小鼠早期胚胎质量与细胞凋亡的相关性

目的分析小鼠早期胚胎质量与细胞凋亡的关系,了解细胞凋亡调控基因在早期胚胎发育中所起的重要作用,旨在为提高胚胎质量寻找一条新途径。方法采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Caspase)原位荧光检测和Bcl-2免疫荧光检测等凋亡检测技术,以及增殖细胞核抗原(PCNA)免疫荧光检测细胞增殖程度的技术,分别对小鼠早期形态正常的胚胎、早期发育阻滞的胚胎和有碎片的胚胎进行细胞凋亡程度和增殖程度的检测,比较其凋亡和增殖程度的差异。结果小鼠早期发育阻滞的胚胎细胞和胚胎中的碎片TUNEL阳性,Caspase活性增强,Bcl-2、PCNA表达水平降低。结论细胞凋亡与胚胎发育阻滞及胚胎中的碎片形成密切相关。     

血管内皮生长因子受体结合肽介导颗粒酶B靶向性抗肿瘤血管生成

目的　观察血管内皮生长因子受体 (VEGFR)结合肽 -颗粒酶 B(Gra B)融合蛋白抗血管生成的作用 .方法　抽提人外周血淋巴细胞总 RNA,进行 RT- PCR克隆 Gra B c DNA;抽提 L o Vo细胞总 RNA,进行 RT- PCR克隆 VEGFR结合肽c DNA,用限制性酶切和 DNA测序进行鉴定 ;通过聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS- PAGE)分析表达产物 .表达产物经亲和层析纯化后 ,以人血管内皮细胞 (ECV30 4 )和鸡胚尿囊膜血管测定其生物学活性 .结果　表达产物以可溶性分子形式存在于菌体中 ,具有良好的抗原性和特异性 ,且具有抑制血管内皮细胞增殖及破坏鸡胚尿囊膜血管形成的活性 .结论　 VEG-FR结合肽 - Gra B融合蛋白具有抑制血管生成的功能 ,在肿瘤生物靶向治疗中有一定潜在价值     

显微注射法建成野生型p53转基因小鼠

用显微注射法将野生型p53基因导入C57BL／6J×SJL杂交F1代受精卵的雄性原核中，以ICR品系小鼠为假孕母鼠。结果出生37只原代小鼠，其中有13只在检测前不明原因死亡，其余的24只原代小鼠中有2只基因组中整合有p53基因，整合率为8.3％。     

抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)卵黄免疫球蛋白(IgY)的制备与性质研究

目的观察鸡卵黄中抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant staphylococcus aureus,MRSA)抗体的含量、纯度、来源及稳定性。方法用耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)作为抗原免疫Leghorn鸡;通过改良水稀释法提取卵黄中的IgY;双紫外光波长测定抗体含量,SDS-PAGE电泳检测抗体纯度;Western blot免疫印迹法测定该抗体来源;ELISA检测IgY对温度、酸碱度的稳定性。结果抗体含量13.3 mg/mL蛋黄液,抗体纯度达96%;免疫印迹证明IgY与鸡血清中的IgG具有相同的分子量和抗原性;IgY具有良好的热稳定性,对酸碱具有一定的耐受力。结论改良水稀释法能得到高产量、高纯度的特异性IgY,而且有良好的生物学活性。     

经转染人骨形态发生蛋白7基因后骨髓间充质干细胞mRNA的表达

目的构建人骨形态发生蛋白7(humanbonemorphogeneticprotein7,hBMP-7)逆转录病毒载体并检测经逆转录病毒介导基因转染的兔骨髓间充质干细胞(bonemarrow-derivedmesenchymalstemcell,MSCs)mRNA的表达。方法构建hBMP-7逆转录病毒载体后利用脂质体介导的基因转移技术转染包装细胞PT67,制备含目的基因的重组逆转录病毒液并感染兔骨髓间充质干细胞,采用原位杂交、RT-PCR检测hBMP-7mRNA在MSCs中的表达。结果成功构建了hBMP-7逆转录病毒载体,经hBMP-7基因转染的MSCs可表达外源性BMP-7mRNA。结论采用逆转录病毒介导的方法可以将hBMP-7转染至MSCs中并表达外源性基因。     

逆转录病毒介导hBMP7基因转染兔骨髓间充质干细胞的表达

采用粘－粘端连接方法构建hBMP7逆转录病毒载体,重组质粒转染包装细胞PT67后,制备含目的基因的重 逆转录病毒液感染兔骨髓间充质干细胞。限制性内切酶切分析筛选插入方向正确的重组质粒并进行基因测序。结果显示,hBMP7逆转录病毒载体中外源基因插入方向正确、无碱基错误和缺失。原位杂交和免疫组织化学检测表明,感染后2天经基因转染的BMSc原位杂交和免疫组化检测结果呈阳性,未经转染的细胞检测结果呈阴性。转染的BMSc经G418筛选至4周仍有外源BMP蛋白的表达。提示采用逆转录病毒介导方法转染的BMSc中可有源性BMP7mRNA和蛋白的表达。     

