ShRNA沉默ROCK1和ROCK2的表达对缺氧致大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的许多研究表明,心肌细胞的凋亡与心衰和冠心病等心血管疾病关系密切。另外有研究表明,ROCK1(Rho-associated coiled-coil protein kinase-1)和ROCK2的表达下调可抑制某些细胞的凋亡。为此,我们将靶向ROCK1和ROCK2基因的shRNA转染大鼠心肌细胞,以沉默ROCK1和ROCK2的表达,探讨ROCK1和ROCK2在缺氧致心肌细胞凋亡中的作用。方法 (1)原代培养大鼠心肌细胞,并用抗α-横纹肌肌动蛋白免疫组化法进行鉴定。(2)构建并鉴定靶向大鼠ROCK1和ROCK2基因的重组质粒ROCK1-shRNA和ROCK2-shRNA各3个。(3)用脂质体转染法将ROCK1-shRNA和ROCK2-shRNA瞬时转染心肌细胞,48 h后提取蛋白,用Western Blotting检测ROCK1和ROCK2蛋白的表达量,并筛选出沉默效率最高的shRNA。(4)将沉默效率最高的ROCK1-shRNA和ROCK2-shRNA瞬时转染心肌细胞,48 h后给予缺氧6 h处理。实验分为5组:①空白对照组;②缺氧组;③缺氧+阴性对照shRNA组;④缺氧+ROCK1-shRNA;⑤缺氧+ROCK2-shRNA组。缺氧结束后,用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白报告基因表达情况。(5)转染和缺氧处理后收获细胞,用Western Blotting检测Caspase3、p-PI3K和PI3K的表达情况,用倒置显微镜观察心肌细胞搏动频率与节律,用全自动生化分析仪测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)含量,用MTS检测细胞存活率,用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 (1)鉴定证实大鼠心肌细胞原代培养成功。(2)Western Blotting的结果显示,shRNA转染能有效抑制ROCK1和ROCK2基因的表达,其中ROCK1-shRNA1和ROCK2-shRNA2的沉默效率最高。(3).荧光显微镜发现,在转染了ROCK1-shRNA和ROCK2-shRNA的细胞中观察到绿色荧光,即转染成功。(4)缺氧损伤后心肌细胞搏动频率较对照组明显减慢,搏动幅度减弱,节律不规整,而ROCK1-shRNA和ROCK2-shRNA的转染能抑制缺氧导致的这一作用。(5)全自动生化分析仪检测发现,缺氧能导致细胞培养液LDH含量升高,而ROCK1-shRNA和ROCK2-shRNA的     

优质化护理在垂体腺瘤患者中的实施与体会

目的总结优质化护理在垂体瘤患者中实施的效果与体会。方法在垂体瘤患者中开展优质化服务进行全程护理,包括患者入院时的健康教育,术前术后的护理及出院时的康复指导。结果实施优质化护理让患者满意度大幅度提升,缩短了住院时间,减低了住院费用。结论通过实施优质化护理,提高了护患关系的同时实现了护士在护理工作中的自身价值。     

小儿NK/T细胞淋巴瘤(鼻型)误诊1例

<正>患儿男,11岁,因反复发热伴鼻塞、流涕1个月入院。患儿于1个月前无明显诱因出现发热,体温高达39.2℃,伴有鼻塞、流涕,无咳嗽、咳痰,无寒战、抽搐,无腹痛及腹泻。病后食欲欠佳,身体较前消瘦。在当地医院做胸片检查提示心肺及隔未见明显异常;做鼻部CT检查,意见为:右侧额窦炎,双侧鼻息肉。曾用抗生素、中药及对症治疗,病情无好     

