沙利度胺对人胰腺癌细胞细胞动力学和VEGF表达的影响

背景：研究显示沙利度胺及其类似物具有免疫调节、抗血管生成、抗炎等多方面的作用,其对多发性骨髓瘤和一些实体瘤的抗肿瘤作用与其免疫调节活性以及抗血管生成、抗增殖和促凋亡特性有关。目的：观察沙利度胺对人胰腺癌细胞细胞动力学和血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响,探讨其用于胰腺癌临床辅助治疗的可能性。方法：以沙利度胺干预人胰腺癌细胞株Patu-898848h,MTT实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,RT—PCR检测VEGFmRNA表达。结果：经不同浓度沙利度胺干预的Patu-8988细胞,生长抑制率、G0／G1期细胞比例和细胞凋亡率均显著高于溶剂对照组（P〈0．05）,VEGF异构体VEGF121、VEGF165mRNA表达显著低于溶剂对照组（P〈0．05）。结论：沙利度胺能从多方面对胰腺癌生长产生抑制作用,包括直接抑制癌细胞增殖、诱导细胞周期G0／G1期阻滞和早期凋亡,以及通过抑制VEGF转录而抑制肿瘤血管发生。     

丝裂原活化蛋白激酶特异性小干扰RNA表达载体对结肠癌细胞周期和DNA甲基化的影响

目的 构建丝裂原活化蛋白激酶（MEK）基因的小干扰RNA（siRNA）表达载体，观察其静默效应及对结肠癌细胞SW1116生长周期和DNA甲基化的影响。方法 选择MEK不同靶点寡核苷酸片段，克隆到pGCsilencer真核表达载体中。脂质体转染SW1116细胞，荧光显微镜评估转染效率，G418筛选稳定表达siRNA的细胞。Western印迹法检测siRNA对MEK蛋白表达的静默效果。应用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法检测细胞生长活力，流式细胞术分析细胞周期，甲基化特异性PCR和DNA测序检测p16^INK4A基因启动子甲基化状态。结果 构建2个靶点的MEK重组质粒，分别转染和联合转染SW1116细胞，转染效率约为72．1％，G418筛选培养2周得到稳定表达MEK siRNA的细胞，MEK蛋白抑制率分别为74．2％和69．1％和90．2％，下游分子ERK蛋白磷酸化水平随之降低；细胞增殖活力下降2～4倍和细胞周期阻滞于G1期，细胞周期负调控冈子p16^INK4A启动子区呈低甲基化状态。结论 MEK特异性siRNA表达载体对结肠癌细胞MEK蛋白表达有一定的静默效果，多靶点联合效果更好，阻滞细胞周期于G1期，促进p16^INK4A基因去甲基化。     

重组DNA甲基化酶1表达质粒对结肠癌细胞相关基因表达的影响

目的 分析DNA甲基化酶1(DNMT1)基因的真核表达质粒对人结肠癌细胞肿瘤相关基因的表达影响。方法 分别构建并转染含有人正义和反义DNMT1的真核表达质粒入结肠癌SW1116细胞，PCR和限制性内切酶证实转染结果，以Western印迹法分析各组细胞DNMT1蛋白的表达情况。定量PCR检测hMLH1、hMSH2及c—myc、p16^INK4A基因的表达。结果 经G418筛选得到稳定转染DNMT1基因的结肠癌细胞系，且分别在该转染有正义和反义质粒的细胞系中，DNMT1蛋白表达上调和下调。同时发现转染正义DNMT1的细胞中hMLH1、hMSH2及c—myc的表达降低，而转染反义DNMT1的细胞中hMSH2的表达明显增强。各组细胞p16^INK4A基因的表达差异不明显。结论 DNMT1基因调控人结肠癌细胞中肿瘤相关基因的表达。     

维生素E对胃癌细胞系AGS环氧合酶-2转录和活性的影响

背景:胃癌是人类的主要肿瘤死因之一.环氧合酶(C0X)-2是催化前列腺素合成的关键酶,与胃癌的发生、发展密切相关.目的:探讨维生素E对胃癌细胞系AGS COX-2转录和活性的影响.方法:以选择性COX-2抑制剂尼美舒利作为阳性对照,应用不同浓度的3种维生素E(α-生育酚、α-生育酚醋酸盐和γ-生育酚)分别对AGS细胞进行干预,作用16 h和24 h后,以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测COX-2 mRNA和COX-1 mRNA的表达,以COX活性检测试剂盒检测COX-2和COX-1活性.结果:与空白对照组相比,3种维生素E对AGS细胞COX-2 mRNA、COX-1 mRNA的表达和COX-1活性均无显著影响.α-生育酚和γ-生育酚对AGS细胞的COX-2活性具有抑制作用,且这种抑制作用呈剂量和时间依赖性,其中γ-生育酚的抑制作用更为明显;α-生育酚醋酸盐对COX-2活性无明显抑制作用.α-生育酚或γ-生育酚与尼美舒利联用对COX-2活性的抑制作用具有协同性.结论:维生素E对胃癌细胞的COX-2活性具有抑制作用,与选择性C0X-2抑制剂尼美舒利联用时两者的抑制作用具有协同性,这为维生素E或维生素E联合选择性COX-2抑制剂在胃癌化学预防中的应用提供了新的理论依据.     

