结核分枝杆菌RPF蛋白的生物学特性及其在结核病疫苗研究中的应用

复活促进因子(resuscitation-promoting factor,RPF)最初是在藤黄微球菌(M.luteus)中发现,该因子可以在g×10-12水平以自分泌和旁分泌形式促进休眠菌的复活和生长,其机制可能是参与了细胞间的信号转导[1]。RPF除能促使休眠菌复活和生长以外,对正常生长的细菌也有效。由于RPF的功能类似于真核生物的生长因子,所以被称为细菌的生长因子[2]。目前已查明RPF氨基酸的顺序并确定了编码这种蛋白的基因,相似的RPF基因广泛分布在碱基G和C高比率含量的革兰阳性菌中。一、结核分枝杆菌(MTB)中存在编码RPF蛋白的基因经杂交试验证实在多种分枝…     

检测HFRS患者血清IgM抗体的ELISA捕捉法的建立

肾综合征出血热(HFRS)在我国流行广泛,病死率较高。本病绝大多数患者在发病初期就有特异性IgM抗体产生,及时检出此类抗体对于HFRS的早期诊断和治疗有重要意义。我们曾建立一种检测IgM抗体的ELISA间接夹心法,其特异性和敏     

汉坦病毒嵌合基因G2S0.7与CTL多表位重组腺病毒的构建及免疫学分析

目的:构建含有汉坦病毒M基因(编码糖蛋白G2)和部分S基因(编码核蛋白主要抗原区段)以及S基因的多个CTL表位的多种重组腺病毒表达载体,并对这些重组腺病毒的免疫学特性进行研究。方法:构建含目的基因的重组腺病毒载体,并在VeroE6细胞中进行表达,利用纯化后的重组腺病毒免疫BALB/c小鼠,通过ELISA、微量细胞中和试验、T淋巴细胞增殖实验及CTL杀伤实验等方法检测免疫反应。结果:成功表达出可被抗汉滩病毒核蛋白及糖蛋白G2的特异性单克隆抗体(mAb)所识别的融合蛋白;重组的腺病毒可以有效诱导针对汉坦病毒NP及GP的体液免疫应答和细胞免疫应答;同时我们发现含有CTL表位的重组腺病毒比不含CTL表位的重组腺病毒可以诱导小鼠产生更为有效的细胞免疫反应。结论:构建的含CTL多表位的重组腺病毒可以有效的提高嵌合基因刺激细胞免疫应答的能力。     

结核分枝杆菌esat6-cfp10融合基因疫苗的构建及表达

目的：构建结核分枝杆菌esat6-cfp10融合基因疫苗并对其在体外进行表达。方法：用PCR技术从MTB毒株H37Rv基因组DNA中扩增cfp10基因,以Hindm和EcoR Ⅰ双酶切后克隆人含esat6基因的pGEM-7zf( )载体中,将测序正确的esat6-cfp10融合基因按照BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切位点亚克隆人真核表达载体pcDNA3．1( ),重组质粒酶切鉴定正确后以脂质体转染CHO细胞,分别以RT—PCR方法检测mRNA表达和间接免疫荧光技术检测目的蛋白的表达．结果：PCR获得的cfp10基因序列与献报道一致,大小约为350bp．重组真核表达质粒酶切后可获得约630bp的融合esat6-cfp10基因片段．RT—PCR可获得大小约为350bp的诉CFP10基因,间接免疫荧光检测后表达有Esat6-Cfp10蛋白的阳性细胞着染．结论：成功克隆结核分枝杆菌CFP10基因,构建了融合有esat6-cfp10基因的真核表达质粒并对其在体外进行了表达。     

检测抗肾综合征出血热病毒mAb在患者体内代谢的方法建立与应用

目的 :研究抗HFRS病毒鼠源性mAb治疗HFRS患者后其体内血药浓度的变化以及抗鼠抗体的产生情况 .方法 :建立检测人血清中鼠IgG及抗鼠抗体的ELISA方法 ,并以此检测二期及三期临床试验的HFRS患者血清 1 6 5份 .结果 :建立的两种方法均特异性强 ,敏感度高 ,稳定性好 .观察到血清中鼠IgG血药浓度在用药后 1～ 3d最高 ,平均为(1 .0 4± 0 .84 )mg/L ;随后迅速下降 ,6～ 1 0d组平均浓度为(0 .2 1± 0 .2 1 )mg/L ;用药 1 2d以后绝大多数已测不到 .而抗鼠抗体主要产生在用药 1 2d以后 ,阳性率为 78.0 % ,平均效价为 1∶5 5 7;用药后 6～ 1 0d组的阳性率为 2 8.6 % ,平均效价为1 3∶5 5 .结论 :抗HFRS病毒mAb(鼠IgG)在HFRS患者体内代谢较为迅速 ,而 1 2d后产生的抗鼠抗体不是影响其代谢的主要因素 .     

三级生物安全实验室操作病原微生物的体会

根据生物安全的的分级,结合我国病原生物学实验室的现状,阐述如何在三级生物安全实验室操作病原微生物,实验室出现问题应如何处理,对今后明确操作各种病原微生物的生物安全等级、掌握实验安全技术提供借鉴作用.     

重视单克隆抗体在病毒性疾病治疗中的研究与应用

病毒性疾病对人类健康危害极大,易引发严重的公共卫生问题,其中绝大多数目前尚无特效治疗药物。纵观病毒性疾病的治疗历史与现状,一些特异性免疫球蛋白发挥了重要作用,例如麻疹、甲型肝炎、狂犬病、呼吸道合胞病毒感染、巨细胞病毒感染以及水痘—带状疱疹病毒感染等[1]。免疫球蛋白是由免疫血清中提取的多克隆抗体,优点是其组成中的多个中     

《实用单克隆抗体技术》

本书的特点是普及与提高相结合、实用性强。全书共分三部分。第一部分侧重于技术方法,编者结合自己多年实践经验,从与单克隆抗体的制备及鉴定有关的大量技术方法中选择出目前较常用的、特别是在一般单位也能开展的方法加以详细叙述,使读者确实能用以指导操作。第二部分侧重于应用,介绍了近年来在医学等若干重要领域内应用单克隆抗体所取得