储存血小板非编码RNA差异表达谱的研究及在临床输血中的应用

储存血小板作为临床输血不可或缺的重要组成,其保存期和血液质量仍受到多种因素的影响和限制。近十年的研究显示,血小板在储存过程中伴随非编码RNA(ncRNAs)表达的表化,它们参与血小板活化、线粒体损伤、凋亡等过程。因此,ncRNAs可能是储存血小板质量和活性的重要生物标志物。同时,血小板细胞外囊泡通过参与ncRNAs的转移在血小板输注中发挥重要作用,是介导血小板输注相关不良反应和导致受血者机体病理变化的重要载体。研究ncRNAs如何参与血小板mRNAs表达的调控是了解储存血小板活化与代谢损伤等分子机制的关键,这可能有助于提高体外储存血小板的质量,延长保质期,改善输血患者的预后,更好地实现精准输血。     

microRNAs在肾透明细胞癌组织中的异常表达

目的：应用microRNAs芯片筛选肾透明细胞癌细胞差异表达microRNAs,并寻找差异表达mi—eroRNAs调控的靶基因,为进一步研究其在肾透明细胞癌发病机制中的作用打下基础。方法：应用哺乳动物mieroRNAs表达谱芯片检测11位肾透明细胞癌患者癌组织及非肿瘤肾组织中microRNAs差异表达。结果：81种microRNAs在肾透明细胞癌组中有效表达,其中48种microRNAs仅在肾透明细胞癌组中有效表达;42种microRNAs在对照组中有效表达,9种microRNAs仅在对照组中有效表达。33种microRNAs在两组中均表达,其中19种microRNAs表达分析有显著差异。芯片显示结果经northernblot分析确认。结论：microRNAs在肾透明细胞癌细胞中异常表达,提示它们可能在。肾透明细胞癌的发生发展中起着重要的调控作用。     

系统性红斑狼疮患者外周血中差异表达微小RNAs的筛选

目的通过比较微小RNAs(microRNAs,miRNA)在系统性红斑狼疮(SLE)患者和正常健康对照者外周血单个核细胞(PBMC)中的表达情况,发现在SLE中异常表达的miRNA。方法提取23例SLE患者及10例正常健康对照者PBMC中总RNA并分离miRNA,采用含1 152条探针的哺乳动物miRNA芯片对两者之间差异表达的miRNA进行分析。随机选择其中4个miRNA,应用Northern blot对芯片结果进行验证。结果 SLE患者与正常健康对照者PBMC间差异表达的miRNA共14个,其中8个表达上调,6个表达下调。Northern blot验证结果与芯片表达结果一致。结论多种miRNA在SLE患者PBMC中异常表达,提示它们可能在SLE的发生发展中起着重要的调控作用。     

血小板抗体检测及交叉配型在血小板输注患者中的运用

目的探讨血小板抗体检测及交叉配型在血小板输注患者中的应用效果。方法于2017年1月—2018年6月期间,选取该段时间内在本院接受多次血小板输注的100例血液病患者随机分为2组,每组50例,对照组患者直接进行血小板输注,观察组患者先进行血小板抗体检测和交叉配型,再选择相容的血小板进行输注,两组患者就其血小板纠正指数、凝血功能、不良反应发生率、血小板输注有效率等指标进行比较。结果观察组的血小板输注有效率为74%(37/50),对照组仅为18%(9/50),观察组明显高于对照组(χ~2=31.562,P0.05);血小板输注1 h、24 h后,观察组的血小板纠正计数指数均明显高于对照组(t=14.109,P0.05);两组患者输血后的凝血酶原时间、活化部分凝血活酶时间、凝血酶时间均较输血前显著缩短(P0.05),而在输血后,观察组的凝血酶原时间、活化部分凝血活酶时间、凝血酶时间均短于对照组(P0.05);观察组的不良反应发生率为4%(2/50),明显低于对照组的18%(9/50)(χ~2=5.005,P0.05)。结论在血小板输注前对患者施行交叉配型和血小板抗体检测,可有效提高血小板输注的效果,减少同种免疫反应,保证临床输血安全,还可改善患者的凝血功能,纠正其血小板计数。     

