日本血吸虫TOM34基因的克隆和表达分析

目的 克隆、表达日本血吸虫线粒体外膜转运酶34基因(SjTOM34),并对其生物特性进行初步研究。方法 应用RT-PCR方法从42 d日本血吸虫成虫cDNA中扩增SjTOM34基因,并进行生物信息学分析。应用实时定量RT-PCR方法分析了SjTOM34基因在日本血吸虫不同发育阶段虫体中的表达状况。构建了SjTOM34基因重组原核表达质粒,并在大肠杆菌中进行表达,Western blotting分析了重组抗原的免疫原性及该蛋白在不同发育阶段虫体中的表达情况,利用免疫组化方法观察了该蛋白在虫体内的分布情况。结果 获得了SjTOM34的基因序列,其开放阅读框(ORF)为1 083 bp。该基因在所检测的不同发育阶段童虫和成虫中均有表达,其中在35 d虫体中的表达量略高于其他时期的虫体。成功构建了重组的原核表达质粒并且在大肠杆菌中获得表达,重组蛋白在上清和沉淀中都有存在,并且具有较好的免疫原性,在所检测的各时期虫体中均可检测到该蛋白的存在,并且主要分布在虫体的实质组织中。结论 获得了日本血吸虫SjTOM34基因,初步明确了该基因在日本血吸虫童虫和成虫中的表达情况,及在成虫中的分布。     

利用RNAi和表达谱芯片分析日本血吸虫Sj34.9基因的功能

目的 分析日本血吸虫新基因Sj34.9的功能, 为进一步研究该基因提供依据。方法 采用RNA干扰 （RNAi） 技术对Sj34.9基因在血吸虫体内的表达进行干扰, 利用血吸虫寡聚核苷酸表达谱芯片分析Sj34.9基因表达沉默后血吸虫基因的表达情况。结果 Sj34.9基因RNAi组与对照组相比, 显著差异表达的基因共378个, 其中上调基因202个, 下调基因176 个; 通路分析显示, 表达差异基因主要与信号转导、 信号分子间相互作用及各类物质代谢有关; 基因本体论分类结果显示,多数基因与分子间结合、 膜构成、 细胞过程和机体生长发育及代谢相关。 结论 Sj34.9基因可能对日本血吸虫的形成、 生长、 发育、 调节、 代谢等具有重要作用。     

日本血吸虫童虫期体被蛋白Th细胞表位预测及初步鉴定

目的预测并鉴定日本血吸虫童虫体被蛋白分子的Th细胞表位。方法利用在线服务器分别对有关序列进行跨膜区与信号肽的预测分析;采用结合基序扫描与计分矩阵等算法,以及基于多种分子动力学算法的配体受体相互对接的分子建模方法等进行Th细胞表位预测;人工合成肽采用以多聚赖氨酸为核心的含4个表位肽分支臂的复合抗原多肽;表位肽刺激免疫鼠脾淋巴细胞增殖效果的鉴定采用改良的MTT法。结果从373条日本血吸虫肝期童虫体被蛋白序列中筛得14条具有开放阅读框及信号肽结构的序列;预测得到至少与小鼠的1个MHCⅡ类分子结合的5个15肽表位序列;淋巴细胞增殖试验初步鉴定获得了1个SSLVISYSTVDRLVC（AY815893）候选体被蛋白Th细胞表位。结论初步鉴定了1个潜在的体被蛋白Th细胞表位,为进一步筛选抗血吸虫保护性Th细胞表位提供了理论和实验依据。     

血吸虫受发育调节的相关蛋白及其功能的研究

血吸虫生活史各阶段可作为血吸虫疫苗和药物介入的靶阶段。对血吸虫不同发育阶段蛋白分子和基因表达的动态变化的了解，有助于探索其生长发育的机制，为研制有效的阻断传播的疫苗和新的药物提供科学指导。本文就血吸虫受发育调节而呈阶段性表达的蛋白及其功能方面进行综述。     

