原代培养猪冠状动脉平滑肌的电压依赖和钙激活钾通道

目的：研究原代培养的猪冠状动脉平滑肌电压依赖性和钙激活外向钾通道的特性。方法：离子通道电流采用膜片钳技术进行记录。结果：在内面向外式膜片构型,当膜内外K^ 浓度梯度类似生理状态时,该通道单位电导值约为100pS,而当膜内外K^ 浓度为对称的140mM浓度时,该通道单位电导值约270pS。其平均电流显示该通道具时间和电压依赖性激活特性,而无任何时间和电压依赖性失活特性。另外,通道的开放时间常数和开放概率随除极及胞内Ca^2 的增加而显著增加。通过用EGTA降低胞浆内Ca^2 浓度,可使外向电流抑制。动力学分析显示通道激活时存在一种开放状态和至少两种关闭状态。四乙胺（TEA）可在胞外侧阻断该电流,但高达15mM的4－氨基吡啶（4－AP）在胞内外都对通道无影响。在全细胞构型,对细胞膜进行除极可引出宏观外向电流。随着细胞的除极,该电流的激活时间常数逐渐缩短,并显示快速激活动力学特性。结论：在原代培养的猪冠状动脉平滑肌上存在有电压依赖和Ca^2 激活的K^ 选择性离子通道。该类通道具有非常高的单位电导值,除极时快速开放,对胞内Ca^2 高度敏感,但无失活等特性。     

损伤级联反应对中风病中医理论和实践的影响

复习文献并结合笔者自己研究体会 ,讨论损伤级联反应主要内容和临床意义 ,以及对中医学研究的启迪等问题。     

镁离子对原代培养猪冠状动脉平滑肌细胞钙激活钾通道的影响

目的：应用膜片钳单通道技术研究镁离子(Mg^2 )对原代培养猪冠状动脉平精肌细胞钙澈活钾通道(KCa)的影响.方法：选择培养5天后的单个棱形平精肌细胞，用二步拉镐经热抛光尖端直径约1～2gμm，充灌液体后阻抗约5～7MΩ的微吸管进行高阻封接，在对称性高钾溶液下采用内面向外式膜片记录电流。单通道电流信号经膜片钳放大器放大，滤波(3KHz)后，经12位A／D，D／A转换器在pClamp6．0．2专用软件支持下输入并储存在计算机内，然后进行分析处理。结果：猪冠状动脉平滑肌细胞KCa单通道电导值为135±15pS，[Ca^2 ]i为10^-7mol，膜电位为-40mV，向膜内侧液加入Mg^2 至1和4mmol，通道活度(NPO)显著增加;并发现随着[M^2 ]i从0．5mmol依次增加至14mmol，Mg^2 对KCa通道可产生浓度依赖性激活作用；而且用一定浓度的EGTA把[Ca^2 ]螯合到很小时(<10^-9 mol)，再向膜内侧加入Mg^2 (4mmol)仍对通道有激活作甩。结论：[Mg^2 ]i对KCa通道可产生浓度依赖性激活作用，且在膜内侧相对无Ca^2-的情况下仍可激活KCa通道，这可能是Mg^2 舒张血管平滑肌的作用机制之一。     

雌激素对正常人肠系膜血管平滑肌细胞自发性瞬时外向电流的作用

目的 研究雌激素(estrogen,E)对正常人肠系膜血管平滑肌细胞自发性瞬时外向电流(spontaneous transientoutward currents,STOCs)的作用,探讨雌激素对该细胞上大电导钙激活钾通道(Large-ounductance Ca2 -activated potassiumchannels,BKCa)的作用机制.方法 用急性酶分离方法分离人肠系膜血管平滑肌细胞,采用全细胞穿孔膜片钳技术记录谊细胞上的自发性瞬时外向电流.结果 雌激素可浓度依赖性地激活正常人肠系膜血管平滑肌细胞上的STOCs,当雌激素浓度从0μM增加到10、70、200、300μM时,其幅度和频率都增加.其中幅度分别增加了(68.15±10.82)%(n=10,P<0.01)、(131.63±35.33)%(n=10,P<0.01)、(192.02±57.85)%(n=10,P<0.01)、(269.34±70.64)%(n=10.P<0.01);频率分别增加了(29.30±8.61)%(n=10,P<0.01)、(89.17±21.76)%(n=10,P<0.01)、(164.33±43.51)%(n=10,P<0.01)、(205.09±62.49)%(n=10,P<0.01).结论 雌激素可直接激活正常人肠系膜血管平滑肌细胞自发性瞬时外向电流,是通过增加其幅度和频率而激活的,为进一步探讨雌激素对大电导钙激活钾通道的作用机制提供了实验依据.     

大鼠主动脉平滑肌钙激活钾通道的增龄变化

目的 研究不同月龄大鼠主动脉平滑肌细胞钙激活钾通道(KCa)的增龄变化,以探讨老化过程中血管平滑肌KCa的变化规律.方法 应用膜片钳技术,研究3组大鼠(分别为1月,6月,20月龄,各10只)主动脉平滑肌细胞KCa的增龄变化.结果 在内面向外膜片上,1月龄与6月龄相比,KCa对Ca2 的敏感性差异无显著性.而20月龄KCa对Ca2 的敏感性低于6月龄,20月龄与6月龄相比,在[Ca2 ]free分别为5×10-7,10-6mol/L时,通道开放概率(P0)明显减小;在[Ca2 ]free分别为10-7,5×10-7,10-6mol/L时,通道的关闭时间(Tc)显著延长,P均＜0.05.结论 随着年龄增加,主动脉平滑肌细胞KCa通道的活性下降,KCa的失活机制可能发生改变.     

