载脂蛋白E基因多态性及脂类代谢与缺血性脑卒中亚型关系的研究

目的探讨载脂蛋白E(apoE)基因多态性及脂类代谢与缺血性脑卒中亚型的关系。方法对急性动脉粥样硬化性脑梗死患者(ACI组)47例、腔隙性脑梗死患者(LI组)急性发作期48例、急性栓塞性脑梗死组患者14例和对照组50例,用聚合酶链反应限制性片段长度多态性进行apoE基因HhaI多态性测定,并进行血脂及载脂蛋白的测定。结果ACI组apoEε4等位基因频率明显高于其他脑卒中亚型及对照组(P<0.05)。ACI组的高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平明显低于其他3组,而低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平明显高于其他3组(P<0.05)。ACI组各等位基因间血脂水平比较,含ε4等位基因者LDL-C水平高于含ε3者(P<0.05)。无论是E3/3还是E3/4 ACI组的总胆固醇水平均高于对照组,HDL-C水平均低于对照组(P<0.05)。在E3/4 ACI组的LDL-C水平明显高于对照组。结论apoEε4等位基因与ACI发病及血脂代谢改变有关;LI的apoE基因多态性研究与ACI不一致,说明apoE基因多态性在LI的发病中无明显的致病作用;不同类型的脑卒中亚型急性发作期血脂水平不同。     

COX-2基因多态性与脑梗死的关系

目的探讨COX-2基因多态性与脑梗死的关系。方法选取年龄、性别匹配的脑梗死病例组177人,对照组135人,采用PCR技术和限制性内切酶片段长度多态性(RFLP)的方法检测-765G/C(rs20417)基因型。结果 COX-2基因rs20417位点的等位基因和基因型在病例组和对照组的频数分布差异无显著性(P0.05)。结论 COX-2基因-765G/C多态性与脑梗死的发病可能无关。     

金属硫蛋白3对快速老化痴呆模型小鼠海马锌和铜含量的影响

目的研究快速老化痴呆模型小鼠(SAMP8)海马锌和铜含量的变化及外源性金属硫蛋白3(MT3)对SAMP8海马锌和铜含量变化的影响,并与MT1进行比较。方法将SAMP8 60只随机分为痴呆组、低浓度MT3组、中浓度MT3组、高浓度MT3组、MT1对照组和空白对照组;每组10只,SAMP1 10只为正常对照组。连续腹腔注射不同浓度MT3等4周后处死小鼠,应用原子吸收分光光度计检测各组小鼠海马锌和铜的含量,并观察其与低、中、高3种浓度MT3的量效关系。结果与正常对照组比较,痴呆组小鼠海马锌含量明显下降(P<0.05);与低浓度MT3组和高浓度MT3组比较,中浓度MT3组小鼠海马锌含量明显升高(P<0.05);与空白对照组比较,中浓度MT3组小鼠海马锌含量明显升高(P<0.05);MT1对照组与低、中、高浓度MT3组比较,小鼠海马锌含量差异无统计学意义。各组小鼠海马铜含量差异无统计学意义。结论 SAMP8海马锌含量降低。MT3可以增加SAMP8海马锌含量,但锌含量不随MT3浓度增加而增加。而对铜含量影响不大。     

金属硫蛋白3对快速老化痴呆模型小鼠海马组织学变化的影响

目的研究金属硫蛋白(MT)3对快速老化痴呆模型小鼠(SAMP8)海马结构CA1区神经元组织学变化的影响。方法给小鼠不同浓度MT3及盐水腹腔注射28 d,处死小鼠后应用光镜和电镜观察制备标本海马结构神经元的变化。结果快速老化小鼠对照小鼠(SAMR1)海马CA1区锥体细胞排列较整齐、均匀,胞膜完整,染色质分布均匀,细胞核呈圆形或椭圆形,核仁清楚,细胞器清晰可见。SAMP8组海马CA1区可见锥体细胞稀疏、排列紊乱,大部分神经元肿胀、空化,出现凋亡细胞,很多胞核固缩深染,胶质细胞增多,有较多脂褐素沉积。低、中、高浓度MT3组海马CA1区锥体细胞较空白对照组结构较清晰,排列较整齐均匀。神经元核基质呈轻度空化改变,胞质内都可见线粒体、粗面内质网及脂褐素,胶质细胞减少。高浓度MT3组的超微结构最接近于SAMR1组,但仍处于老化状态。结论 SAMP8海马有组织结构和超微结构的改变。MT3对SAMP8海马锥体细胞有保护的作用。     

微区喇曼光谱法区分周围神经束性质

目的：探索应用显微激光喇曼光谱快速鉴别运动神经与感觉神经的方法。 方法：实验于2004-10／2005-10在长春中科院物理国家级重点实验室进行，取新西兰大白兔32只，放血猝死后，在手术显微镜下暴露取脊神经前恨、后根各3～5mm，立即做冰冻横切片，片厚30μm，把切片置于显微镜下，使激光焦点聚集到冰冻切片进行喇曼光谱观察。 结果：①同类标本显微激光喇曼光谱重现性好，光谱特征基本相似，而在运动神经与感觉神经两种不同类标本中，某些特征喇曼峰相对强度和峰宽明显不同。②运动神经与感觉神经的喇曼光谱在1088cm^-1，1276cm^-1，1439cm^-1，1579cm^-1，1659cm^-1等附近的喇曼振动峰相对强度存在明显差异，1276cm^-1处的峰值与1439cm^-1处的峰值比反映了运动神经与感觉神经之间的微观结构差异。以比值1．06作为判定标准，大于1．06为感觉神经，反之则为运动神经。③判别运动神经的灵敏度、特异度、阳性和阴性预测值分别为87．5％，93．8％，93.3％，88．2％；判别感觉神经的灵敏度、特异度、阳性和阴性预测值分别为93．8％，87、5％，88．2％，93.3％。 结论：运动神经束与感觉神经束的喇曼光谱具有各自的特征谱，且具有恒定性和可靠性，可以根据光谱特征的不同来区分神经束结构性质，提示显微激光喇曼光谱法是一种鉴别神经束性质的有效方法。     

