机械激活离子通道压力蛋白与细胞骨架的相关性研究

目的探讨周期性机械牵张应力作用下,人软骨细胞中新型机械激活离子通道压力蛋白(Piezo1)与细胞骨架的关系。 方法体外培养骨关节炎病人软骨细胞,然后利用多通道细胞牵张应力加载系统处理细胞,根据预实验结果分成无牵张应力组(空白组),2 h牵张应力组,12 h牵张应力组,24 h牵张应力组,48 h牵张应力组和相应的抑制剂浓度为0.275 mmol/L的蜘蛛毒液肽(GsMTx4)组以及浓度为0.573 mmol/L细胞松弛素D组。免疫组化鉴定软骨细胞,荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测不同力学条件刺激下各组细胞的Piezo1的表达量。以及细胞松弛素D作用下Piezo1的表达量。免疫荧光定位人软骨细胞Piezo1蛋白的表达,激光共聚焦显微镜观察各组细胞的细胞骨架以及Piezo1蛋白共染相关性。RT-q PCR结果比较采用单因素方差分析,两两组间比较采用q检验。 结果RT-q PCR检测结果显示,2 h牵张应力组比空白组Piezo1的表达量有所增加,但差异无统计学意义(P>0.05)。12 h牵张应力组比空白组相比有统计学意义(F＝9.785,P<0.05)。24 h牵张应力组表达量最多,48 h牵张应力组表达量有所降低。经GsMTx4处理后的各组Piezo1的表达量均出现明显降低(F＝13.907,P<0.001)。在牵张应力作用下,2 h牵张应力组至24 h牵张应力组细胞骨架呈渐进性增粗、浓集现象,但是48 h牵张应力组软骨细胞却出现了细胞骨架的松散与降解。相应的RT-qPCR结果显示Piezo1 mRNA表达量与细胞骨架的浓集与松散情况具有相同的趋势。GsMTx4处理后的各加力组表达均下降。 结论机械敏感性离子通道Piezo1的开放和关闭是与细胞骨架微丝F-actin肌动蛋白密切相关,由细胞骨架F-actin形变激活Piezo1蛋白通道,并与力学加载呈时间依赖性。     

红景天苷对大鼠胸主动脉血管的舒张作用及机制研究

目的:考察红景天苷舒张血管的作用及机制,分析其可能的作用靶点。方法:取同批大鼠胸主动脉制成离体血管环,通过记录血管环的张力变化,观察给予不同处理时,红景天苷对血管环舒缩作用的影响。结果:红景天苷(10-11mol/L~10-5mol/L)可内皮依赖性地舒张血管;0.01mmol/L吲哚美辛(Indomethacin)可使红景天苷的量效曲线下降趋势明显减弱,而0.1mmol/L亚硝基左旋精氨酸甲酯(L-NAME)则无明显影响;0.1mmol/L Ba Cl2也不影响红景天苷的舒张血管作用;10-6mol/L和10-5mol/L红景天苷可减缓无钙高钾环境下Ca2+收缩曲线的上升趋势,并可抑制无钙液中PE引起的缩血管作用。结论:红景天苷对胸主动脉血管的舒张作用具有内皮依赖性,并与内皮产生的前列环素有关,与NO-CGP通路无关。而红景天苷对VDCC和ROCC介导的胞内钙升高的直接调节则可能介导了其内皮非依赖性的血管舒张作用。     

3-硝基丙酸预处理对大鼠脑组织缺血-再灌注损伤的保护作用与神经细胞骨架蛋白的相关性研究

目的在蛋白质水平探讨3-硝基丙酸(3-NAP)预处理对缺血-再灌注损伤(IRI)大鼠的脑保护作用的可能机制。方法采用大脑中动脉线栓法(MCAO)制备脑缺血再灌注模型,对3-NPA预处理的大鼠(预处理组)与单纯IRI组大鼠(IRI组)应用荧光差异双向凝胶(2D-DIGE)电泳、基质辅助激光解析/电离-飞行时间质谱分析(MALDI-TOF MS)及数据库检索鉴定出差异表达的神经细胞骨架蛋白。结果预处理组与IRI组相比有52种蛋白表达量具有显著性差异,其中鉴定出15种主要的差异蛋白质,神经细胞骨架相关蛋白有7种。结论一些神经细胞骨架相关蛋白可能对IRI后的脑组织具有保护作用。     

转化生长因子β3基因转染兔骨髓间充质干细胞诱导其向软骨表型的分化

背景：内源性诱导软骨分为就是通过一定的载体将目的基因整合入干细胞内,使其自行分泌诱导因子诱导自身进行分化。 目的：观察将转化生长因子β3通过腺相关病毒载体转染诱导兔骨髓间充质干细胞向软骨表型转化的能力。 方法：取体外培养的第3代骨髓间充质干细胞进行重组腺相关病毒转染,将转染后3,6,9,12 d细胞裂解提取蛋白进行酶联免疫检测目的蛋白转化生长因子β3的体外表达。RT-PCR,免疫印迹western blot分别从基因和蛋白水平上检测1,2周Ⅱ型胶原的表达,甲苯胺蓝染色检测1,2周蛋白多糖的表达。 结果与结论：重组腺相关病毒转染后,骨髓间充质干细胞可以较稳定的表达目的蛋白转化生长因子β3,并且转染成功的骨髓间充质干细胞较阴性对照组能够更好的向软骨表型转化。证实转化生长因子β3可以腺相关病毒为载体转染骨髓间充质干细胞并诱导其向软骨表型分化。     