维司力农结构改造物FPA对豚鼠心肌细胞钙电流的影响

目的用膜片钳全细胞记录法观察FPA对分离的单个豚鼠心室肌细胞L型钙电流(Ica-L)的影响。方法采用急性酶分离法(胶原酶+白蛋白)分离单个豚鼠心室肌细胞,在生物倒置显微镜下对豚鼠心室肌细胞进行膜片钳全细胞记录。实验采用空白试验组,加药组(FPA组),二甲亚砜组进行对造,在实验中FPA以三种浓度给药(0.75,1.0和1.25 mmol·L^-1)。实验中保持电位为-40 mV,刺激频率为0.1 Hz,刺激时间200 ms,以10 mV为一阶跃逐级去极化到+60 mV,通道电流经膜片钳负反馈放大器放大,再用pClamp 7.0软件的数据采集系统采样和最后分析。结果FPA增加Ica-L。0.75 mmol·L^-1FPA使Ica-L最大峰值电流从(4.1181±1.404)pA/pF增至(4.907±1.208)pA/pF(n=6,P均<0.05),增加率为19.16%;1.0 mmol·L^-1FPA使Ica-L最大峰值电流从(4.519±1.106)pA/pF增至(7.483±2.154)pA/pF(n=6,P均<0.05),增加率为65.58%;1.25 mmol·L^-1FPA使Ica-L最大峰值电流从(3.288±1.038)pA/pF增至(8.345±0.172)pA/pF(n=4,P均<0.05),增加率为153.80%。FPA使Ica-L的电流-电压曲线下移,但不改变其激活、峰值和反转电位,亦不改变细胞的静息电位。结论FPA对Ica-L的促进作用为其强心效应的离子基础之一。     

家兔在位心室肌细胞动作电位

Woodbury等于1951年用玻璃微电极记录了蛙心单个肌细胞的跨膜电位~1。1956年Woodbury和Brady使用悬浮微电极记录了在位心肌细胞的跨膜电位~2。1979年曾敬添和李少如用悬浮微电极记录了在位心肌细胞跨膜电位~(3 4)。近年来,悬浮微电极技术在国内逐步得到开展。我们应用玻璃微电极细胞内记录法,以悬浮式微电极对家兔在位心室肌细胞动作电位进行了观察、记录和测定了动作电位的五项指标,并同步记录了心电图、心肌拉力,现报道     

新生大白鼠大脑皮层神经元的培养及其基本电生理学特性研究

目的建立一种较为理想的适用于膜片钳制技术的神经元培养方法,并观察其形态学和电生理学特性.方法改进的神经元原代培养方法及膜片钳单通道记录法.结果采用此方法能获得形态典型的神经元,用膜片钳单通道记录法能记录到两类正常的通道电流(KCa和KATP).结论该培养方法获得细胞数量多,细胞质量高,电生理特性正常.     

动脉粥样硬化兔血管平滑肌大电导钙激活钾通道的活性及其对硝酸甘油反应的探讨

目的研究动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)时血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecell,VSMC)大电导钙激活钾通道(Largeconductanceofcalcium-activatedpotassiumchannel,BKca)的活性变化及对硝酸甘油(nitroglycerin,NTG)的反应。方法3月龄新西兰兔随机分为实验组(AS组)和对照组(正常组),每组各10只。AS组喂高脂饲料以建立AS模型,对照组喂普通饲料,两组均喂8周。采用单通道膜片钳技术测定VSMC的Bkca的电流及其对NTG的反应。结果随着电压和Ca2+浓度的增加,AS组和对照组的通道开放概率(Po)逐渐增大。AS组的Po较对照组明显增大,P<0.001。在Ca2+浓度为10-6M下,AS组和对照组的Po增加(68.8620±34.4447)倍和(126.4170±70.6090)倍,P<0.05。NTG可以显著增加通道的Po,且具有浓度依赖性。在NTG液浓度为10-4M下,AS组和对照组的Po增加(54.7620±23.7193)倍和(108.5950±60.2223)倍,P<0.05。结论AS组VSMC的BKca活性增强。AS组VSMC的BKca的Ca2+敏感性降低。NTG可激活VSMC的BKca。AS组VSMC的BKca对NTG的反应性下降。     

甲基莲心碱对豚鼠心肌及猪冠状动脉平滑肌细胞钾通道的作用(英文)

用膜片钳单通道技术 ,观察在细胞膜内侧加入甲基莲心碱 (Nef)后 K+通道特性的改变 ,以研究Nef对豚鼠心室肌细胞及猪冠状动脉平滑肌细胞K+通道的作用 .结果 :Nef可使心肌细胞及冠脉平滑肌细胞上 K+通道开放概率 (PO)降低 . 1 0 ,2 0μmol· L-1Nef分别使心肌细胞 K+通道降低 (50± 32 ) %和 (96± 5) % ,30 ,50 μmol· L-1的 Nef分别使猪冠脉平滑肌细胞上 K+通道 PO 降低 (51±2 1 ) %和 (71± 1 4) % .结果表明 ,Nef可从通道内口阻断心肌及平滑肌细胞上 K+通道 ,但对前者的作用更强