姜黄素对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的：研究姜黄素对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用，并探讨其作用的机制。方法：采用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型，50只Wistar雄性大鼠被随机分为假手术组、缺血组和100mg／kg、300mg／kg姜黄素治疗组。缺血组和姜黄素治疗组分别在脑缺血再灌注后24h处死，观察大鼠神经功能缺失的评分．应用TTC染色观察梗死体积，应用TUNEL法及免疫组化染色检测脑组织凋亡细胞数及Bcl-2、Bax蛋白表达。结果：与损伤模型组比较．姜黄素治疗组改善大鼠神经功能的受损程度和减少脑梗死体积．各剂量姜黄素治疗组均可明显减少TUNEL染色阳性细胞数（P〈0.01），明显增加Bcl-2蛋白表达（P〈0.01），并且姜黄素治疗组Bax表达低于缺血组（P〈0．05）。结论：姜黄素可通过上调Bcl-2蛋白下调Bax蛋白表达而减少脑缺血再灌注后神经细胞凋亡．从而改善受损的神经功能．对脑缺血再灌注损伤起保护作用．     

线粒体加工肽酶干扰RNA真核表达载体转染PC12细胞系的构建及鉴定

目的利用干扰RNA技术构建线粒体加工肽酶(MPPs)的干扰RNA真核表达载体,稳定转染大鼠PC12细胞来抑制MPPs基因的表达,为研究MPPs蛋白的功能提供实验基础。方法脂质体转染已经构建好的4个MPPs干扰RNA真核表达载体和阴性对照干扰RNA真核表达载体到大鼠PC12细胞株,G418筛选阳性转染细胞克隆,制备稳定转染5个MPPs干扰RNA真核表达载体的PC12细胞系。用RT-PCR检测MPPs基因表达。结果获得稳定转染5个MPPs干扰RNA真核表达载体的PC12细胞系,RT-PCR证实所有4个干扰组(siRNA1,siRNA2,siRNA3 and siRNA4)MPPs-mRNA表达均下调,分别达到28%、38%、26%、16%。结论成功建立稳定转染MPPs干扰RNA的PC12细胞系。通过RT-PCR等相关方法证实MPPs干扰RNA真核表达载体转染PC12细胞成功。     

金属硫蛋白3对快速老化痴呆模型小鼠行为学变化的影响

目的研究金属硫蛋白(MT)3对快速老化痴呆模型小鼠(SAMP8)水迷宫行为学变化的影响。方法给小鼠不同浓度MT3及盐水腹腔注射28 d,进行Morris水迷宫检测。结果与快速老化小鼠对照系(SAMR1)小鼠相比,SAMP8逃避潜伏期明显延长(P<0.01),跨越原平台次数明显减少(P<0.05);3种浓度MT3组当中高浓度MT3组逃避潜伏期最短,跨越原平台次数最多(P<0.05);高浓度MT3组与SAMR1相比,逃避潜伏期仍延长,跨越原平台次数减少(P<0.05)。结论高浓度MT3可以提高SAMP8小鼠的学习能力和记忆能力,其作用效果与浓度有关。     

金属硫蛋白3对快速老化痴呆小鼠海马胶原纤维酸性蛋白表达的影响

目的 研究金属硫蛋白3(MT3)对快速老化痴呆模型小鼠(SAMP8)海马结构的胶原纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响.方法 给小鼠不同浓度MT3及盐水腹腔注射28 d,处死小鼠后应用免疫组化和免疫印迹方法检测海马结构GFAP的表达.结果 8月龄的SAMP8小鼠海马结构内可见大量浓染的GFAP阳性星形胶质细胞,GFAP含量最多.随着给予MT3浓度的增加,SAMP8小鼠海马结构内的GFAP阳性细胞减少,GFAP含量减少.结论 SAMP8小鼠海马结构星形胶质细胞增生,GFAP表达增多.MT3有减低GFAP表达的作用,随着浓度增加作用增强.     

快速老化痴呆模型小鼠海马细胞凋亡检测及金属硫蛋白3对其的影响

目的：研究快速老化痴呆模型小鼠（SAMP8）海马CA1区神经元细胞凋亡的变化及不同浓度的金属硫蛋白3（MT3）对其的影响．并且与金属硫蛋白1（MT1）作用相比较。方法：给予7月龄SAMP8小鼠腹腔注射age浓度的MT3及MT1,28d后灌注取脑。进行海马CA1区Tunel试剂盒染色。结果：8月龄的SAMP8小鼠海马区神经元细胞凋亡指数明显高于对照组SAMR1小鼠。高浓度MT3组凋亡指数最低,差异有统计学意义。相同浓度MT3组和MT1对照组间差异无统计学意义。结论：SAMP8小鼠海马结构存在大量的神经元细胞凋亡;MT3有抑制细胞凋亡的作用,并有浓度依赖关系;MT3和MT1对细胞凋亡的影响无差异。