抗肝癌hdsFv融合hEDN重组免疫毒素对体外培养的人肝癌细胞的杀伤作用

目的：探讨重组免疫毒素hdsFv-hEDN在大肠杆菌中的可溶性表达和纯化，观察其体外杀伤作用。方法：利用IPTG诱导hdsFv-hEDN免疫毒素在大肠杆菌中的表达。诱导转化菌经超声碎菌、离心、Ni-NTA Agarose亲合层析等步骤纯化，并通过SDS-PAGE和Western-blot进行分析及检测。采用MTT比色法观察其对人肝癌细胞的杀伤作用。结果：IPTG诱导后．hdsFv-hEDN在大肠杆菌中获得了可溶性表达，表达量为8％。表达产物纯化后，纯度达到基本均一。MTT结果表明，其对人肝癌细胞具有一定的杀伤作用。结论：本研究实现了hdsFv-hEDN重组免疫毒素在大肠杆菌中的可溶性表达及纯化，获得了具有一定杀伤作用的抗肝癌重组免疫毒素。     

人宫颈癌组织放射治疗后原癌基因c-fos的表达

目的 探讨放疗前、后人宫颈癌组织原癌基因c-fos表达的变化及意义。方法 取临床确诊为宫颈鳞状细胞癌患者的活检组织标本共18例，其中放疗前8例，放疗后10例，在多聚甲醛固定的活检癌组织冰冻切片上，进行Fos蛋白的免疫组织化学染色。结果 放疗前的宫颈 组织内，多数癌细胞呈Fos免疫染色阳性；照射（30－40Gy)后的宫颈癌组织Fos免疫染色显著降低（P＜0.01），多数癌细胞无Fos染色，但放疗前、后间质细胞的Fos免疫反应无明显变化。结论 放射明显抑制宫颈癌细胞的Fos表达，Fos的表达状态可作为放射治疗中评价宫颈癌细胞增殖的分子指标之一。     

眼附属器淋巴瘤组织病理学及免疫表型研究

目的 探讨眼附属器淋巴瘤的临床特点，组织学分型及免疫表型。方法 收集眼附属器淋巴瘤病例33例。采用HE染色常规观察形态学特点。采用多种抗体标记B淋巴细胞，行T细胞鉴别，检测细胞增殖活性及探讨B细胞起源，进行免疫组织化学染色诊断和鉴别诊断，判定免疫表型，细胞分化及增殖状态。结果 29例（87.9%)瘤细胞B细胞标记物CD20，CD79a阳性，并出现k或λ的克隆性增生，诊断为结外边缘区B细胞淋巴瘤，黏膜相关淋巴组织型（MZL-MALT）。2例（6.1%)诊断为弥漫性大B细胞淋巴瘤。1例（3%）为组织学典型的浆细胞瘤分化，1例（3%）为此部位极为罕见的T细胞淋巴瘤，免疫表型为T细胞分化。结论 MZL-MALT型淋巴瘤是眼附属器淋巴瘤中最常见的一类，免疫组化抗体标记在诊断和鉴别诊断中起重要作用，其他类型的淋巴瘤较少见。     

抗肝癌单链免疫毒素的构建、表达及导向研究

目的 制备高效、低毒的抗肝癌单链免疫毒素。 方法 将人突变型肿瘤坏死因子α(mTNF α)与人源化抗肝癌单链抗体hscFv25基因连接,构建pGEx4T-1/hscFv25-mTNF α融合蛋白原核表达载体,在大肠杆菌中表达并纯化目的蛋白,经western blot鉴定之后,进行荷肝癌(SMMC-7721)裸鼠体内初步抑瘤实验,并对治疗后裸鼠肿瘤组织进行抗TNF α的免疫组织化学染色。 结果 原核表达载体pGEX4T-1/hscFv25 mTNF α融合蛋白的表达量占细菌总蛋白的12％,hscFv25-mTNFα治疗组对荷肝癌裸鼠的有效率为5/5,其中2/5为完全缓解,3/5为部分缓解,疗效明显高于mTNFα对照组(F=8.70,P<0.05),治疗组裸鼠的肝、肺等组织中未见转移性病灶,经hscFv25-mTNFα治疗后的肿瘤组织,呈TNFα弥漫阳性反应,阳性颗粒主要位于瘤细胞的胞质中。 结论 hscFv25-mTNFα是高效、低毒的抗肝癌单链免疫毒素。     

汉坦病毒体外感染乳大鼠大脑皮层星形胶质细胞

目的 证实乳大鼠大脑皮层星形胶质细胞是汉坦病毒属(HV)汉滩病毒(HTNV)和汉城病毒(SEOV)感染的靶细胞,观察病毒感染星形胶质细胞后的动态变化.方法 建立乳大鼠大脑皮层星形胶质细胞的体外培养体系,用HTNV 76-118和SEOV L99分别感染乳大鼠大脑皮层星形胶质细胞,免疫荧光染色、Western印迹和RT-PCR检测病毒感染细胞后病毒NP和S基因片段的变化.结果 成功建立了乳大鼠大脑皮层星形胶质细胞的体外培养体系,并通过免疫荧光染色、Western印迹和RT-PCR证实HTNV 76-118和SEOV L99可以感染离体培养的乳大鼠大脑皮层星形胶质细胞,随感染时间推移,病毒感染细胞数和病毒量显著增加.结论 乳大鼠大脑皮层星形胶质细胞可作为HTNV和SEOV感染的靶细胞.这为研究肾综合征出血热发病机制提供了实验平台.     