非诱导脂肪源性干细胞对修复全层透明软骨创伤的可行性研究

目的探讨源自分布广泛的脂肪组织的干细胞的体内分化潜能及非诱导修复全层透明软骨缺损的效果。方法体外切取脂肪组织并分离培养脂肪源性干细胞（ADSCs）。随机将36只新西兰大白兔分为三组,混合有藻酸钙凝胶的ADSCs用来填充髌股关节的全层透明软骨损伤,凝胶修复或未做治疗组作为对照组。4周和12周后对重建组织进行大体和光镜、电镜下观察,组织学分析和定量计分也用于检测结果。结果ADSCs重建的组织白色质韧,完全充填缺损处,表面光整与周围软骨连接,修复组织的微观结构与软骨相似,含有更多的细胞和规则的基质纤维,基质有甲苯胺蓝异染性,优于其他各组。透射电镜可见大量胶原纤维环绕细胞周围。凝胶组和对照组修复组织为薄层纤维组织。修复效果评分的统计分析显示实验组在各时问点上与其他组相比有统计学差异（P〈0.01。结论这些结果表明源自成熟脂肪而未经诱导的干细胞拥有修复软骨创伤的能力,组织显示为透明样,产生生物学可行性结果。     

脑脉泰对慢性脑缺血致血管性痴呆大鼠脑血流量及海马神经元凋亡的影响

目的研究慢性脑缺血致血管性痴呆大鼠海马区局部脑血流量(rCBF)改变及细胞凋亡情况,探讨脑脉泰治疗血管性痴呆的疗效及可能机制。方法采用双侧颈总动脉永久结扎法(2VO)制备慢性脑缺血致血管性痴呆的动物模型,随机分为假手术对照组(12只)、模型对照组(12只)、给药组(脑脉泰)(12只)。手术后4周,HE染色观察神经元形态学改变,免疫组化染色检测海马区Caspase-3、bax蛋白表达变化。应用激光多普勒血流仪检测各组大鼠海马局部脑血流量。结果模型对照组大鼠海马Caspase-3、Bax阳性细胞灰度平均值低于假手术对照组、给药组,差异均具有显著性(P0.05);模型对照组海马rCBF低于假手术对照组、给药组,差异均具有显著性(P0.05)。结论VaD模型大鼠海马rCBF下降,海马神经细胞凋亡增加;脑脉泰能增加实验大鼠海马局部脑血流量,抑制海马神经细胞凋亡。     

19例球形肺炎的病原学分析

目的分析春季球形肺炎病原体的构成,为春季球形肺炎的治疗提供重要临床依据。方法留取患者血清采用间接免疫荧光法检测11种呼吸道感染病原体IgM抗体。结果 19例球形肺炎患者病原体检测,病毒抗体阳性为17例(89.5%),非典型病原体抗体阳性为9例(47.4%),细菌为1例(5.3%)。其中流感病毒感染为14例(73.7%),混合病毒感染为8例(42.1%)。结论春季发生的球形肺炎治疗上不能单纯的依据传统的球形肺炎病原体进行经验性抗感染治疗,切不要忽略呼吸道病毒的感染。     

从“气能调神，神可御气”角度探讨津沽脏腑推拿治疗郁证的理论依据

神志病的发病率逐年上升，而郁证是临床上较为常见的神志疾病，影响人们正常生活和工作。“气能调神，神可御气”是津沽推拿学术带头人王金贵教授所提出，文章将系统解释其理论内涵，同时进一步分析其对津沽脏腑推拿的指导意义，进而为津沽脏腑推拿治疗神志疾患提供理论支持，也为推拿治疗功能性内科疾病提供治疗新的思路和方法。     

基于卫气营血辨治功能性低热

功能性低热被认为是植物神经功能紊乱或者体温调定功能障碍的结果，现代医学尚无有效的治疗措施。中医学认为该病属“内伤发热”范畴，文章系统论述了功能性低热的辨证论治，并对卫气营血辨证指导下，动态辨治夜间低热的验案1则进行报道，着重探讨本病的邪伏阴分证，以期为临床治疗功能性低热提供思路，以飨同道。     

津沽脏腑推拿治疗功能性内科疾病的术式特点与临床应用分析

津沽脏腑推拿作为天津推拿学术流派的重要分支，以中医基础理论为指导，深谙“外治之理亦内治之理”，在临床诊疗中强调谨守病机，注重调畅气机、调节脏腑阴阳之间的平衡。津沽脏腑推拿特色术式组合思路来源于中医处方“君臣佐使”的配伍原则，根据不同证型，将脏腑推拿手法有机配伍结合的施术模式，具有灵活性、整体性、辨证观的特点。津沽脏腑推拿特色术式主要有温阳调冲式、补气养脏式、理气行滞式、行气化湿式、抑木扶土式五大术式，在治疗功能性内科疾病方面疗效显著，值得推广。