血清脂肪酶测定对急性胰腺炎的诊断价值

目的探讨血清脂肪酶(LPS)在急性腹痛时对急性胰腺炎(AP)的鉴别诊断价值。方法将598例急性腹痛患者分为AP组192例和非AP(NAP,包括胆结石30例、肠梗阻15例、急性胆囊炎10例、腹部外伤9例、胰腺恶性肿瘤6例、不明原因腹痛299例、糖尿病6例、上消化道疾病11例、肺部疾病9例、急性肾功能衰竭11例)组406例,同时测定血清LPS和淀粉酶(AMY)。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,计算LPS和AMY诊断AP的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值。结果 AP组血清AMY和LPS水平明显高于NAP组(P<0.01)。LPS和AMY均以正常参考范围上限的3倍(180、300 U/L)为临界值时,其灵敏度、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为87.5%、62.5%,89.4%、95.3%,80.0%、86.3%和94.7%、88.2%;血清LPS和AMY诊断AP的ROC曲线下面积分别为0.959和0.921,二者测定结果之间呈正相关(r=0.90)。结论血清LPS对AP的诊断性能优于AMY,对AP的诊断具有重要的临床意义。     

HtrA基因缺陷对肺炎链球菌毒力影响的研究

目的:HtrA基因可编码肺炎链球菌的一种重要蛋白酶,本文目的是探索HtrA基因缺陷对细菌毒力的影响. 方法:用插入复制失活的方式使HtrA基因缺失,通过RT-PCR分析毒力因子表达,并通过动物试验观察HtrA基因缺陷株毒力改变情况. 结果:RT-PCR显示HtrA缺陷株毒力因子表达低于野毒株,两组比较P＜0.05;转化试验发现缺陷菌株转化力下降;小鼠毒力试验表明野毒株半数致死时间22 h,而缺陷株半数致死时间8 d,P＜0.01,有显著性差异;缺陷菌在小鼠体内被清除速度也显著快于野毒株. 结论:HtrA基因缺陷使肺炎链球菌多种毒力因子表达减弱,自然转化能力下降,毒力降低.     

肺炎链球菌SpxA蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备

目的 构建肺炎链球菌SpxA蛋白的原核表达系统,制备其多克隆抗体.方法 设计引物,利用PCR技术扩增肺炎链球菌D39菌株的spxA基因,并插入表达载体pET-28a(+)内,测序鉴定.重组质粒转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中,以IPTG诱导表达含6个组氨酸标签的SpxA重组蛋白,经Ni-NTA亲和层析柱纯化后,以其为抗原免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体.用ELISA及Western印迹方法分别检测多克隆抗体的效价及特异性.结果 从大肠埃希菌中诱导出高表达的SpxA重组蛋白,纯化后免疫小鼠获得抗血清,ELISA测定其效价可达1:2 560 000以上,Western印迹结果显示其能特异性地作用于肺炎链球菌SpxA.结论 成功构建了pET-28a(+)-spxA原核表达质粒,获得了高纯度的目的 蛋白和高滴度、高特异性的多克隆抗体.     

一氧化氮对库存悬浮红细胞变形性的影响

摘要:目的　研究不同浓度的一氧化氮（NO）对库存悬浮红细胞变形性的影响。方法　取10例新鲜悬浮红细胞,在储存的不同时相（3 h、1 d、3 d、5 d、7 d、14 d、21 d、28 d）,每例和不同浓度L-精氨酸（NO前体）混合培养,浓度分别为1 μM（B）、5 Μm（C）、10 Μm（D）、50 Μm（E）。培养后测定红细胞变形性,用NO荧光探针测定反应红细胞内的一氧化氮水平的平均荧光强度（PKPosX）。结果　保存期内库存红细胞变形指数、聚集指数和刚性指数均随着时间延长而逐渐增高。当NO前体浓度为5 μM时能够明显改善保存14 d内的库存血红细胞变形性指数;高于相应的最佳NO浓度范围的时红细胞变形指数受损。结论　NO对库血红细胞具有调控作用,通过补充最佳浓度的NO（如10 μM）时,会使红细胞变形性增加;储存期间红细胞的损伤与NO流失有关,适当补充相应浓度NO可以改善红细胞的变形性。     

ATP对α-晶状体蛋白分子伴侣功能及构象的影响

目的 探讨α-晶状体蛋白分子伴侣功能的作用机制.方法将柠檬酸合酶(CS)、盐酸胍和不同浓度的α-晶状体蛋白及3 mmol/L的ATP温育,分光光度计测定CS的活性.α-晶状体蛋白与ATP温育后用荧光分光光度计检测其荧光发射光谱. 结果α-晶状体蛋白不能使变性的CS复性,但能抑制盐酸胍诱导的CS凝聚,保护CS的失活且呈浓度依赖性.ATP可使这些作用增强.ATP浓度增高可导致α-晶状体蛋白色氨酸荧光强度降低. 结论 ATP可增强α-晶状体蛋白的分子伴侣功能且能改变α-晶状体蛋白的分子构象.     

微小RNA的研究进展

微小RNA参与基因表达调控，在人体内有着十分广泛而重要的生理功能。现就微小RNA在人类疾病研究中的进展进行综述。