苗药验方四大血可减少关节炎大鼠滑膜组织的坏死性凋亡和血管新生：基于抑制RIPK1/RIPK3/MLKL通路

目的 探究贵州苗医验方“四大血”（SX）对胶原诱导型关节炎（CIA）大鼠滑膜组织坏死性凋亡和滑膜血管新生的作用机制。方法 将42只SD大鼠均分为空白组（Nor）、模型组（Mod）、雷公藤多苷片阳性对照组（GTW,40 g/kg）和SX高、中、低剂量组（SX 40 g/kg、SX 20 g/kg、SX 10 g/kg）,7只/组。构建CIA大鼠模型。建模后测量大鼠双后肢足跖肿胀程度并进行关节炎指数评分。ELISA法检测血清中TNF-α、IL-1β和IL-17变化,HE染色法观察大鼠关节滑膜病理变化,Real-time PCR检测滑膜组织中VEGF、MMP-9、Ang-1、RIPK1、RIPK3、Caspase-8 mRNA表达水平,Western blot检测滑膜组织中VEGF、MMP9、Ang-1、STAT-3、RIPK1、RIPK3、MLKL、p-MLKL、Caspase-8蛋白表达水平。结果 GTW组和SX高、中、低剂量组足跖肿胀度及关节炎指数评分均小于Mod组（P<0.05）。在光镜下观察大鼠关节滑膜病理组织切片,Mod组可见大量炎性细胞浸润,各层组织结构混乱;而药物治疗组中,炎性细胞浸润、滑膜血管新生和滑膜增生程度均降低。且随SX剂量增高,治疗效果呈逐渐增强的趋势。与Mod组相比,GTW组和SX 40 g/kg组大鼠血清中TNF-α、IL-1β和IL-17含量,滑膜组织中RIPK1、RIPK3、VEGF、Ang-1、MMP9 mRNA和蛋白表达均降低（P<0.05）,Caspase-8 mRNA和蛋白表达水平增高（P<0.05）并下调Stat-3蛋白表达和MLKL的磷酸化水平（P<0.05）。结论 SX可以改善CIA大鼠滑膜血管新生,其机制可能与抑制RIP1/RIP3/MLKL信号通路激活,并下调促血管生长因子VEGF、Ang-1、MMP9、STAT-3表达有关。     

贵州省少数民族百越系统的分子人类学分析

目的: 分析贵州省少数民族百越系统父系遗传结构,探讨其起源及迁徒.方法: 采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测贵州省百越系统7个少数民族10个单核苷酸位点(SNPs)构成的Y染色体单体型,并以省内苗族为对照分析其父系遗传结构.结果: 侗族、水族集中于Y染色体-SNP中H11单体型,H11的频率分别为92.5%及58.7%,布依族、仡佬族、仫佬族、毛南族、壮族5个民族集中于Y染色体-SNP中H8单体型,苗族样本集中于Y染色体-SNP中的H8、H11与H12单体型.结论: 贵州省从江侗族、三都水族父系遗传构成相对简单.通过主成分分析,证明贵州省从江侗族、三都水族与其他的壮侗语族人群相聚,而布依族、仡佬族、仫佬族、毛南族、壮族5个民族之间有密切联系,且与国内其他地域百越系统有较大的遗传差异,是一个相对独立的群体.     

外源性H2S对血管性痴呆大鼠缺血再灌注后神经元线粒体损伤及其相关信号通路的影响

目的 以二血管(2-VO)法制作血管性痴呆(VaD)大鼠模型,探讨神经元自噬及相关信号通路的变化及外源性硫化氢(H₂S)的神经保护作用。方法 改良2-VO结扎SD大鼠双侧颈总动脉制作VaD模型,按缺血进程急性缺血期、缺血损伤期、损伤恢复期共设置1、7、30 d 3个时间段,每个时间段各有假手术(Sham)组、模型(VaD)组、阳性对照[尼莫地平(Nimodipine)组、硫氢化钠(NaSH)低剂量(Low-NaSH)组、NaSH高剂量(High-NaSH)组。为保持药物处理时间一致,1 d及7 d,各组术前灌胃给药30 d, 30 d各组术后灌胃给药30 d, VaD组和Sham组生理盐水灌胃,Nimodipine组Nimodipine灌胃给药,Low-NaSH组、High-NaSH组NaSH灌胃给药。利用水迷宫检测30 d各组学习记忆能力。Western印迹检测海马神经元线粒体蛋白中Beclin1、P62、蛋白激酶B(Akt)、P-Akt、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、P-mTOR表达。结果 术后1 d,与Sham组比较,VaD组Beclin1、P-Akt...     

