应用70 mer Oligo基因芯片从限制性cDNA片段中钓取目的基因

目的 探讨采用单一探针寡核苷酸阵列从经限制性显示方法制备的cDNA片段中钓取目的基因片段的方法。方法酵母经常规培养,抽提mRNA逆转录成cDNA后,经限制性显示技术制备成限制性cDNA片段,根据目的基因SSA1设计70mer特异性oligo片段并打印成为寡核苷酸阵列。采用荧光标记的通用引物对上述经限制性显示技术获得的限制性cDNA片段进行标记,与oligo阵列杂交,洗脱,扫描。然后进行杂交后剥除,收集剥除液,采用限制性通用引物扩增,产物克隆于PUC18T载体中,并转化至JM109大肠杆菌中培养,抽提质粒,进行测序鉴定。结果 测序结果BLAST同源性比较表明,用该方法成功的克隆出了目的基因片段。结论 采用70mer寡核苷酸芯片可以直接从限制性显示方法处理的cDNA片段中钓取目的基因,而无需构建cDNA文库。另外,本方法也可用于oligo芯片的杂交后对有表达差异的基因的获取及研究中。     

二维超声在心脏起搏器植入术中应用价值的研究

目的 探讨二维超声(two-dimensional echocardiography,2-DE)在心脏起搏器植入术中的应用价值.方法 选择有心脏起搏器植入指征的患者36例,分为A组(n=18)和B组(n=18)分别应用二维超声引导起搏器植入和X线透视(X-ray fluoroscopy,X-ray)常规方法植入起搏器.两种方法引导起搏电极到位后测试起搏参数满意后结扎固定导管,将起搏器与导管牢固连接.记录电极导管植入到位时间、X线曝光时间、随访观察起搏效果、感染、出血等并发症,两组进行比较.结果 A组全部由2-DE引导成功16例(16/18).2-DE和X-my联合引导成功1例(1/18),1例肺气肿病人超声透声条件极差整个手术过程均改为X-my引导完成(1/18).总成功率94.4%,(P>0.05).总暴光时间A组和B组分别为0.8±0.1min和3.0±0.7min(P<0.01).电极导管植入时间A组、B组分别为9.0±0.7和8.3±0.5min(P>0.05).结论 二维超声可有效引导实施心脏起搏,联合X线透视可提高手术成功率.可明显降低X线曝光时间,减少对医患辐射的危害,可作为心脏起搏器新的植入途径,具有较好的临床用前景.     

As2O3处理前后K562细胞基因表达变化的基因芯片检测

目的应用基因芯片研究三氧化二砷(As2O3)处理前后K562细胞基因表达的变化.方法提取As2O3处理前后K562细胞的总RNA,纯化为mRNA后再反转录为cDNA.cDNA经限制性内切酶Sau3AI切割后,cDNA片段分别用Cy3和Cy5标记,与自制的包含348个基因片段的胎盘库芯片杂交.结果杂交结果经扫描和软件分析,发现了11个差异表达的基因片段,其中有3个基因片段与细胞凋亡密切相关.结论我们构建的胎盘库基因芯片可以成功地用于研究药物作用前后基因表达的变化.     

剪切修复基因XPD抑制Ox-LDL诱导人脐动脉平滑肌细胞的增殖

目的:探讨剪切修复基因——着色性干皮病D组基因(XPD)在氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)促血管平滑肌细胞增殖中的作用及机制。方法:将重组质粒pEGFP-N2/XPD利用脂质体转染人脐动脉平滑肌细胞(HUASMCs),实验分为空白对照组、空载质粒pEGFP-N2组、重组质粒pEGFP-N2/XPD组、Ox-LDL组、Ox-LDL+pEGFP-N2组和Ox-LDL+pEGFP-N2/XPD组。用MTT法和Ed U法测定各组细胞的增殖率;流式细胞术检测各组细胞周期分布;利用Western blot法检测XPD、caspase-3、Bcl-2和Bax的蛋白水平。结果:Western blot实验结果发现,与空白对照组相比,pEGFP-N2/XPD组的XPD表达增加(P0.05),表明转染成功;MTT和Ed U检测结果显示,pEGFP-N2/XPD组的细胞增殖率较空白对照组降低(P0.05);与Ox-LDL组比较,Ox-LDL+pEGFP-N2/XPD组细胞增殖明显被抑制(P0.05)。流式细胞术的检测结果显示,与空白对照组比较,pEGFP-N2/XPD组的S期细胞比例明显减少(P0.05),G0/G1期细胞比例明显增多(P0.05);与Ox-LDL组比较,Ox-LDL+pEGFP-N2/XPD组的S期细胞比例减少(P0.05),G0/G1期细胞比例明显增多(P0.05)。Western blot结果显示,与对照组比较,pEGFP-N2/XPD组的cleaved caspase-3和Bax蛋白水平增加(P0.05),Bcl-2蛋白表达降低(P0.05);与Ox-LDL组比较,Ox-LDL+pEGFP-N2/XPD组的cleaved caspase-3和Bax蛋白水平增加(P0.01),Bcl-2蛋白表达降低(P0.05)。结论:XPD能抑制HUASMCs的增殖并促其凋亡,还能抑制Ox-LDL的促HUASMCs增殖作用,有可能成为抗动脉粥样硬化治疗的靶点。     

