病理常规制片技术各环节注意事项

病理常规制片技术是临床医学最常用、最基础的病理诊断技术.切片质量是指导医生作出准确诊断和治疗的重要保证.     

p21waf1基因的克隆及在大肠杆菌中的高效表达

目的:构建人p21^waf1基因的原核表达载体并在大肠杆菌JM109中高效表达。方法:从人肝细胞中分离总RNA,经逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）得到p21^waf1全基因。用原核细胞表达载体构建了pBV220/p21^waf1重组质粒,经DNA测序确认后,将其转化到大肠杆菌JM109进行表达、初步纯化。 结果:SDS-PAGE凝胶电泳分离显示在分子量21 000处有一诱导蛋白带,薄层扫描显示表达产物在诱导5 h时可达细菌总蛋白的38%,Western blotting证明表达产物与抗人P21^waf1单克隆抗体有特异性免疫反应。 结论:成功构建出p21^waf1表达载体,诱导产生蛋白经检测证实为P21^waf1蛋白。     

弓形虫GRA1基因变异及真核表达载体的构建

目的：构建弓形虫致密颗粒抗原1（ GRA1）基因真核表达质粒。方法：根据GRA1基因已知序列,设计一对引物。用PCR技术从弓形虫RH株基因组DNA中扩增GRA1基因片段,插入pcDNA3质粒,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,经酶切及PCR鉴定、测序。结果：从弓形虫RH株基因组中扩增出775 bp的GRA1基因,测序显示该基因存在一135 bp的插入序列,使得所得PCR产物分子量大于预期值（628 bp）。该插入序列造成GRA1基因移码突变。结论：首次报道了变异的弓形虫RH株GRA1基因并构建了该变异基因的重组表达质粒。     

hβ2GPⅠ第一功能区基因单体和二串联体的克隆和表达

目的：构建hβ₂GPⅠ(hβ₂GPⅠ)第一功能区基因单体及二串联体的原核表达载体PQE30-β₂GPⅠ-DI和PQE30-β₂GPⅠ-DI₂,并在大肠杆菌M15中进行高效表达。方法：应用PCR技术扩增hβ₂GPⅠ第一功能区基因的单体β₂GPⅠ-DI,并根据同尾酶特性构建hβ₂GPⅠ第一功能区基因二串联体β₂GPⅠ-DI₂,将获得的单体和二串联体分别与PGEM-T easy载体连接测序,测序正确后分别克隆于原核表达载体PQE30中,构建成重组表达载体PQE30-β₂GPⅠ-DI和PQE30-β₂GPⅠ-DI₂,在大肠杆菌M15中以l mmol·L^-1 IPTG诱导蛋白表达,经Western blotting鉴定目的蛋白的抗原性。结果：表达了hβ₂GPⅠ第一功能区基因的单体及二串联体的蛋白,相对分子质量约为9 000和17 000,其表达量均可达菌体总蛋白的25％,并具有hβ₂GPⅠ的抗原性。结论：成功构建了hβ₂GPⅠ第一功能区基因的单体及二串联体的原核表达载体,并诱导了蛋白的高效表达。     

HER-2/neu在乳腺癌血清中的表达及意义

目的 分析乳腺癌HER-2／neu表达水平并探讨其临床意义。方法 用ELISA方法分析127例乳腺癌患者，30例良性疾病及40名健康体检者血清可溶性HER-2／neu水平并用免疫组化（mc）方法分析乳腺癌组织切片中癌细胞的HER-2／neu染色。结果乳腺癌患者血清中可溶性HER-2／neu水平与正常对照和良性乳腺疾病相比，有显著性差异（P〈0．05）。随TNM分期进展，乳腺癌患者可溶性HER-2／neu阳性率逐步升高。结论 乳腺癌患者血清中可溶性HER-2／neu水平呈过度表达，而且与免疫组化结果呈正相关。     