局部运动与动脉血压及动脉血管顺应性的相关性研究

目的研究血压正常人群,局部运动与动脉血压及动脉血管顺应性的关系。方法入选高校在校健康学生50名（男生20名,女生30名）,均无吸烟史,父和（或）母均无高血压。受试前保持安静、休息5-10min。分别于运动前、运动后3min即刻及运动后休息10min后心率、双下肢血压及左、右侧脉搏波传导速度（PWV）,比较3次所测观察指栆血压、脉搏波速及心率有无统计学意义。结果运动后即刻测得各项指标与辐动前相比,辐动侧收缩压、舒张压及PWV均无明显变化（P〉0.5、0.05〈P〈0.1和0.4〈P〈0.5）、对侧肢体运动后与运动前相比收缩压有统计学意义（0.02〈P〈0.05）;舒张压及PWV均无明显变化（0.05〈P〈0.1和P〉0.5）。休息10min后双侧收缩压、舒张压均下降（P〈0.05）,PWV明显下降（P〈0.001）且下降程度比运动3min时明显;运动前与运动后即刻及运动后休息10min时的心率相比无明显改变（0.1〈P〈0.2和0.05〈P〈0.1）。结论局部运动可影响动脉血压及血管顺应性。     

早期胰岛素强化治疗对新诊断2型糖尿病患者临床转归的影响

目的 观察早期胰岛素强化治疗对新诊断2型糖尿病(T2DM)患者临床转归的影响.方法 选取1998年1月-2008年1月在我院就诊的新诊断T2DM患者388例,分为观察组(108例)和对照组(280例).两组患者均严格执行饮食及运动方案.另外,观察组给予胰岛素强化治疗,根据血糖调节胰岛素剂量,可联用口服降糖药阿卡波糖或二甲双胍,持续2周～3个月,根据病情停药或者改为口服药治疗.对照组给予口服降糖药治疗.连续观察3个月～1年,定期检测体质指数(BMI)、血糖[空腹血糖(FPG)及餐后2 h血糖(2 hPG)]、糖化血红蛋白(HbA1c)、C肽(空腹C肽及餐后C肽)水平.对临床缓解病例追踪1～10年.结果 治疗3个月后观察组患者的血糖水平显著低于对照组,C肽水平显著高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).1年后观察组34例(31.5%)脱离胰岛素与口服降糖药治疗,仅需饮食与运动控制(时间长者已达12年);46例(42.6%)改用口服降糖药,其中30例(27.8%)仅用1种非胰岛素促泌剂,16例(14.8%)需联用2种或2种以上口服降糖药;28例(25.9%)继续用胰岛素治疗,其中16例(57.1%)胰岛素日用量＜30 U,12例(42.9%)日用量≥30 U.对照组18例(6.4%)仅需饮食与运动控制;180例(64.3%)需用口服降糖药;82例(29.3%)使用胰岛素.两组患者病情转归比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 早期应用胰岛素强化治疗新诊断T2DM患者,可以改善患者的胰岛β细胞功能,逆转部分T2DM病程,使部分患者至少短期内脱离药物治疗,并对病情转归产生持续有益的影响,效果优于口服降糖药物.     

n-3多聚不饱和脂肪酸对预防室性心律失常、心源性猝死发生的Meta分析

系统评价n-3多聚不饱和脂肪酸对预防室性心律失常、心源性猝死发生的作用。方法以"室性心律失常"心室颤动"心源性猝死"n-3不饱和脂肪酸"等为检索词,通过Cochrane Library、Pubmed、EmBase、CNKI、万方数据库及临床试验注册网站(时间为从建库至2014年11月)进行检索,对检索到的随机对照试验进行质量评估后,采用Review Manger5.2统计软件进行Meta分析。结果共纳入符合入选标准的8个随机对照试验(RCT),试验组(服用n-3多聚不饱和脂肪酸)患者共16 343例,对照组(服用安慰剂)患者共16 336例,终点事件为室性心律失常、心源性猝死的发生率。Meta分析结果显示,饮食中含有n-3多聚不饱和脂肪酸的试验组在预防室性心律失常、心源性猝死方面与对照组比较差异无统计学意义(OR=0.87,95%CI 0.62~1.21,P=0.41);在近期有心肌梗死发生的患者中,服用鱼油组室性心律失常、心源性猝死的发生率降低(OR=0.68,95%CI 0.53~0.87,P=0.002)。结论 n-3多聚不饱和脂肪酸可能只对近期有心肌梗死的患者发生室性心律失常、心源性猝死有预防作用。     

