人自身抗原U1RNP 70K的酵母重组分泌表达及斑点免疫金渗滤检测法的建立

目的人自身抗原U1RNP 70K通常采用组织提取法或原核表达获得。文中用基因克隆技术,在毕赤酵母中表达人U1RNP 70K自身抗原,并建立斑点免疫金渗滤检测法。方法 PCR扩增U1RNP 70K基因,与酵母表达载体pPIC9k重组,构建表达质粒pPIC9k-U1RNP 70K。用电穿孔法转化酵母菌SMD1168,在MD平板上筛选重组克隆,用G418快速筛选高拷贝转化子,阳性克隆经甲醇诱导表达后,培养上清液用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(Western b lot)鉴定。用所表达的蛋白包被硝酸纤维素膜,建立检测U1RNP抗体的斑点免疫金渗滤法(dot immuogold filtrationassay,D IGFA)。结果 PCR产物约为1300 bp,接近于预期的1314 bp,pPIC9k-U1RNP 70K重组阳性克隆测序结果与Gen-Bank中的U1RNP 70K序列完全一致,双酶切鉴定正确,表达产物U1RNP 70K的相对分子质量约70 000。W estern b lot证实表达产物具有天然U1RNP 70K分子的免疫原性,阴性对照菌无目的条带表达。D IGF...     

诱骗受体3的研究进展

诱骗受体3（DcR3）又称肿瘤坏死因子受体-6B（TNFR-6B或TR6），也有人称之为TR6，是新近发现的TNFR超家族成员，它具有调节细胞凋亡和免疫细胞活性及分化的生物学特性，DcR3在肿瘤免疫、自身免疫、移植免疫及抗感染免疫中发挥着重要作用。该文作者就DcR3在分子免疫学方面的研究进展进行综述。     

人自身抗原SSA/Ro60的基因克隆和原核表达

目的:克隆并表达人自身抗原SSA/Ro60。方法:应用RT-PCR技术,从HL-60细胞株中克隆人自身抗原SSA/Ro60全长基因,将PCR产物直接TA克隆、鉴定及测序,再定向克隆至pGEX-5T载体中,转入大肠杆菌BL-21,阳性克隆鉴定后在IPTG诱导下表达,产物行SDS-PAGE和Western blot。结果:PCR产物约为1.6 kb,与预期1614 bp接近,测序结果与Genebank报道的完全一致。pGEX-5T-SSA/Ro60重组阳性克隆酶切鉴定正确,SDS-PAGE和Western blot结果显示融合蛋白分子量为86 KD,具有天然人自身抗原SSA/Ro60的免疫原性。结论:成功克隆表达人自身抗原SSA/Ro60,为下一步工作奠定了基础。     

诱骗受体3-肿瘤基因治疗的新靶点

诱骗受体3(DcR3)又称肿瘤坏死因子受体(TNFR)6B,也有人称之为TR6,是新近发现的TNFR超家族成员之一。DcR3是一种凋亡抑制蛋白(IAP),能抑制肿瘤细胞凋亡和促进肿瘤细胞免疫逃逸。近年来的研究显示,DcR3在人类正常分化组织中很少表达,却特异性表达于常见的肿瘤组织,它的表达上调可预示肿瘤恶性程度和预后。作为肿瘤分子标记物,体液及组织中DcR3高水平表达能作为肿瘤的辅助诊断和治疗监测。应用新近的分子生物技术可以抑制肿瘤细胞中DcR3的表达,从而诱导肿瘤细胞的凋亡。     

功能性适体传感器应用研究进展

近年来,大量研究揭示了核酸的多种生物学功能形式,这些具有不同特性的核酸称之为功能性核酸(functional nucleic acids,FNAs),如天然存在的核酶[1]、反义RNA[2]和核糖开关[3];以及运用selex(systemic evolution of ligands by exponential enrichment)技术人工合成的适体[4-5]和变构核酸酶等.     

慢性前列腺炎诱发大鼠IgA肾病模型血、尿IL-6的变化

目的:探讨慢性前列腺炎(CP)诱发IgA肾病(IgAN)的机制.方法:将63只SD大鼠随机分为A组(单纯切肝组)、B组(单纯前列腺炎组)和C组(前列腺炎+切肝组).比较3组大鼠尿蛋白、尿红细胞计数、血清肌酐和血、尿IL-6水平,肾组织病变程度,以及IgA、IgG、IgM、补体C3沉积情况.结果:3组大鼠之间尿蛋白、尿红细胞计数以及血清肌酐水平差异无显著性.第25周时,B、C组血、尿IL-6水平较A组高(均P＜0.05),但B组与C组之间无明显差异.第25周时,C组大鼠IgA沉积的阳性率为72.7%(16/22),较A组的25.0%(3/12)和B组的23.1%(3/13)高(P＜0.01).C组22只大鼠16只系膜轻度增殖,系膜区以IgA沉积为主,75.0%伴有IgG和(或)IgM沉积;均无补体C3沉积;无明显血尿、蛋白尿.结论:CP在网状内皮系统功能低下可诱发大鼠IgAN;CP时,前列腺局部产生的IL-6水平增加,可能参与了CP诱发IgAN的这一过程.     