人β2糖蛋白1的重组表达及对抗磷脂抗体综合征患者血清诱导内皮细胞产生ICAM-1的影响

目的：探讨重组人β₂糖蛋白1(hrβ₂-GP1)对抗磷脂抗体综合征(APS)患者血清诱导内皮细胞系产生细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的影响。 方法：应用pQE30表达载体表达hrβ₂-GP1,Western blotting对重组蛋白进行鉴定;应 用hrβ₂-GP1处理前后的APS患者血清分别与内皮细胞株EA.hy926共孵育,细胞ELISA和 RT-PCR方法分析处理前后EA.hy926表达ICAM-1的变化。 结果：成功构建pQE30-hβ₂-GP1,并对表达产物进行了纯化和鉴定,所获得的蛋白与预期的大小一致,并具有人β₂-GP1的抗原性;rhβ₂-GP1处理后的APS患者血清与处理前比 较,与其孵育的内皮细胞系EA.hy926表达ICAM-1在蛋白和mRNA水平均明显降低,这种抑制作用随着rhβ₂-GP1的浓度增加而逐渐增强。 结论：抗β₂糖蛋白1抗体(anti-β₂GP1)促进内皮细胞系EA.hy926表达ICAM-1, hrβ₂-GP1可中和此作用。     

在妊娠期高血压中使用低分子肝素可以提高子宫动脉阻力指数预测子痫前期和胎儿生长受限

目的探讨在高危孕妇中短疗程的皮下注射低分子肝素是否能提高子宫动脉阻力指数预测子痫前期和胎儿生长受限。方法挑选24至26周妊娠期高血压患者96名和正常孕妇30名,治疗前和治疗2周后超声多普勒测量子宫动脉阻力指数,58例妊娠期高血压为治疗组,38例妊娠期高血压和30正常孕妇为对照组。结果低分子肝素治疗组子宫动脉阻力指数明显下降,而对照组无明显改变。然而低分子肝素引起的子宫动脉阻力指数减少只局限有正常妊娠结局的产妇,从0.64±0.01降至0.52±0.01（P〈0.05）。结论低分子肝素可以提高子宫动脉阻力指数预测子痫前期和胎儿生长受限。     

妊娠期糖尿病筛查及其相关因素

目的　为了解孕妇妊娠期糖尿病的发生情况 ,以及妊娠期糖尿病相关高危因素与无高危因素者葡萄糖耐量试验异常之关系。方法　对孕 2 4～ 2 8周孕妇口服 5 0g葡萄糖行糖筛查 ,血糖≥ 7 8mmol/L者行葡萄糖耐量 (OGTT)试验以明确诊断。结果　妊娠期糖尿病 (GDM)发生率 1 1 8%。妊娠期糖耐量减低 (GIGT)发生率2 86 % ,妊娠期糖尿病相关高危因素中的不良孕产史、DM家族史、孕前肥胖或孕期体重增长过快者与无高危因素者的葡萄糖耐量试验异常之间差异显著 (P <0 0 1 )。结论　对妊娠期所有孕妇行 5 0g糖筛查可减少妊娠期糖尿病的漏诊 ,妊娠期糖耐量减低也应积极治疗 ,伴有高危因素的孕妇应重点监测     

微囊化CEA转基因细胞疫苗对小鼠免疫功能的影响

目的：探讨微囊化癌胚抗原(CEA)转基因细胞疫苗免疫小鼠后,对小鼠免疫功能的影响。方法：采用³H-TdR掺入法,测定ConA诱导荷瘤小鼠脾淋巴细胞的增殖作用;采用³H-TdR后标记法,测定荷瘤小鼠脾淋巴细胞NK细胞毒;以ELISA法测定小鼠脾淋巴细胞IL-2和IFNγ细胞因子水平;利用流式细胞术检测CEA疫苗免疫对小鼠脾T淋巴细胞亚群CD3、CD4、CD8百分率,CD4/CD8比值和NK细胞的影响;采用RT-PCR方法检测IL-2、IFNγ mRNA的表达水平。 结果：微囊化CEA疫苗免疫可以有效增强ConA诱导的小鼠淋巴细胞增殖能力,促进IL-2、IFNγ的产生以及增强NK细胞的细胞毒活性（P<0.05,P<0.01,P<0.05）;微囊化CEA疫苗能提高荷瘤小鼠CD4/CD8比值及NK细胞数（P<0.05,P<0.05）;促进脾细胞中细胞因子IL-2、INFγ mRNA的表达。 结论：微囊化CEA转基因细胞疫苗具有增强荷瘤小鼠免疫功能的作用,提示该疫苗可作为有效的抗CEA阳性肿瘤的治疗性疫苗。