精子核碱性蛋白转化与精子畸形及不明原因流产关系初探

本文探讨了精子核碱性蛋白转化与精子畸形及不明原因流产的关系。对８例有二次以上不明原因早期流产妇女的配偶（流产组）及１０个正常生育力的男性（对照组）作精子形态学检查，抽提精子核碱性蛋白，在酸－尿素聚丙烯酰胺凝胶（ａｃｉｄ－ｕｒｅａＰＡＧＥ）中电泳，测定组蛋白（Ｈ），中间型碱性蛋白（ＩＢＰ）及鱼精蛋白（ＨＰ１～３）各区带的相对含量，以（ＨＰ１～３）占总碱性蛋白（ＴＢＰ）的百分比表示碱性蛋白转化率。实验结果为：（１）碱性蛋白转化率与精子畸形率成直线负相关关系（ｒ＝－０．７５９Ｐ＜０．０１）；（２）流产组精子核碱性蛋白转化率低于对照组（Ｐ＜０．０５），ＩＢＰ／ＴＢＰ则高于对照组（Ｐ＜０．０５）。提示精子核碱性蛋白转化障碍致中间型碱性蛋白（ＩＢＰ）及组蛋白（Ｈ）在精子染色质中残留过多，是引起精子头部畸形的原因之一，且与不明原因流产有关。     

胃泌素调节激素在双歧杆菌中的表达及其转化双歧杆菌对肥胖小鼠体质的影响

目的 观察载体pBBADs-OXM转化双歧杆菌对肥胖小鼠的减肥作用.方法 以电穿孔方法将pBBADs-OXM转入双歧杆菌,ELISA及免疫印迹法检测pBBADs-OXM转化长双歧杆菌培养上清及菌体沉淀中OXM的表达.并以此转化双歧杆菌灌饲肥胖小鼠,观察肥胖鼠体质量的变化.结果 ELISA、免疫印迹法检测到OXM在pBBADs-OXM转化的双歧杆菌的培养上清及菌体中均有表达.此转化双歧杆菌灌饲的肥胖小鼠体质量显著低于模型组肥胖小鼠(P<0.05).结论 pBBADs-OXM转化的双歧杆菌具有减肥作用.     

三氧化二砷诱导人类恶性淋巴瘤细胞凋亡及机制探讨

目的研究三氧化二砷(As2O3)在体外对人类伯基特氏淋巴瘤细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法分别采用来源于人类伯基特氏淋巴瘤的EB病毒阳性细胞Raji和EB病毒阴性细胞BJAB为模型,利用细胞形态学检测、DNA凝胶电泳和蛋白质Western blotting分析等方法,从细胞形态、DNA水平和蛋白质水平探讨As2O3诱导恶性淋巴瘤凋亡及作用机制。结果分别采用2, 5和10 mol/L的As2O3与Raji和BJAB细胞作用24 h后,DNA凝胶电泳证实As2O3通过诱导细胞凋亡而抑制细胞的增殖。BJAB和Raji细胞对应于上述浓度As2O3的凋亡率分别47.6%±4.8% (Mean±SD, n=3), 66.4%±5.1% , 87.0%±7.3% 和35.5%±3.8%, 51.5%±6.2%, 62.2%±7.9,BJAB细胞对As2O3的敏感性要高于Raji细胞(P<0.05)。Western blotting蛋白质检测表明,As2O3通过下调抗凋亡蛋白Bcl-xL的表达和激活凋亡分子caspase-3诱导细胞凋亡。结论As2O3通过下调Bcl-xL蛋白的表达和激活caspase-3诱导人类恶性淋巴瘤细胞的凋亡;本研究可望为临床应用砷剂治疗恶性淋巴瘤提供实验依据。     

HA表位标记的人Axud1基因的构建及在肺腺癌SPC-A1细胞中的表达

构建在哺乳动物细胞中表达的血凝素HA表位标记的人Axud1融合蛋白表达载体。RT PCR从人外周血淋巴细胞中扩增Axud1全长cDNA ,用含HA序列的特异引物PCR扩增HA Axud1,经BamHⅠ、XbaⅠ酶切后插入到经BamHⅠ、XbaⅠ酶切的真核表达载体pcDNA3 .1( ) 中 ,重组质粒PCR、酶切和测序鉴定正确 ,最后将该质粒转染入肺腺癌SPC A1细胞中 ,Westernblot检测HA Axud1融合蛋白的表达。结果显示 ,筛选的G418抗性克隆SPC A1细胞中均有HA Axud1融合蛋白的表达 ,为进一步研究Axud1蛋白在肿瘤细胞中的功能提供了一个重要工具