螨类变应原的聚类及相关生物信息学分析

目的分析螨变应原的聚类、所属的蛋白家族及其氨基酸序列组成特点。方法从国际免疫学会联合会变应原命名数据库获得螨类变应原氨基酸序列,采用生物信息学方法进行进化树构建、蛋白质家族和超家族分类、序列比对、二级结构分析和序列相似度分析。结果螨类变应原第1~24组分在系统进化树中按照功能聚类成7大簇,归属于Trypsin等16个蛋白质家族和E set domains等13个蛋白质超家族。通过序列比对,获得螨类变应原第1、2组分的一致性氨基酸和独有氨基酸信息及第1、2组分亚型间氨基酸置换信息。螨类变应原第1、2组分的二级结构基本都由α-螺旋、延伸主链和无规卷曲构成,但Tyr p 2的二级结构不含α-螺旋。Der f 1、Der p1和Eur m 1序列相似度高(82.77%~84.50%),在进化树中也聚类在一起;Der f 2、Der p 2和Eur m 2亦然(相似度分别为84.17%~85.15%)。结论螨类变应原第1~24组分归属于16个蛋白质家族和13个蛋白质超家族,并聚类为7个簇,每簇变应原都有其特定功能,可为新变应原的寻找和变态反应学的基础研究提供参考,并为重组变应原的研究提供新的方向。     

腐食酪螨转录组测序及生物信息学分析

目的　获得腐食酪螨转录组数据,为后续基因功能研究奠定基础。方法　基于Illumina HiSeqTM 2000高通量测序平台,对腐食酪螨雌雄混合螨体进行测序,采用Trinity软件组装转录本获得单基因簇（Unigenes）。将单基因簇与非冗余蛋白质序列（RefSeq non?redundant protein sequence,NR）数据库、核苷酸序列（nucleotide sequence database,NT）数据库、Swiss?Prot数据库、京都基因和基因组百科全书（Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG）数据库、直系同源簇（clusters of orthologous groups,COG）数据库中的蛋白质序列进行比对,对其进行功能注释。将单基因簇按照NR、Swiss?Prot 蛋白库优先级顺序进行编码序列（coding sequence,CDS）比对、预测。利用MISA软件对腐食酪螨Unigenes进行简单重复序列（simple sequence repeats,SSR）位点分析。使用SOAPsnp技术检测螨虫单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism,SNP）。结果　转录组测序数据质控后获得4.67 Gb高质量数据,组装后获得51 271个单基因簇,总长度为41 848 995 个核苷酸（nucleotide,nt）、平均长度为816 nt。将单基因簇与公共数据库进行比对和功能注释后,得到29 053个有功能注释的Unigenes。预测发现27 443条CDS,检测到23 092个SSR位点信息和148 027个SNP位点信息。结论　通过测序技术建立了腐食酪螨转录组数据库,获得了大量腐食酪螨转录本信息,为后续过敏相关基因功能学研究奠定了基础。     

哲学思维在寄生虫学检验教学中的培养与应用

哲学教育是医科学生素质教育系统工程中的一个重要因素,哲学思维的培养能有效地促进人文知识和医学知识的融合,更有利于提高学生运用哲学基本原理认识、分析和解决问题的能力.该文以医学检验临床应用特色为切入点,从培养学生的哲学思维等方面探讨如何提高医学检验专业寄生虫学检验教学质量.     

中西药联合治疗支气管哮喘的疗效和免疫学观察

目的:探讨中西药联合治疗支气管哮喘的效果及其对患者免疫功能的调节作用.方法:缓解期哮喘患者86例随机分为治疗组(n=51)和对照组(n=35),均给予常规治疗,治疗组加用中药汤剂.治疗前、后用ELISA法检测所有患者血清总IgE,IFN-g和IL-4;并用流式细胞术检测外周血CD3 ,CD4 和CD8 含量.结果:治疗组和对照组的总有效率分别为90.2%(46/51)和74.3%(26/35),差异具有显著性(P＜0.01).与治疗前比较,中西药联合治疗后患者外周血CD3 和CD4 含量增加,CD4 /CD8 比值上升;IFN-g水平上升,IL-4水平下降,IFN-g/ IL-4比值上升.结论:中西药联合治疗哮喘效果良好,且中药汤剂可调节患者免疫功能,使机体Th反应趋于平衡.     

冠心病患者基质金属蛋白酶-9和基质金属蛋白酶组织抑制物-1表达的临床意义

1对象和方法 1.1对象 盐城市第一人民医院2006-12／2007-06住院的冠状动脉粥样硬化性心脏病（CAD）患者60（男38,女22）例,年龄为38-75（64.4±9.9）岁,以WHO关于缺血性心脏病的命名和诊断标准为依据,根据病史、临床表现、心电图、心肌酶谱等确诊,经冠状动脉造影证实至少1支动脉直径狭窄≥50％,其中心肌梗死患者（AMI）36例,     

冷沉淀在痔瘘科的应用研究

目的探讨冷沉淀在痔瘘科的应用价值.方法 192例患者随机分为实验组和对照组,实验组术后创面外用冷沉淀,对照组术后创面用常规药物处理,比较分析两组创面愈合时间的长短.结果实验组肛周脓肿、肛瘘、痔疮病人创面平均愈合时间比对照组分别缩短5.68d,6. 01d,1.87d.结论冷沉淀具有明显的促进痔瘘疾病术后创面愈合的作用.     