辅酶Q10对大鼠再生肝细胞线粒体通透性转换的影响

目的 了解辅酶Q₁₀（CoQ₁₀）对大鼠再生肝细胞线粒体通透性转换（MPT）的影响。方法 雌性SD大鼠120只,用不同剂量CoQ₁₀灌胃后行部分肝切除术（PH）,于术后不同时间取肝组织分离线粒体,分光光度计法测定线粒体悬液的A540nm值,之后再加入钙离子诱导并检测A540nm值。结果 PH后6~48h,高剂量（60mg/kg）CoQ₁₀处理组的再生肝线粒体通透性明显低于对照组,而低剂量（6mg/kg）处理组只在48h明显低于对照组,其他时间均无显著差异。用钙离子诱导后,各组各时间点的线粒体通透性随时间延长而不同程度的增强,但PH后6~48 h的CoQ₁₀处理组的再生肝线粒体通透性稍小于对照组。结论 一定剂量的CoQ₁₀能降低大鼠再生肝线粒体通透性,作用主要体现在肝再生的细胞增殖阶段。     

生物化学与分子生物学专业资源库的建设

生物化学与分子生物学是重要的基础医学学科,与遗传学、免疫学等学科有着广泛的联系与交叉,是当今医学、生命科学领域的前沿学科。为了深化生物化学与分子生物学教学的改革,我单位在近年进行多媒体教学改革的基础上[1-2],组建了生物化学与分子生物学网络资源库,本文就该资源库的设计及施实作一简要介绍。1资源库内容与服务对象本资源库内容主要分为生物化学理论教学、分子生物学理论教学和生物化学实验、分子生物学实验教学等几个部分。理论部分按本专业的知识体系进行编排,生物化学理论细分为静态生物化学和动态生物化学,再设置生物大分子…     

冠状动脉造影中的一些特殊问题的认识

冠状动脉造影已成为诊断冠状动脉粥样硬化性心脏病的常规检查手段,但在我省目前只有几家省级医院能常规开展,根据我院所进行的冠脉造影体会,报道造影过程中的一些特殊问题并进行再认识.     

老年病人上腹部手术应用硬膜外阻滞复合浅全麻的临床研究

在老年病人麻醉实践中,人们在不断寻求更安全、有效、对生理干扰少的麻醉方法,老年病人的共同特点是重要脏器功能不全,尤其是心血管储备功能不全,肺功能有不同程度的减退,内分泌系统亦可发生了变化,对麻醉药的耐受性差,任何一种单一的麻醉方法,均对病人的生理产生...     

慢性乙型肝炎患者合并脂肪肝导致单纯抗病毒治疗研究

目的 探究单纯性抗病毒法治疗慢性乙型肝炎患者合并脂肪肝的临床效果.方法 选择108例慢性乙肝合并非酒精性脂肪肝患者为研究对象,将其分成两组,以保肝治疗为基础,观察组加用抗病毒治疗法,48周后,对比两组患者的血清生化指标,病毒学指标和肝脏组织指标情况.结果 经治疗后,两组患者的血清生化指标,病毒学指标和肝脏组织指标均呈现出改善趋势,组间数据存在统计学差异(P<0.05),从改善程度上来讲,观察组明显较好,组间数据存在统计学差异(P<0.05).结论 对于慢性乙肝合并非酒精性脂肪肝患者来讲,在使用保肝治疗的同时,为其提供抗病毒治疗,除了能够全面提升HBV DNA和HBsAg转阴率的同时,还能够提升肝脏功能,全面改善患者NAFLD分级情况,更好的修复患者肝脏损伤程度,提升肝脏功能,值得进一步在临床治疗中推广使用.