经皮冠状动脉介入术与冠状动脉旁路移植术治疗无保护左主干病变远期疗效的Meta分析

目的:比较经皮冠状动脉介入术(PCI)与冠状动脉旁路移植术(CABG)对无保护左主干病变(ULMCA)的远期疗效和安全性。方法:检索PubMed、EMBASE和Cochrane数据库,收集国内外公开发表的关于ULMCA行PCI与CABG术后长期随访的对比研究,研究的相关临床终点为全因死亡、心肌梗死、脑血管事件、靶血管血运重建。采用RevMan 5软件进行数据分析。结果:最终纳入文献8篇,共11 332例患者,3年以上随访结果显示,PCI组与CABG组全因死亡率(OR=1.02,95%CI:0.73~1.42,P=0.92)、脑血管事件发生率(OR=0.59,95%CI:0.33~1.07,P=0.08)差异无统计学意义,但PCI组心肌梗死率(OR=1.74,95%CI:1.43~2.11,P0.000 01)、靶血管血运重建发生率(OR=2.60,95%CI:1.81~3.72,P0.000 01)显著增高。亚组分析结果显示:5年随访,与CABG组相比,PCI组全因死亡率(OR=0.91,95%CI:0.64~1.28,P=0.59)轻微降低,脑血管事件发生率(OR=0.64,95%CI:0.28~1.48,P=0.29)无明显差异,但心肌梗死率(OR=2.08,95%CI:1.62~2.69,P0.000 01)、靶血管血运重建发生率(OR=2.70,95%CI:1.80~4.03,P0.000 01)仍显著增高。7年随访,与CABG组相比,PCI组全因死亡率(OR=0.61,95%CI:0.46~0.80,P=0.000 4)、脑血管事件发生率(OR=0.23,95%CI:0.16~0.32,P0.000 01)均显著降低,心肌梗死率(OR=2.00,95%CI:1.39~2.86,P=0.000 2)、靶血管血运重建发生率(OR=2.37,95%CI:1.65~3.41,P0.000 01)仍显著增高。结论:PCI与CABG治疗ULMCA患者3年随访全因死亡率、脑血管事件发生率相当,但PCI心肌梗死率与靶血管血运重建发生率较高。分层分析后7年随访,与CABG相比,PCI全因死亡率、脑血管事件发生率均显著降低,心肌梗死率、靶血管血运重建发生率仍显著增高。     

乙型病毒性肝炎研究进展

乙型病毒性肝炎在全球所有疾病中占据显赫位置,它引起了世人的关注,本文通过对乙肝病毒传染、复制、自身免疫、治疗进一步认识,为今后制定更加合理的治疗方案提供理论依据.     

ShRNA对大鼠心肌细胞ROCK1和ROCK2表达的沉默作用

背景：已有研究发现,ROCK1和ROCK2参与了细胞的凋亡过程,由此假设下调ROCK1和ROCK2表达能抑制心肌细胞凋亡。 目的：验证ROCK1-shRNA和ROCK2-shRNA转染能否有效沉默大鼠心肌细胞内ROCK1和ROCK2基因的表达,并筛选沉默效率最高的shRNA。 方法：以ROCK1和ROCK2为靶基因,分别构建了3个特异性shRNA重组质粒,转染这些shRNA后观察其对SD大鼠心肌细胞中ROCK1和ROCK2的沉默作用,并筛选出沉默效率最佳的shRNA。 结果与结论：Western Blot结果显示,与对照组相比,3个重组质粒ROCK1-shRNA和ROCK2-shRNA的转染均能明显降低SD大鼠心肌细胞中ROCK1和ROCK2的表达(P < 0.05或P < 0.01),其中ROCK1-shRNA1和ROCK2-shRNA2的沉默效率最高(P < 0.05),分别为(82.15±7.53)%和(89.42±5.81)%。这表明ROCK1-shRNA和ROCK2-shRNA转染能有效沉默大鼠心肌细胞内ROCK1和ROCK2基因的表达,并筛选出了沉默效率最高的shRNA。     

对比剂从封堵器网眼渗出的识别和处理

动脉导管未闭(PDA)及室间隔缺损(VSD)是两种常见的先天性心脏病,其介入治疗已十分成熟。我院于2005年2月～2007年3月对108例先心病患者给予介入封堵治疗,其中PDA44例,VSD64例,效果满意。现将其部分病例封堵术后即刻X线造影结果,对比剂从封堵器网眼渗出与残余分流的影像学区别分析如下。