间接免疫荧光试验在生殖器疱疹诊断中的应用

目的评价间接免疫荧光试验(IFA)在生殖器疱疹(GH)诊断中的应用价值。方法采用以单纯疱疹病毒(HSV)型共同性单克隆抗体为夹心的IFA方法,检测了120例临床诊断为GH患者皮疹中的HSV,并与病毒培养法进行比较。结果 IFA检测HSV的总阳性率为85.8%,高于病毒培养法的阳性率(70.8%,χ2=12.04,P0.01)。两种方法检测GH患者皮肤水疱内的HSV阳性率分别为93.3%和90.0%,差异无统计学意义(χ2=1.96,P0.05);而检测糜烂和结痂性皮疹内的HSV时,IFA的阳性率分别为92.6%和69.4%,均分别高于病毒培养法(75.9%,χ2=5.82,P0.05;47.2%,χ2=14.17,P0.01)。结论 IFA具有简单、快速、敏感性高的优点,适用于检测GH患者皮疹内HSV,有临床实用价值。     

4例HIV-1耐药感染者的发现及其耐药毒株的分离与检测

目的研究从笔者发现的4例HIV-1耐药感染者分离获得的HIV-1毒株是否为耐药毒株。方法用RT-PCR法连续检测13例HIV-1感染者在接受抗病毒治疗过程中血浆病毒载量的变化情况;用HIV-1感染者淋巴细胞与健康人淋巴细胞共培养的方法从13例HIV-1感染者分离获得HIV-1毒株;从4例耐药感染者分离获得4株HIV-1毒株,在其培养液中加入逆转录酶抑制剂,检测毒株逆转录酶活性。结果13例接受抗病毒治疗的HIV-1感染者中的9例从治疗开始第1个月到第15个月中,病毒载量明显下降,感染者对于治疗药物敏感;其余4例从治疗开始第1个月到第10个月,病毒载量明显下降,从第11个月到第13个月病毒载量维持在此水平,但从第14个月到第19个月,病毒载量明显上升,持续在此水平并有上升趋势,确认为耐药感染者。病毒分离培养发现13例血样从第2周开始均出现HIV特有的细胞病变,逆转录酶的活性检测和P24抗原检测结果为阳性,成功分离获得HIV-1毒株13株。4例耐药HIV-1感染者分离获得的4株HIV-1毒株体外培养中加入逆转录酶抑制剂,发现HIV-1感染特有细胞病变持续存在,逆转录酶的活性检测和P24抗原检测结果也始终为阳性,说明此4株HIV-1毒株为耐药毒株。结论从耐药HIV感染者成功分离获得耐药HIV毒株,流行病学检测发现4例HIV-1感染者来自同一地区,有耐药毒株传播的可能。     

抗汉坦病毒单链抗体基因向拟南芥遗传转化的初步研究

目的构建抗汉坦病毒mAb1A8scFv的转基因拟南芥植株。方法从含有1A8scFv基因的重组质粒中酶切获得携带Nos终止子的抗体基因片段,将其与CaMV35S启动子相连克隆入载体pCAMBIA2301,构建1A8scFv基因的植物表达载体1A8scFv-pCAMBIA2301。通过农杆菌介导的花粉管法将其转入拟南芥,PCR及Dotblot检测是否获得转基因植株,ELISA和固相酶联斑点实验检测表达产物的生物学活性。结果酶切鉴定结果证明1A8scFv基因被成功克隆入植物表达载体pCAMBIA2301,构建获得1A8scFv-pCAMBIA2301重组质粒。PCR及Dotblot检测证明获得抗汉坦病毒mAb1A8scFv的转基因拟南芥植株。ELISA和固相酶联斑点实验结果证明在转基因拟南芥中成功表达了具有生物学活性的抗汉坦病毒mAb1A8scFv片段。结论成功地将外源基因转入拟南芥中并表达,为进一步研究利用植物表达医用抗体奠定了基础。     