贵州西江苗族葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因突变分析

目的了解贵州西江苗族葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺陷症的基因频率、基因突变类型特点及分布特征，从分子水平揭示G6PD基因多态性。方法世代居住当地苗族男性431人，用四氮唑蓝(NBT)纸片定性法及G6PD／6PGD比值法作G6PD缺陷症筛查。确诊者用错配引物介导的聚合酶链反应／限制性酶切分析法(PCR—RE)进行中国人常见7种G6PD基因突变型分析，突变特异性扩增系统法(ARMS)验证其中3种突变。结果431人中检出G6PD缺陷28例，总检出率6．50％，缺陷症基因频率0．065。缺陷基因分析：检出突变基因cDNA95(A→G)6例，发生频率为0．214；cDNA1024(C→T)8例，发生频率为0．286；cDNA1376(G→T)1例，发生频率为0．036；cDNA1388(G→A)7例，发生频率为0．250，未知型突变6例；未发现cDNA487(G→A)、cDNA493(A→G)、cDNA592(C→T)突变。结论G6PD缺陷症在贵州西江苗族人群有着较高的的基因频率，其主要突变类型为G6PD基因cDNA1024(C→T)、cDNA1388(G→A)、cDNA95(A→G)3种。中国人中较常见的cDNA1376(G→T)突变在该人群中频率较低，与已有报道的贵州汉族及其他民族有一定差异。     

MMP-3和TIMP-3在燃煤型砷中毒患者血细胞中的表达

目的比较燃煤型砷中毒患者与正常人血细胞中基质金属蛋白酶-3(MMP-3)和基质金属蛋白酶抑制因子-3(TIMP-3)mRNA表达,分析MMP-3、TIMP-3基因在燃煤型砷中毒患者中的表达及其意义,阐明燃煤型砷中毒出现一系列临床症状的分子机制。方法分别采集燃煤型砷中毒患者与正常人外周血标本各50例,采用TRIzol-酚-氯仿一步法提取总RNA。紫外分光光度法测定RNA,波长(nm)260/280(A)鉴定RNA纯度。实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术测定燃煤型砷中毒MMP-3、TIMP-3基因mRNA的表达,以β-肌动蛋白(β-actin)基因作为质控。结果燃煤型砷中毒患者血细胞中MMP-3mRNA表达降低,为对照组的60%;TIMP-3mRNA表达升高,为对照组的140%,二者比较差异均有统计学意义(t=4.39,P<0.01;t=2.46,P<0.05)。结论MMP-3、TIMP-3基因在燃煤型砷中毒代谢中发挥了重要的调控作用。MMP-3mRNA表达降低和TIMP-3mRNA表达升高,可能是燃煤型砷中毒发病机制之一。     

Alzheimer''s病与神经型尼古丁胆碱能受体α4基因多态性关联研究

目的 探讨Alzheimer's 病(AD)与神经型尼古丁胆碱能受体α4亚单位(CHRNA4)基因所有外显子基因多态性的关联关系.方法 用聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)和DNA测序技术分析23例AD病人及30例正常人的CHRNA4基因所有外显子基因序列.结果 CHRNA4的外显子3上发现3个新的多态性位点,这3个多态位点在病例组与对照组之间存在差异显著性.CHRNA4的外显子5上发现3个多态性位点,病例组与对照组之间没有差异.CHRNA4的外显子6上发现7个多态性位点,病例组与对照组之间没有差异.结论 在CHRNA4外显子3上发现的3个新的多态性位点与AD发病可能存在相关关系.因此 CHRNA4基因外显子3多态性可能与AD发病有关联.     