应用受试者工作特征曲线评价肝酶谱对肝移植早期的肝功能诊断价值

目的:探讨肝酶在肝移植术中及术后早期临床肝功能诊断的价值。方法:应用受试者工作特征(ROC)曲线,以20例非肝移植的腹腔脏器移植患者为对照组,20例肝移植患者为阳性组。分别于术中及术后早期4个时间段(T1:血流再灌注前、T2:血流再灌注后2～3h、T3:次日晨、T4:第3天晨)抽血检测受者血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、肌酸激酶(CK)、谷氨酸脱氢酶(GLD)、γ-谷氨酰转移酶(γ-GT)、血清胆碱酯酶(PChE)、亮氨酸氨肽酶(LAP)、淀粉酶(AMY)、碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LD)活性。结果:①GLD、ALT、AST在T2～T4和LD在T2呈现最好的诊断试验ROC曲线图,其相应的曲线下面积(Az)均为1.0。②CK在T2～T4、LDH在T3和PChE在T1～T2呈现较好的诊断试验ROC曲线图,Az为0.9～1.0。③ALP、γ-GT、AMY、LAP4种酶中,除AMY在T3有较好的诊断价值(Az=0.87)外,其余均无诊断价值(Az<0.8)。结论:GLD、ALT、AST和LD在肝移植术中及术后早期可作为反映供肝热/冷缺血、保存性损伤及再灌注损伤的良好指标。肝移植术前、术中检测PChE可提高麻醉用药的安全性。AMY可用于术后急性胰腺炎的监测。     

表面增强激光解析电离飞行时间质谱的质量控制

表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF MS)是快速、高通量的蛋白质组学分析技术;应用于临床的关键是必须具有可重复性,使其结果具有可信度.文中综述SELDI-TOF MS质量控制的相关问题.     

IRIS iQ200全自动尿沉渣分析仪与Sysmex UF-100分析仪及人工镜检的比较和评价

尿沉渣中有形成分检查经典的方法是在显微镜下进行人工判别.人工镜检最大的问题是速度慢,在当前临床检查的标本不断增加的大医院,每份尿都进行人工镜检难以做到.20世纪80年代,美国IRIS公司推出的Yellow IRIS全自动尿沉渣分析仪采用流式细胞仪的进样技术和电脑控制的自动识别尿中有形成分的“自动智能显微镜”（automated intelligence microscopy AIM） ,对流动视野中的有形成分进行摄影、判别和分析,并定量报告,使尿沉渣检测自动化、标准化和便捷化.该仪器一经推出,就受到广泛的好评.2002年,美国IRIS公司在YELLOW IRIS基本原理基础上,推出了iQ200全自动尿沉渣分析仪,我们通过与其他方法进行对比观察,对该仪器的性能特点作初步分析.     

福建闽西地区儿童全血铜、锌、钙、镁、铁微量元素参考范围调查

目的 调查福建闽西地区儿童年龄特异性全血铜(Cu)、锌(Zn)、钙(Ca)、镁(Mg)、铁(Fe)微量元素正常参考范围.方法 利用BH5300S原子吸收光谱仪分析福建闽西地区1 702例1个月至11岁健康儿童的全血Cu、Zn、Ca、Mg、Fe微量元素浓度.结果 经统计得到福建闽西地区儿童年龄特异性全血Cu、Zn、Ca、Mg、Fe微量元素参考范围.分析全血微量元素与年龄的相关性,发现Cu和Fe元素与年龄呈负相关(P<0.05),Zn和Ca元素与年龄呈正相关(P<0.05),未发现全血Mg元素浓度与年龄相关性(P>0.05).经统计优化后,各元素参考范围年龄段划分减少.结论 全血Cu、Zn、Ca、Mg、Fe微量元素参考范围的建立可为儿童微量元素合理补充提供指导,特别为福建闽西地区儿童微量元素缺乏的实验室诊断和流行病学调查提供重要依据.