表皮葡萄球菌对大环内酯-林可酰胺-链阳菌素B的耐药基因型及同源性分析

目的深入了解引发医院感染的表皮葡萄球菌（简称“表葡菌”）对大环内酯-林可酰胺糖阳菌素B（MLS。）类抗生素的耐药机制。方法收集2003--2004年北京3家综合医院126株引发医院感染的表葡菌，检测其在红霉素（ERY）、克林霉素（CU）、喹努普丁／达福普丁中的MIC；用D试验区分诱导型（iMLSB）和泵出型（MS）耐药菌株。采用PCR检测ermA、ermB、ermC、msrA和mecA耐药基因，并用脉冲场凝胶电泳（PFGE）进行同源性分析。结果126株菌株对ERY和CLI耐药率高（分别为92．8％和84．1％）；在结构型（cMLS。）中，耐甲氧西林表葡菌（MRSE）占78．5％，而iMLS。中甲氧西林敏感株（MSSE）较多，占69．2％；enmC不仅在MRSE和MSSE中是最常见的耐药基因（70．8％和56．8％），而且在iMLSB型和cMLSB型中也占多数（76．9％和90．3％）；所有MS型菌株均检测出msrA；在ERY敏感菌株中未检测出相关耐药基因。PFGE分析显示，无特异的流行株；99．2％MLSB耐药表型相同的菌株分布于A—F型中，且无显著集中趋势。结论导致医院感染的126株菌株对MLS。类抗生素耐药率高，ermC是其常见耐药基因，对MLSB抗生素使用需谨慎、合理。     

抗甲型肝炎病毒抗体Fab在大肠杆菌中的表达

目的 在大肠杆菌中高效表达人源抗HAV抗体Fab，为进一步研究该抗体的功能奠定基础。方法 依次将抗HAV抗体的Fd及轻链基因克隆到表达载体pASK84的不同信号序列下，构建成Fab表达质粒，在大肠杆菌JM83中进行表达，并对表达产物进行复性。用SDS－PAGE、western blot和ELISA法检测Fab的表达及其与甲肝病毒抗原的结合活性。结果 构建了抗HAV Fab的重组表达质粒p84Fab，在大肠杆菌JM83中获得表达，表达的Fab占全菌的25％，主要以包涵体形式存在，复性后具有抗原结合活性；培养基、菌体可溶性蛋白部分也能检测到有抗原结合活性的Fab。结论 抗HAV抗体Fab在大肠杆菌中得到了表达，并具有良好的抗原结合活性。     

布鲁氏菌病国内研究进展

自从1905年Boone在重庆首次对布鲁菌(Brucella)作正式报道以来,中国的布鲁氏菌病(B rucellosis)研究者们经历了漫长的研究历程,在布鲁菌和布鲁氏菌病研究方面积累了丰富的经验并取得了可喜的成绩。随着现代科学技术的发展,尤其是分子生物学及免疫学技术的不断创新,人们对布鲁菌和布鲁氏菌病有了更进一步的认识,并且在检测诊断和预防治疗等方面进行了一些有意义的尝试和探索。现对布鲁氏菌病研究状况作以概述。1布鲁氏菌病病原学研究我国在建立健全一整套布鲁菌属的常规鉴定分类技术基础上对4 000株布鲁菌进行了鉴定分类。80年代,先后在我…     

分泌表达Ag85B与ESAT6融合蛋白的重组卡介苗菌株的筛选

目的筛选获得分泌表达Ag85B与ESAT6融合蛋白的重组卡介苗(BCG)菌株。方法采用多聚合酶链反应(PCR)方法从结核分枝杆菌毒株H37Rv中扩增出热休克蛋白60(Hsp60)基因及其信号肽序列α-ss，将测序正确的hsp60和α-ss基因分别克隆人大肠杆菌(E.coli．)-BCG穿梭载体pOLYG中，构建分枝杆菌分泌表达载体pDE22，按相应的酶切位点将ag85b和esat6按照不同的连接方式联合克隆入pDE22载体，分别命名为pDE22-Ag85B-ESAT6和pDE22-ESAT6-Ag85B，将纯化的重组质粒电穿入BCG，经潮霉素抗性筛选和PCR的方法鉴定出含目的基因的重组BCG阳性克隆。收集重组BCG的培养上清液，经浓缩和透析后，进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和固相化蛋白质免疫学测定(Western-blot法)分析。结果两株重组：BCG菌株的培养上清液分泌表达相对分子质量约37000的蛋白，且分别可与抗Ag85B和抗ESAT6蛋白免疫小鼠的血清有相应的结合条带。结论分泌表达Ag85B与ESAT6融合蛋白的重组BCG菌株构建成功，有望为结核病的预防提供有效的疫苗。     

中药抗HIV的有效活性成分的研究进展

0 引言 艾滋病又称为获得性免疫缺陷综合征（Acquired Immuno-Deficiency Syndroma,AIDS）,是继癌症之后严重威胁人类健康和生存的一种传染性疾病．据联合国艾滋病规划署2008-07-29发布的报告,目前全球约有3300多万人感染艾滋病病毒（HIV）．在我国,艾滋病流行形势也十分严峻．引起艾滋病的病原体是人类免疫缺陷病毒（Human Immuno—deficiency Virus,HIV）,或称为艾滋病病毒．HIV侵入人体后主要破坏人体的免疫系统,使人体发生多种难以治愈的感染和肿瘤,     

