p53基因第72位密码子多态与瘢痕疙瘩易感性研究

目的 探讨p53基因第72位密码子多态与瘢痕疙瘩遗传易感性的关系。方法 采用聚合酶链反应-反向斑点杂交、DNA直接测序方法，检测了15例瘢痕疙瘩患者与15名正常人对照的p53基因第72位密码子的基因型。结果 瘢痕疙瘩组的Pro等位基因及Pro／Pro基因型频率明显高于对照组(P值分别为0．035、0．030)，Pro／Arg、Arg／Arg基因型频率在病例组和对照组的分布差异无显著性。结论 p53基因第72位密码子Pro等位基因及Pro／Pro基因型可能是瘢痕疙瘩的易感因素。     

颗粒酶B的表达纯化和鉴定

目的：克隆颗粒酶B(GraB)，构建GraB的原核表达载体，从而建立其原核表达体系，获得高效表达的重组GraB。方法：抽提人外周血淋巴细胞总RNA,进行RT-PCR克隆GraB cDNA，构建GraB原核表达载体，用限制性酶切和DNA测序进行鉴定；异丙基-1-硫代-β-呋喃半乳糖苷（IPTG）诱导表达，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析表达产物。表达产物亲和层析纯化并用免疫印迹法鉴定，以GraB底物测定其活性。结果：表达产物以可溶性分子形式存在于菌体中，具有良好的抗原性和特异性，并能作用于GraB特异性底物。结论：建立了GraB原核表达系统。     

双歧杆菌的完整肽聚糖对巨噬细胞钙离子和pH以及膜电位的调控

双歧杆菌的完整肽聚糖(whole peptidoglycan, WPG)能激活巨噬细胞.目前认为WPG激活巨噬细胞的作用之一是提高其胞内游离ca2+离子([ca2+]i)的水平,但[Ca2+]i升高的途径仍不清楚.本文以激光共聚焦显微镜检测了WPG对巨噬细胞[Ca2+]i和pH以及膜电位的影响.     

经转染人骨形态发生蛋白7基因后骨髓间充质干细胞mRNA的表达

目的 构建人骨形态发生蛋白（human bone morphogenetic protein7，hBMP－7）逆转录病毒载体并检测经逆转录病毒介导基因转染的兔骨髓间充质干细胞（bone marrow-derived mesenchymal stem cell,MSCs)mRNA的表达。方法 构建hBMP-7逆转录病毒载体后利用脂质介导的基因转移技术转染包装细胞PT67，制备含目的基因的重组逆转录病毒液并感染兔骨髓间充质干细胞，采用原位杂交、RT－PCR检测hBMP－7mRNA在MSCs中的表达。结果 成功构建了hBMP-7逆转录病毒载体，经hBMP－7基因转染的MSCs可表达外源性BMP－7mRNA。结论 采用逆转录病毒介导的方法可以将hBPM－7转染至MSCs中并表达外源性基因。     

瘢痕疙瘩高危个体评估与p53基因第72密码子的多态性

目的：应用p53基因检测试剂盒观察不同的p53基因第72密码子多态性基因型及等位基因的表现频率，判断瘢痕疙瘩高危个体。方法：实验于2003-07/2004-10在南方医科大学细胞生物学实验室完成。采用聚合酶链反应-反向点杂交方法建立试剂盒，检测广东地区45例瘢痕疙瘩患与60例正常对照外周静脉血标本的p53基因第72位密码子多态性的基因型（脯氨酸/脯氨酸、脯氨酸/精氨酸、精氨酸/精氨酸）与等位基因（脯氨酸、精氨酸），观察不同分布对预测的意义，参与均知情同意。结果：①脯氨酸/脯氨酸基因型频率：瘢痕疙瘩组明显高于对照组（20/44，15/25，P＜0.036）。②脯氨酸等位基因频率；瘢痕疙瘩组明显高于对照组（56/62，57/48，P＜0.034）。③脯氨酸/脯氨酸基因型患瘢痕疙瘩的风险性；与脯氨酸/精氨酸 精氨酸基因型相比明显增高（比值比=2，400.95%可信区间；1.048～5.498）。结论：p53基因检测试剂盒检测出脯氨酸。脯氨酸基因型患瘢痕疙瘩的风险性高，可以预测瘢痕疙瘩高危个体。     

