获得重构基因的简捷方法--重叠延伸PCR

目的：构建IFN-β信号肽序列与白细胞介素18（IL-18）成熟肽的重组嵌合分子。方法：从BALB/c鼠基因组DNA扩增IFN-β信号肽序列;由小鼠Pro-IL-18真核表达质粒获得IL-18成熟肽序列;以非对称PCR技术得到IFN-β信号肽编码区的反义链和IL-18成熟肽正链;采用重叠延伸PCR(SOE-PCR)产生具有IFN-β信号肽与IL-18成熟肽的嵌合编码序列;定向连方式构建嵌合IL-18的表达质粒并测序。结果：连续胶PAGE表明非对称PCR可分别扩增出两个靶序列的特异性单链,大小符合预期。IFN-β信号肽对称PCR产物与IL-18非对称PCR产物混合作为模板,进行重叠延伸;电泳分析可见清晰的嵌合片段;测序显示重组质粒的表达框由两个设计的靶序列构成,且无移码。 结论：重叠延伸PCR是一种获得重构基因的简捷方法。     

P-糖蛋白基因疫苗诱导小鼠实验性肝炎

目的 :观察 P-糖蛋白基因疫苗免疫小鼠诱导的免疫病理变化。方法 :P-糖蛋白基因疫苗 2 0～ 1 0 0 μg两次肌注 (间隔 9d)免疫小鼠 ,收集血清检测特异性抗体效价 ;取心、肝、肾制作组织切片 ,HE染色行病理检查。结果 :末次免疫后 5 d鼠血清特异性抗体效价达到 1∶ 4 0 0 0 ;心、肾组织正常 ,但肝脏出现自身免疫性肝炎改变。结论 :P-糖蛋白基因疫苗免疫小鼠可诱导实验性肝炎 ,实验性肝炎小鼠可作为人自身免疫性肝炎的动物模型     

Unlicensed NK细胞的免疫效应

NK细胞(Natural killer cells,NK cells)在控制某些病毒感染与抗肿瘤中发挥着重要作用[1].无需抗原预先刺激与活化,NK细胞即可发挥细胞毒效应,并可分泌多种细胞因子与趋化因子.此种天然免疫细胞表达多样化活化性受体和抑制性受体.在NK细胞的激活与功能调控过程中,活化性和抑制性受体均发挥十分重要的作用[2].大多数活化性受体缺乏细胞内信号区域,而是以非共价方式结合含有免疫受体酪氨酸相关活化基序(ITAM)的衔接蛋白(Adaptor),如DAP12、CD3ζ或FcεRIγ;或者与包含Tyr-Ile-Asn-Met基序的衔接蛋白DAP10结合.衔接蛋白通过一系列下游信号激发细胞骨架重排,诱导细胞增殖与分泌可溶颗粒和细胞因子.     

人Flt3配体基因的克隆及在Hela细胞中的表达

目的：克隆人Flt3配体（FL）基因．检测其在Hela细胞中转录及表达蛋白的活性。方法：Trizol法提取K562细胞总RNA，经RT-巢式PCR得到FL的cDNA，PCR产物亚克隆入pGEM-T栽体测序，构建pcDNA3／hFL。经Lipofectamine2000介导转入Hela细胞．RT-PCR法检测转染细胞中hFL基因的转录．ELISA法检测培养上清中hFL的含量．增殖和促生存实验鏊定hFL的活性。结果：所得FL基因序列正确。转染后的Hela细胞能转录FL基因．上清中hFL蛋白含量为56．8ng／ml／l．hFL能促Raji细胞生存及抑制凋亡（P〈0.01），促进HL-60细胞增殖（P〈0.05）。结论：构建的pcDNA3／hFL质粒在Hela细胞表达系统中能够有效转录．表达的hFL蛋白具有生物学活性。     

适应现代医学改革，优化病理教学创新

随着时代的进步、知识的更新，医学病理学的教学理念需要适应当代学生需求的新变化，不断改革教学方案，优化教学结构。本文从以下几个方面谈谈病理教学改革与创新的几点意见。     

新疆紫草素抗肝癌的研究

新疆紫草素是一种从新疆紫草根中提取出来的萘醌类化合物，对多种肿瘤起抑制作用。蒋英丽的研究表明，新疆紫草素能有效诱导人大肠癌细胞发生程序性细胞死亡。路桂荣等的研究也证明紫草素对人胃癌细胞（BGC823）和人食道癌细胞（Ega109）具有明显的抑制作用。但紫草素对肝癌细胞的抑制作用的研究还鲜见报道。本研究采用H22小鼠肝癌，通过测定抑瘤率、NK细胞杀伤率、淋巴细胞转化指数等指标，探讨新疆紫草素对肝癌细胞增殖抑制及对机体的免疫调控作用。     

手术前后卵巢癌患者外周血T细胞亚群及CD4~+CD25~+调节性T细胞表达及临床意义

目的:探讨手术前后卵巢癌患者外周血T细胞亚群及CD4+CD25+调节性T细胞的变化及其临床意义。方法:采用流式细胞术检测80例卵巢癌患者外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞及CD4+CD25+调节性T细胞水平。结果:与对照组相比,卵巢癌患者外周血中CD3+,CD4+,CD4+/CD8+比值及NK细胞含量均降低(P0.05),CD8+升高(P0.05);随着疾病进展Ⅲ期+Ⅳ期与Ⅰ期+Ⅱ期比较CD3+,CD4+,CD4+/CD8+比值及NK细胞含量均降低(P0.05),CD8+升高(P0.05)。卵巢癌患者外周血CD4+CD25+细胞比例高于正常对照组(P0.05);手术后卵巢癌患者T细胞亚群比例与术前比较并未明显恢复(P0.05),但CD4+CD25+调节性T细胞水平有所恢复(P0.05)。结论:卵巢癌患者免疫功能低下,术后短期并不能恢复,CD4+CD25+调节性T细胞水平升高,术后明显恢复,提示其在免疫耐受中起重要作用。     

浅谈高职教师应具备的素质

目前,教育的发展面临许多新情况、新问题,对高职教师的素质提出了更高的要求。教师要培养适应未来社会发展需要的德才兼备的高素质新型人才,本身的素质必须过硬。笔者在多年的教学实践中深深体会到一名合格的高职教师必须具备以下素质。1具有良好的健康人格素质教师是人类灵魂的工程师,是未来建设者和接班人的塑造者。“身正为范”,教师要为人师表,所以健康的人格和品德是成为一名合格教师的必要条件之一。有关研究表明,一个人取得成功的因素有很多,智力因素只占20%,非智力因素如个性特征、思想道德、意志品格、情绪情感、人际交往能力和社…     

不同类型的多叶光栅对宫颈癌容积旋转调强计划的剂量学差异

目的 比较医科达Agility和MLCi2两种不同类型的多叶光栅(MLC)对宫颈癌容积旋转调强(VMAT)计划的剂量学差异.方法 选择10例宫颈癌患者,在相同计划系统和相同优化设置条件下,每例患者均设计医科达Agility MLC和MLCi2 MLC 2组VMAT计划,比较2组计划在靶区剂量均匀性、适形度以及危及器官受...