成系统。中国患者安全协作网北京工作组在协作学习理论的指导下,积极探索跨机构间的患者安全协作学习,形成开放动态、优势协调、良性互动的患者安全协作体系,推动国内患者安全协作管理向科学化、现代化、精细化的转变。     

塞来昔布对人肝癌细胞增殖的抑制作用

目的 观察塞来昔布对肝癌增殖的抑制作用.方法 以人肝癌细胞株SMMC-7721为研究对象,四唑氮蓝还原法(MTT)观察不同浓度和作用时间的塞来昔布对细胞增殖的抑制作用,流式细胞技术检测细胞周期,并用小鼠肝癌细胞株H22建立昆明鼠移植瘤模型,观察塞来昔布对移植瘤生长的抑制效果.结果 MTT显示塞来昔布对人肝癌细胞SMMC-7721生长有显著的抑制作用,且呈现出时间和剂量依赖性;塞来昔布(40 μmol/L)作用于SMMC-7721细胞36h后,G1期细胞比率由44.7%上升至49.9%,S G2/M期细胞比率由55.4%下降至50.1%,细胞增殖受抑制.在体动物实验表明,塞来昔布对移植瘤的生长和局部转移有显著的抑制效果.结论 环氧合酶-2抑制剂塞来昔布对不同来源的肝癌细胞株均有增殖抑制作用,可能是预防和治疗肝癌的重要候选药物之一.     

PPARγ在非小细胞肺癌中的表达及其在预后评估中的意义

目的观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达情况,并探讨其在预后评估中的意义。方法采用免疫组织化学法检测PPARγ在35例肺癌组织及10例癌旁正常肺组织中的表达,并对35例患者进行随访,统计生存期及5年生存率。结果肺癌组织中PPARγIOD值为(2 755.87),其表达显著高于癌旁正常肺组织的IOD值(225.95)(P0.05)。淋巴结转移组PPARγIOD值(3 354.24)明显高于无淋巴结转移组IOD值(1 299.87)(P0.05)。PPARγ表达与术后TNM分期有关,Ⅲ、Ⅳ期PPARγIOD值(3 354.24)显著高于Ⅰ期IOD值(865.60)及Ⅱ期患者IOD值(2 307.68)(P0.05)。预后分析显示NSCLC患者死亡组PPARγIOD值(3 780.42)表达高于生存组IOD值(980.50)(P0.05);PPARγ低表达患者的生存期(64.16个月)显著长于高表达者(29.76个月)(P0.05)。结论 PPARγ表达与NSCLC的临床病理特征及预后密切相关。PPARγ检测对NSCLC患者的病情诊断和预后评估有一定价值。