p53基因第72位密码子多态性与剖宫产术后病理性瘢痕的相关性

目的 研究p53基因第72位密码子(codon 72)多态性与剖官产术后病理性瘢痕发生的关系.方法 对广州医学院第三附属医院产科行剖宫产术的303例女性,于术后3～5d抽取外周静脉血2 ml,用荧光分子信标PCR法检测其血液标本的p53基因codon 72多态性.分别于术后第3、6、12个月对所有病例进行电话随访,其中有19例随访至18个月,观察其病理性瘢痕发生情况,以及其与p53基因codon 72多态性位点基因型的关系.用SPSS 13.0软件进行统计学分析.结果 303例产妇中发生病理性瘢痕增生30例,273例为正常愈合.2组产妇p53基因codon 72 3种基因型(C/C、C/G和G/G)频率总体上有显著差异;病理性瘢痕增生组产妇C/C基因型频率为46.7％(14/30),高于正常组的17.6％ (48/273),差异有统计学意义(P＜0.01);在病理性瘢痕增生产妇中,C/C基因型频率显著高于C/G型(33.3％,10/30)和G/G型(20.0％,6/30),差异均有统计学意义(P＜0.01);在病理性瘢痕增生产妇中,C等位基因频率为63.3％,也显著高于G等位基因频率(36.7％,P＜0.01),OR值为2.30.结论 p53基因codon 72 C等位基因与剖宫产术后病理性瘢痕的发生有一定的关联性.     

大肠埃希菌耐喹诺酮类药物回旋酶基因突变的研究

目的 研究导致大肠埃希菌DNA回旋酶A亚单位的基因变异耐喹诺酮类药物的机制。方法 收集3株大肠埃希菌耐药菌株及1株敏感株，用PCR方法扩增其回旋酶(gyraseA)基因，对扩增片段进行单链构象多态性分析(PCR--SSCP)及DNA序列分析。结果 PCR—SSCP发现3株耐药株其DNA单链与标准株及临床敏感株迁移率不同，3株耐药菌株存在Ser—83→Leu，Asp—87→Asn及His—184→Asn突变，Ser—83→Leu及Asp—87→Asn突变位于氟喳诺酮类药物耐药决定区，gyrA基因碱基552位点C→A碱基突变致组氨酸突变为天冬酰胺。结论 大肠埃希菌对氟喹诺酮类药物产生耐药性与gyrA基因点的突变有关。     

T103A变异MxA蛋白抑制水泡性口膜炎病毒复制的体外研究

目的研究T103A变异MxA蛋白抑制水疱性口膜炎病毒(VSV)复制活性。方法将野生型、T103A变异MxA蛋白表达载体和对照质粒分别瞬时转染Wish细胞,24h后VSV感染细胞,48h后用MTT法检测各组细胞增殖;另取Wish细胞转染上述3种质粒,转染24h加入VSV感染细胞,24h后收集细胞采用RT-PCR检测VSV mRNA水平;Western blot检测各组MxA蛋白表达。结果野生型、T103A变异MxA蛋白均在Wish细胞有较好表达;MTT检测结果提示T103A变异组细胞增殖数显著低于野生型组(P<0.01);RT-PCR结果显示T103A变异组VSVmRNA水平显著高于野生型组(P<0.01),但与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论T103A变异MxA蛋白失去了抑制VSV复制活性。     

分析野生型p53转基因小鼠对移植肿瘤的感受性

分析野生型ｐ５３转基因小鼠对移植肿瘤的感受性谢卫兵陈汉源余焱林曾位森罗琛（第一军医大学组胚教研室细胞生物学实验室）野生型ｐ５３为隐性抑癌基因，限制细胞分裂增殖，阻遏细胞转化和动物致瘤。相反地突变型ｐ５３丧失原有功能，成为显性致癌基因，现已查明约有一半...     

双歧杆菌表达的重组人GrB-VRB融合蛋白诱导KDR阳性细胞凋亡

目的在双歧杆菌中表达重组人颗粒酶B-血管内皮生长因子结合肽（GrB-VRB）融合蛋白并研究其对血管内皮生长因子
受体II（KDR）阳性细胞的作用。方法采用电穿孔法将重组表达载体转入双歧杆菌,以ELISA和免疫印迹鉴定表达产物,以细
胞增殖试验和TUNEL法分析其对KDR阳性细胞的影响。结果工程化化双歧杆菌培养物的上清和菌体中均有重组产物,重组
人GrB-VRB能有效抑制KDR阳性如人脐静脉血管内皮细胞株HUVEC、小鼠结肠癌细胞株CT-26细胞增殖、细胞死亡,这种死
亡的机制是细胞凋亡;但对KDR阴性细胞则无这些作用。结论工程化双歧杆菌能分泌性表达重组GrB-VRB融合蛋白,其在
VRB的靶向作用下,GrB可有效地诱导KDR阳性细胞凋亡。