贵州荔波瑶族β-地中海贫血筛查及基因分析

目的对贵州省荔波县瑶族(包括白裤瑶、青裤瑶、长衫瑶3个支系)进行β-地中海贫血基因携带者的人群筛查并分析其基因型。方法采用常规血细胞自动生化分析仪检测血红蛋白(Hb)、红细胞计数(RBC)、红细胞平均体积(MCV)、红细胞平均血红蛋白含量(MCH)、红细胞平均血红蛋白浓度(MCHC)等5项血液学指标及抗碱血红蛋白(HbF)和血红蛋白A2(HbA)定量测定对人群进行β-地中海贫血初筛,然后用常规2酚-氯仿抽提法提取β-地中海贫血携带者DNA,再经PCR-反向点杂交法对β珠蛋白进行突变基因分析。结果在受检的586人中(男性280例,女性306例),检出β-地中海贫血携带者26例,其中男性11例,女性15例,检出率为4.437%。经基因分析该地人群的β-地中海贫血基因突变类型主要为CD41-42(TCTT)移码突变1例(3.57%)和CD17(A→T)无义突变6例(21.4%);尚有19例待检测。结论完成对贵州荔波瑶族进行的β-地中海贫血调查,并获取其流行病学资料及基因类型特征,为今后对该地人群进行婚姻指导、产前诊断、提高人口素质具有重要意义。     

贵州省地方性氟中毒地区人群GSTP1基因Ile105Val位点多态性分析

Objective To investigate plasma glutathione S-transferase(GSTs) activity and GSTP1 gene Ile105Val polymorphism in Bijie City, Guizhou Province, a coal-burning fluorosis endemic area. Methods One hundred and sixty villagers from Yachi Twon using non-improved cooking stoves were selected as the non-intervened group in Bijie City, Guizhou Province where coal-burning fluorosis was prevailing; 153 villagers as the intervented group were chosen from Changchun Twon, where cooking stoves were improved; 151 villagers were served as the control group from Baiyunshan Twon, Changshun County without endemic fluorosis. The activity of GSTs was tested by colorimetric analysis with spectrophotometer. The genotype of the GSTP1 gene Ile105Val polymorphism, presenting as either homozygous wild-type (AA), or heterozygous mutation type (AG), or homozygous mutation type (GG), was detected through the PCR-RFLP procedure. Results The activity of GSTs in plasma of non-intervened group [(12.44±4.97) kU/L]was significantly lower than that of intervened group (P < 0.05), and that of intervened group[(20.78±6.20)kU/L]was significantly lower than that of control group[(24.30±6.27)kU/L, P< 0.05]. The difference of the enzyme activity of three groups were statistically significant (F = 51.71, P < 0.05), but this enzyme activity did not vary significantly in each sex of each grnup(P > 0.05). Compared intervened group [AA:67.3%(103/153), AG:29.4%(45/153),GG:3.3%(5/153)]and non-intervened group[AA:66.9%(107/160), AG:30%(48/160), GG:3.1%(5/160)]with control group[AA:74.8%(113/151), AG:25.2%(38/151), GG:0 (0/151)], the Ile105Val polymorphism site of GSTP1 gene had significant difference(χ2= 6.04,6.07, both P< 0.05), but not significant between intervened and non-intervened groups(χ2 = 0.02, P>0.05). Conclusions Fluorosis can decrease the activity of GSTs and introduce the GSTP1 gene Ile105Val polymorphism, intervention with the fluorine intake will improve the effect of fluoride on the body.     

贵州三都水族β-地中海贫血筛查及基因分析

目的 了解贵州省三都水族β-地中海贫血的发病率、基因突变类型及分布特点，进一步从分子水平揭示β-地中海贫血多态性。方法 采用“红细胞休克一管定量法”测定红细胞脆性，乙酸纤维素薄膜电泳分离测定HbA2，一分钟碱变性法测定HbF。对贵州省三都水族自治县1090例当地水族居民，进行β-地中海贫血血液学筛查。用常规酚一氯仿抽提法提取β-地中海贫血携带者DNA，经PCR-反向点杂交法对B珠蛋白基因进行突变分析。结果 在受检的1090人中，共检出β-地中海贫血携带者49例，检出率为4．50％，男性26例，女性23例，男女比值为1．1：1。经基因分析该地人群的β-地中海贫血基因突变类型主要为CD41-42(TCTT)移码突变(20例，40．82％)和CD17(A→T)无义突变(20例，40．82％)，尚有9例(18．36％)不在中国人常见的16种β-地中海贫血突变范围内，待测序。结论 贵州省三都地区水族人群中β-地中海贫血有较高的发生率，且其基因突变类型有明显的地区差异和显著的民族特点，是我国一个较为特殊的β-地中海贫血分布区域。