快速简便电印渍装置的制作与应用

<正> 印渍术(Blotting)是近十多年来发展的新生物技术之一,它结合了凝胶电泳的高分辨率和酶染色 技术的高灵敏度,结果又能长期保存。目前电印渍装置多为电洗脱式,价格昂贵,需大量试剂和较长的转移时间。我们参考Svoboda等人的设计原理自制一套以碳为阳极,铜皮为阴极的印渍装置,报道如     

免疫信息学在抗原虫病疫苗研发中的应用进展

进入新世纪以来，原虫的基因组计划取得了很大的进展。其中，恶性疟原虫（Plasmodiurn falciparum）、约氏疟原虫（P．yoelii yoelii）、微小隐孢子虫（Cryptosporidium parvum）和人隐孢子虫（C．hominis）、硕大利什曼原虫（Leishmania major）、克氏锥虫（Trypanosoma cruzi）、布氏锥虫（T．brucei）、小泰勒虫（Theileriaparva）、     

血吸虫核受体的研究进展

核受体在后生动物中作为一类重要的转录调控因子,在一系列重要的生化过程中发挥重要的作用,包括细胞分化和增殖。核受体含共有的蛋白结构,包含一个N端-A/B区, 一个 高度保守的 DBD, 一个铰链区(D 区)和一个C-端 LBD区。到目前为止,寄生扁形动物中的核受体,只在曼氏血吸虫和日本血吸虫中有报道。本文对近年来血吸虫的核受体的研究成果做简要综述,以为今后更进一步的研究提供参考。     

日本血吸虫肌动蛋白cDNA的克隆表达及其免疫保护功能

根据曼氏血吸虫肌动蛋白cDNASmAct2设计一对引物,以日本血吸虫中国大陆株成虫mRNA为模板,用RT-PCR法扩增出一大小为1131bp的cDNA片段.测序后分析序列推断该片段为编码肌动蛋白基因的完整阅读框cDNA,与SmAct2cDNA序列同源性为92%.将其克隆到表达载体pET28a(+)中,在大肠杆菌BL21中获得了较高量的表达,融合表达产物分子量约为43kDa.利用日本血吸虫成虫粗抗原免疫大白兔所得抗血清对该表达产物进行Western印迹检测,在预测位置出现了明显的识别条带,说明所克隆的cDNA表达产物具有良好的抗原性.用该表达产物免疫昆明系小鼠,攻击血吸虫尾蚴以进行保护性实验,结果其减虫率为28.4%,减卵率为29.2%,初步结果显示血吸虫肌动蛋白具有一定的免疫保护功能.     

日本血吸虫副肌球蛋白小鼠免疫试验

应用生物化学方法从日本血吸虫成虫中提取虫体副肌球蛋白,并把它结合佐剂FCA/FIA或BCG免疫两批BALB/c小鼠,获得了32.18%—48.52%的减虫率,但统计学上大都无显著差异.两次实验结果还表明,应用虫体副肌球蛋白结合FCA/FIA进行肌肉注射,和应用等量抗原结合BCG皮内注射免疫的BALB/c小鼠,获得的减虫率相当.     

亚洲璃眼蜱唾液腺差异表达基因GP15的克隆和分析

目的 通过扩增Ha7．7，获得包含该EST的基因全长，以便研究该基因的生物学功能。方法 以Ha7．7-GSP-和Ha7．7-GSPz和Ha7．7-GSP。为引物，RACE法扩增亚洲璃眼蜱雌成蜱唾液腺总RNA，获得基因的5’-端。根据Ha7．7和5’-端序列设计全长引物（Ha7．7-FLP^＋和Ha7．7-FLP-），扩增cDNA第1链获，得全长cDNA。结果 分析表明，基因大小为449bp，由吸血诱导亚洲璃眼蜱成蜱唾液腺表达。结论 与数据库资料比对显示，GP15为新纪录（Genbank登录号DQ020265）。