核呼吸因子-1在正常发育和视觉剥夺大鼠视皮层内的表达

目的:观察核呼吸因子-1(NRF-1)在正常发育及视觉剥夺大鼠视皮层内的表达.方法:构建视觉剥夺大鼠模型,利用半定量:PCR、Western blot及免疫组织化学的方法检测NRF-1在正常发育及视觉剥夺大鼠视皮层内的差异表达.结果:通过以上方法均可检测到视觉剥夺大鼠视皮层内NRF-1表达明显降低.结论:NRF-1的基因转录及蛋白表达水平依赖于正常视觉信号的刺激,异常的视觉经验使视皮层神经元兴奋性降低,造成NRF-1表达的明显下调.     

牛蛙核糖核酸酶对体外培养的人肝癌细胞的杀伤作用

目的：利用大肠杆菌系统表达牛蛙核糖核酸酶（RC—RNase），观察其对人肝癌细胞的体外杀伤作用。方法：构建PE-q32-RC—RNase重组原核表达载体，转化人大肠杆菌BL21（DE3）plyS中并利用IPTG诱导表达。工程菌经超声碎菌、离心后，表达产物在变性条件下经Ni—NTA—agzrose亲合层析法纯化及复性，细胞毒试验检测其对体外培养的人肝癌细胞的杀伤活性。结果：经IPTG诱导后，大肠杆菌中表达的RC—RNase融合蛋白相对分子量（Mr）约为31KD。与预期大小基本相一致，主要以包涵体的形式存在。经纯化及复性后，获得纯度达到95％以上且对体外培养的人肝癌细胞具有明确杀伤活性的RC—RNase融合蛋白。结论：在大肠杆菌中表达的RC—RNase融合蛋白对体外培养的肝癌细胞具有一定的杀伤作用。     

放射治疗对人宫颈癌组织的增殖细胞核抗原表达的影响

目的 探讨放射前，后人宫颈癌组织增殖细胞核抗原（PCNA）表达的变化，方法 在多聚甲醛固定的活检癌组织冰冻切片上，进行PCNA的免疫组织化学染色。结果 放疗前的宫颈癌组织内，多数癌细胞呈PCNA免疫染色阳性；照射（30－40Gy)后，多数癌细胞无PCNA染色，但间质细胞的PCNA免疫染色明显升高，大量间质细胞则呈中等或强阳性染色。结论 放射抑制宫颈癌细胞的PCNA表达的同时，诱导间质细胞的PCNA表达，提示PCNA的表达状态可作为放射治疗中评价宫颈癌细胞增殖和间质组织修复的分子指标之一。     

桥本甲状腺炎中Bcl-2和Bax与PCNA关系的免疫组化双标法

目的　观察 Bcl- 2和 Bax与 PCNA在桥本甲状腺炎(HT)中表达及分布的关系 .方法　以 16例毒性甲状腺肿(NTG)为对照 ,采用 TUNEL及免疫组织化学双标记法分别检测 16例 HT患者甲状腺标本中的细胞凋亡水平及 PCNA与 Bcl- 2和 Bax的分布 .结果　凋亡率 (AR)在 HT组为(34.0± 14 .7) % ,NTG组为 (0 .9± 0 .6 ) % ;增殖率 (PR)分别为 (8.5± 3.6 ) % ,(4.2± 2 .4 ) % ;AR/PR比值各为 4 .5± 2 .4和 0 .5± 0 .9.显示 AR,PR及 AR/PR比值在 HT组均显著高于 NTG组 (P<0 .0 1) .在 HT中 ,Bcl- 2 ,Bax免疫染色阳性率分别为 88%和 82 % ;共表达细胞占 Bcl- 2或 Bax阳性细胞的比例各为 33%和 16 % .结论　 HT中甲状腺滤泡细胞凋亡与增殖活动均活跃 ,凋亡水平增高更为显著 ;浸润淋巴细胞增殖活跃 ,凋亡少见 .部分甲状腺滤泡细胞 PCNA与 Bcl- 2或Bax共表达 .其凋亡和增殖的失平衡可能与调节蛋白 Bcl- 2或 Bax的作用有关 ,也可能是 HT病理改变的主要机制之一     

自然感染肾综合征出血热病毒大鼠组织中病毒抗原及抗体的定…

作应用小鼠抗肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）单克隆抗体（ＭＡｂｓ）对经检测清抗体阳性率为２８％的５０只大鼠组织中病毒抗原及抗体（内源性免疫球蛋白，ＥＩｇ）进行了研究。结果：５０只大鼠，１５只仅检测到病毒抗原阳性，１０只仅检测到ＥＩｇ阳性，１８只抗原、ＥＩｇ均阳性，７只抗原、ＥＩｇ均阴性，其中的血清抗体阳性鼠分别有２，６，３，３只。总抗原阳性率为６６％，ＥＩｇ阳性率为５６％。病毒抗原分布于心肌细胞