肝硬化患者的内毒素和脂多糖结合蛋白水平及其与预后的关系

背景脂多糖结合蛋白(LBP)是介导脂多糖(LPS)活化单核/巨噬细胞的关键因子。尽管内毒素在慢性肝病和肝硬化中具有重要作用,但其结合蛋白在肝硬化中的意义尚不清楚。目的了解肝硬化患者的内毒素和LBP水平,并探讨其与预后的关系。方法分别以基质显色法鲎试验和酶联免疫吸附测定(ELISA)检测肝硬化患者的血浆内毒素和LBP水平;伴腹水患者同时测定腹水内毒素和LBP水平,并进行2个月的短期随访,记录存活情况。结果肝硬化患者的血浆内毒素和LBP水平均显著高于健康对照者(P<0.05),其中伴腹水患者的血浆内毒素水平显著高于无腹水患者(P<0.05)。Child鄄PughC级肝硬化伴腹水患者的腹水内毒素水平显著高于B级患者(P<0.05),而B级患者的血浆LBP水平显著高于C级患者(P<0.05)。短期随访显示肝硬化伴腹水死亡患者的腹水内毒素水平显著高于存活者(P<0.05)。结论肝硬化患者的血浆内毒素和LBP水平均升高,LBP水平升高可能是对肝硬化肠源性内毒素血症的一种持续的慢性炎症应答。腹水内毒素水平可以作为肝硬化伴腹水患者短期生存的一个预测指标。     

益生菌对肝硬化患者免疫功能的影响

肝硬化患者易发生多种感染，与免疫功能下降、肠道菌群紊乱有关。目的：观察口服微生态制剂对肝硬化患者细胞免疫功能、外周血单核细胞内毒素受体表达以及血清细胞因子和血浆内毒素水平的影响。方法：选取连续入院的肝硬化患者，予常规保肝治疗和口服微生态制剂4周，应用流式细胞术检测患者治疗前后外周血T细胞及其亚群和自然杀伤细胞、外周血单核细胞内毒素受体Toll样受体（TLR）4和CD14的表达。分别以酶联免疫吸附测定法和偶氮基质显色法检测细胞因子白细胞介素（IL）-1β、肿瘤坏死因子（TNF）-α、IL-10水平和血浆内毒素水平。结果：治疗前肝硬化患者外周血总T细胞（CD3）和CD4细胞数明显低于正常对照组（P〈0．05），微生态制剂治疗后CD3和CD4亚群显著升高（P〈0．05）。治疗前肝硬化患者外周血单核细胞内毒素受体TLR4和CD14的表达显著高于正常对照组（P〈0．01），微生态制剂治疗后CD14表达显著降低（P〈0．01），TLR4表达也呈下降的趋势，但差异无统计学意义。治疗前肝硬化患者血清IL-1β、TNF-α、IL-10水平显著高于正常对照组（P〈0．05），微生态制剂治疗后血清细胞因子和血浆内毒素水平均无明显改变。结论：肝硬化患者存在细胞免疫功能下降和慢性炎症状态，微生态制剂可改善患者免疫功能的紊乱。因此可将其作为一种慢性肝病的辅助治疗。     

mTOR信号通路与组蛋白乙酰化在胃癌细胞中的相互作用

目的研究哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路与组蛋白乙酰化在人胃癌细胞生存活力、细胞周期、相关基因及蛋白表达方面的相互作用。方法分别单独或联合脱乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素(trichostatin A,TSA)、mTOR抑制剂雷帕霉素和PI3K抑制剂LY294002干预人胃癌MKN45和SGC7901细胞,以噻唑蓝法检测细胞生存活力,流式细胞术检测细胞周期,实时定量PCR检测p21WAF1基因表达情况,蛋白免疫印迹检测Akt、p70S6K及4E-BP1蛋白表达情况。结果联合用药比单独用药对胃癌细胞生长抑制作用更明显(P<0.01);不管单独或联合用药,均可使MKN45细胞阻滞在G2期(P<0.05),使SGC7901细胞阻滞在G1或G2期(P<0.05);联合用药比单独用药更能提高抑癌基因p21WAF1的表达;联合用药使Akt、p70S6K及4E-BP1磷酸化表达较单独用药显著下降(P<0.01),联合用药后组蛋白H4/H3乙酰化也较单独用药表达升高(P<0.01)。结论mTOR信号通路与组蛋白乙酰化在胃癌的发生发展中存在相互关系,mTOR抑制剂与脱乙酰化酶抑制剂联合应用具有协同作用,可望成为肿瘤基因防治的新靶点。