针对HIV—1进入细胞过程的抑制研究进展

ＨＩＶ１进入宿主细胞的过程可简单归纳为：ＨＩＶ１首先通过其囊膜糖蛋白复合物ｇｐ１２０ｇｐ４１中的ｇｐ１２０与靶细胞上的受体ＣＤ４结合,使得ｇｐ１２０的构象发生改变,并继而与靶细胞上的辅受体ＣＸＣＲ４或ＣＣＲ５结合,结果导致ｇｐ４１的构型改变,暴露出其融合肽并插入到宿主细胞膜,从而启动病毒膜与细胞膜的融合,完成病毒进入宿主细胞的感染过程。１针对ＨＩＶ１ｇｐ１２０与ＣＤ４结合反应的抑制剂１．１可溶性ＣＤ４片段及其衍生物早期研究曾证明重组表达的可溶性ＣＤ４片段对体外培养的ＨＩＶ１具有明显的抑制活性,在…     

抗藤黄微球菌Rpf结构域单克隆抗体的制备与特性鉴定

目的:克隆、表达藤黄微球菌Rpf结构域多肽,并制备针对该多肽的单克隆抗体(mAb).方法:采用聚合酶链反应(PCR)藤黄微球菌基因组中扩增出藤黄微球菌Rpf结构域基因,用限制性内切酶消化后插入到pUC-19克隆载体中,测序正确后,再亚克隆到融合表达载体pPro-EXHT中,转化大肠杆菌DH5α,目的基因经IPTG诱导,由T7启动子调控表达了氨基端带6个连续组氨酸残基的Rpf结构域基因多肽,在变性条件下纯化目的蛋白.用纯化的目的蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,进行细胞融合、克隆化制备抗Rpf domain单抗(mAb),用ELISA法初步鉴定其特异性和相对亲和力.结果:在变性条件下用Ni2 -NTA亲和色谱柱纯化目的融合蛋白,纯化获得的蛋白纯度大于90%.用该融合蛋白免疫小鼠后,获得了3株抗Rpf domain mAb,这3株mAb均特异性识别Rpf domain多肽.结论:所获得的抗Rpf domain mAb特异性强、效价高,对进一步研究Rpf domain在结核病免疫预防中的作用提供了有力的工具.     

乙型肝炎病毒截短C基因与前S1基因在大肠杆菌中的融合表达及纯化

目的：构建乙型肝炎病毒（HBV）截短C基因和前S1基因重组原核表达质粒,获得融合蛋白的表达并进行抗原性分析．方法：PCR扩增获得截短C基因片段和前S1基因,双酶切后克隆至原核表达质粒pET28a,转化E．coli DH5α,酶切鉴定得阳性重组质粒pET28a并测序;然后转化E．coli B121,IPTG诱导融合蛋白表达,薄层扫描分析表达蛋白组成;可溶性分析后用Ni^2＋ -NTA凝胶亲和层析柱纯化、透析并浓缩融合蛋白,Westem Blot分析特异性和抗原性．结果：成功构建了HBV截短C基因和前S1基因融合的原核表达质粒pET28a—Ct—preS1,目的基因可高效表达,表达产物主要以包涵体形式存在,Ni^2＋ -NTA纯化可获得目的蛋白,纯化蛋白具有良好的抗原性和特异性．结论：HBV截短HBcAg和preS1抗原融合蛋白可高效表达并得到纯化,为研究新型乙肝疫苗奠定了基础．     

融电子教案与传统教案于一体的新型电子教案的制作设计

利用Powerpoint2000的"备注"栏功能,将纸质文件教案的注释和内容等写入备注栏;利用计算机设置功能,把Win-dows桌面扩展到另一台监视器上。结果是教员使用的电脑显示器可以同时显示幻灯和备注内容,而学员观看的投影大屏幕上只显示幻灯内容,隐去备注内容,由此设计出集传统纸质教案与传统电子教案于一体的新型电子教案,极大的方便了教员上课,提高了教学效果,省时省力,具有推广使用前景。     

HV单链抗体/鱼精蛋白片段融合蛋白1A8 ScFv/Cκ/P的构建和表达

目的:构建汉坦病毒(Hantavirus, HV)单链抗体/鱼精蛋白片段融合蛋白1A8 ScFv/Cκ/P基因的原核表达载体,蛋白经表达后纯化并进行1A8 ScFv/Cκ/P融合蛋白的功能活性鉴定.方法:采用PCR的方法,扩增单链抗体基因1A8 ScFv和1A8 ScFv/Cκ,将鱼精蛋白片段的编码序列设计入扩增引物,获得HV单链抗体/鱼精蛋白片段的融合蛋白基因1A8 ScFv/Cκ/P. 将获得的重组基因克隆入原核表达载体pET32a,并在大肠杆菌BL21中表达. 表达产物经SDS-PAGE和Western Blot鉴定,用Ni-NTA螯合层析介质进行纯化. 采用ELISA方法分析1A8 ScFv/Cκ/P融合蛋白与HV抗原的结合活性,凝胶迁移阻滞实验检测1A8 ScFv/Cκ/P融合蛋白与质粒DNA的结合活性. 结果:成功构建了HV 1A8 scFv/Cκ/P融合蛋白基因的表达载体,在大肠杆菌中实现了可溶性表达. 通过功能活性测定,纯化的1A8 scFv/Cκ/P融合蛋白既保持了与HV抗原的结合能力,同时又具有与核酸的结合活性. 结论:构建和表达的HV 1A8 scFv/Cκ/P融合蛋白具有HV抗原结合活性和DNA结合的活性.