结核分枝杆菌RpfA融合蛋白的免疫学和生物学特性的初步研究

目的在大肠杆菌中表达并纯化结核分枝杆菌RpfA融合蛋白,并初步研究其免疫学和生物学特性。方法Rp-fA融合蛋白免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测免疫小鼠的体液免疫应答效果。分离小鼠的脾淋巴细胞,MTT法检测淋巴细胞增殖指数,ELISA法检测培养液上清IFN-γ,IL-2含量;MTBH37Rv毒株静脉感染免疫小鼠,测定脾脏细菌负荷。将不同浓度的复性RpfA融合蛋白和特异性多抗加入到MTBH37Ra中,测定H37Ra的生长曲线。结果RpfA融合蛋白免疫小鼠的脾淋巴细胞的增殖指数达到3.57,高于生理盐水对照组的1.27(P<0.05);培养上清中IFN-γ含量为362.99±72.75ng/L,IL-2含量为210.10±20.19ng/L,而生理盐水对照组含量均低于50ng/L(P<0.05)。免疫小鼠脾脏细菌负荷计数为5.57±0.37(log10CFU±S),而生理盐水对照组为6.54±0.22(P<0.05)。RpfA融合蛋白对H37Ra的生长有明显促进作用,而加入特异性多抗后可以抑制RpfA融合蛋白的促生长作用。结论RpfA融合蛋白免疫小鼠可引起体液免疫和保护性细胞免疫,可能作为基因疫苗的候选组分。RpfA融合蛋白对H37Ra生长有明显的刺激作用,可能作为快速培养检验结核分枝杆菌的添加组分。     

人源性抗HFRS病毒抗体轻链基因在Sp2／0细胞中的初步表达

目的 在前期工作的基础上,进一步将人源性抗HFRS病毒抗体轻链基因转染到鼠骨髓瘤细胞Sp2/0并进行初步表达。方法 将含人源性NHFRS本轻链基因的真核表达载体VkEpSV-neo,用脂质体法转染鼠骨髓瘤细胞Sp2/0,用RT－PCR法和免疫组化法染色法检测转染及表达结果。结果 RT－PCR和免疫组化染色结果表明人源性抗HFRS病毒抗轻链基因不仅已成功地转染进Sp2/0细胞,并得到了良好的表达。结论 在鼠骨髓瘤细胞Sp2/0中成功表达人源性抗HFRS病毒抗体轻链基因,对抗HFRS病毒抗体人源化的研究具有重要意义。     

我校召开肾综合征出血热学术讨论会并成立协作研究组

肾综合征出血热(HFRS)的临床及基础理论研究,是我校的重点课题。为检阅“六五”期间我校HFRS研究工作情况和论证“七五” 期间HFRS科研规划,1985年10月21日和22日召开了HRS学术讨论会。参加的有训练部,附属一、二院的领导及临床、基础有关人员共40余人。     

The Antigenic Analysis of Hemorrhagic Fever with Renal Syndrome Viruses in China by Monoclonal Antibodies

Thirty-five strains of HFRS virus isolated from the patients andseveral host animals in various areas in China were analyzed by IFATwith 10 McAbs specific for HFRS virus.It has been proved that thereare antigenic differences among the strains.The HFRS virus strainsrevealed nine different reactions for the McAb,showing that there are atleast nine different antigenic determinants,including group-,type-andstrain-specific.The analytical result shows that antigenic differencesamong the HFRS virus strains are mainly related to difference in the hostanimals.     

胶体金免疫电镜技术鉴定一株抗HFRS病毒囊膜糖蛋白和核蛋白双特异性McAb

采用超薄切片和胶体金免疫电镜技术鉴定抗HFRS病毒McAb 3G1,结果发现其既对成熟病毒颗粒和囊膜颗粒标记阳性,又对颗粒状包涵体及丝状颗粒包含体标记阳性,从而提示该株McAb可能具有HFRS病毒囊膜糖蛋白和核蛋白双特异性。