储藏菜种粉螨孳生情况初步调查

粉螨是节肢动物中的一大类群 ,分类学上属蛛形纲(Arachnida)蜱螨亚纲 (Acari)真螨目 (Acariformes)粉螨亚目(Acaridida)。其种类繁多、生境广泛 ,与人类健康及医学关系密切。为深入了解粉螨的生态环境 ,2 0 0 3年 3～ 4月作者等调查了淮南市唐山镇邱村储藏蔬菜种子粉螨孳生情况 ,并作鉴定、分类。1　材料与方法1.1　材料　所有待检蔬菜种子均为淮南市唐山镇邱村村民储藏 ,保存时间均 >3个月。1.2　检查方法　采用直接镜检法[1] 。样品称重 (10 g)后 ,置平皿内 ,连续变倍显微镜下 ,用零号毛笔将样本从平皿一侧拔至另一侧 ,当发现螨时判为阳…     

人芽囊原虫感染者外周血T细胞亚群及膜白介素-2受体的检测

目的探讨人芽囊原虫感染者外周血T细胞亚群及膜白介素-2受体(mIL-2R)的变化。方法采用生物素一链霉亲和素(BSA)法对卵囊阳性患者进行外周血T细胞亚群、mIL—2R检测。结果人芽囊原虫卵囊阳性者CD_3~+、CD_4~+、CD_8~+和CD_4~+/CD_8~+阳性百分率分别为(65.83±6.55)％、(43.55±6.10)％、(28.43±4.32)％和 1.58±0.32,静息期与诱导期mIL-2R表达水平分别为(2.92±1.06)％和(33.45±2.31)％;人芽囊原虫卵囊阴性者CD_3~+、CD_4~+、CD_8~+和CD_4~+/CD_8~+阳性百分率分别为(55.87±7.23)％、(39.26±6.43)％、(30.04±5.67)％和1.36±0.41,静息期与诱导期mIL—2R表达水平分别为(4.31±1.47)％和(35.41±3.12)％,两者相比,差异均有显著性(P<0.05～0.01)。结论人芽囊原虫感染与细胞免疫功能密切相关,T细胞亚群、mIL-2R在抗人芽囊原虫感染中起重要作用。     

粉尘螨变应原第2组分基因的原核表达及生物信息学分析

目的:克隆并原核表达粉尘螨变应原第2组分重组蛋白,鉴定其变应原性,分析其分子特征,为制备用于临床诊治的变应原奠定基础。方法:提取粉尘螨Total RNA,根据国际基因库(AB195580)设计并合成引物,经RT-PCR合成Derf 2全长基因,与pMD19-T载体连接后,热转化至E.coliJM109;将测序正确的Der f 2基因与pET28a(+)Vector连接,转化BL21(DE3),IPTG诱导表达;经镍琼脂糖凝胶FF亲和柱层析,收集各阶段洗脱峰用梯度透析法进行复性,Western blot鉴定重组蛋白的变应原性。用生物信息学软件预测其理化性质、空间结构,并构建分子进化树。结果:RT-PCR成功扩增获得目的基因Der f2,全长441 bp,与参考序列同源性99.3%。将构建的pET28a(+)-Der f 2质粒转化宿主菌E.coliBL21诱导表达,SDS-PAGE电泳显示全细胞和沉淀物中均有蛋白表达。亲和柱层析后获得约3.86 mg重组蛋白纯品,Western blot分析表明其可与哮喘患儿血清IgE发生特异性结合。去除信号肽序列(1～17氨基酸)后,重组蛋白由129个氨基酸组成,相对分子质量为14.076,二级结构由延伸主链(30.82%),无规则卷曲(49.32%),α螺旋(19.86%)组成。该变应原可能位于线粒体,属ML域家族。序列比对显示,粉尘螨和屋尘螨、微角尘螨、梅氏嗜霉螨的相似度依次为88%、96%、83%,此四种螨在上述蜱螨变应原第2组分构建的分子进化树中聚成一簇,支持率达100%。结论:粉尘螨变应原第2组分原核表达获得成功,纯化后获得具有变应原性的重组蛋白,为进一步规模生产该变应原并用于临床诊治奠定基础;生物信息学分析初步获得了该变应原的分子特征,为进一步实验室验证指明方向。     

重组纳米级粉尘螨变应原第1组分的制备及其在哮喘小鼠中的作用研究

目的应用基因工程技术获得纳米级粉尘螨变应原第1组分s-layer/Der f 1,建立重组纳米级变应原的方法。方法利用S-layer/Strep-tag I这一具有自我组装能力的纳米模式母体嵌合粉尘螨变应原第1组分,并置大肠杆菌中表达,用分离纯化获得的表达产物免疫治疗哮喘小鼠,从分子、细胞、组织和器官4个层面证实该重组变应原诱导哮喘小鼠免疫耐受的可能性和有效性。结果采用基因工程技术将球形芽孢杆菌S层蛋白编码基因sllB的3′端去除600 bp后与尘螨主要变应原第1组分Der f 1连接,5′端与Strep-tag I的编码基因连接,成功构建克隆质粒pMD19-T-Strep-tag I/sllB1-2 706 bp/Der f 1,测序正确后,成功构建表达质粒pET28a(+)-Strep-tag I/sllB1-2 706 bp/Der f 1并转化E.coli BL21诱导表达,透射电镜显示该表达产物rDer f 1/S-layer位于工程菌表面,平均粒径为(116.43±14)nm。用获得的重组变应原rDer f 1、rDer f 1/S-layer免疫治疗哮喘小鼠,证实其可改善小鼠肺部炎症,降低支气管肺泡灌洗液中细胞总数、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和总IgE、螨特异性IgE水平,增加总IgG、螨特异性IgG水平,并上调外周血Th1型、下调Th2型细胞因子表达水平,并以重组纳米级变应原疗效更好,免疫调节作用更强。结论获得了纳米级粉尘螨变应原第1组份重组体,该制品可以诱导哮喘小鼠免疫耐受,具有较强的免疫原性,所建立的纳米级变应原原核表达体系为生产纳米药物和疫苗提供了一个新的途径。