多肿瘤组织芯片在评价肿瘤细胞增殖与凋亡状态研究中的作用

目的：研究多种常见肿瘤组织芯片在观察癌细胞增殖和凋亡中的作用。方法：在病理档案材料中选取10种常见恶性肿瘤及其癌旁或正常组织的石蜡包埋标本，HE染色切片定位穿刺部位，每一蜡块穿取直径0．6mm大小组织柱，排布成196点列阵的芯片；用ki-67、p53、rasp21、bcl-2和bax单抗SP法进行免疫组化染色，对各切片阳性细胞进行计数观察。结果：组织芯片经染色后结构完整，在肿瘤组织中ki-67、p53和rasp21标记的阳性细胞比癌旁和正常组织明显增高；而大多数肿瘤中bcl-2和bax表达呈负相关，即bcl-2阴性或低表达者，则bax呈不同程度阳性表达，反之则相反。结论：组织芯片技术可以同时用于评价多种不同类型肿瘤样本的增殖活性和凋亡状态，为临床预后判断提供资料。     

肺癌石蜡包埋组织及新鲜标本组织芯片制备方法学探讨

目的：探讨和建立石蜡包埋组织和新鲜冷冻标本制备组织芯片的方法，以及在基因表达分析中的应用。方法：选取肺癌石蜡包埋组织90例，新鲜液氮冻存肺癌及癌旁组织20例，常规切片HE染色下确定穿刺部位，石蜡包埋组织芯片制作按Kononem等方法（1998），每例穿取0.6mm组织柱2条，制备180点阵组织芯片；而新鲜组织芯片参考Fejzo等方法（2001），并略作改良，制备50点阵组织芯片。所有组织芯片模块，经4цm切片、常规组织学染色和免疫组化染色，以评价其在形态学及基因表达分析中应用的可行性。结果：180点阵石蜡包埋肺癌组织芯片，组织排列整齐，HE染色后组织形态可观察率在98%以上；p53、c-myc、bcl-2、bax和Ki-67等免疫组化染色后，肺癌组织可见不同程度的抗原表达，组织点阵的形态可观测率在89%-95%之间。新鲜组织芯片经HE染色后，形态可观测率和基因表达可分析率在70%左右。结论：手工法组织芯片制备简便易行，使用组织少，不破坏原蜡块；实验均一性、可比性好，且节省试剂。与常规组织切片相比，2点0.6mm组织可以获得原蜡块95%以上的信息，完全可以用于组织形态学和蛋白水平上的基因表达分析；新鲜组织芯片技术已经初步建立，但尚有待于进一步完善制备技术和mRNA分析方法。     

46,XY,t(5;6)(q35;p21.3),14p+一例

患者男,28岁,以婚后未避孕1年半不育为主述就诊,女方月经规律,夫妻性生活正常.女方婚后妊娠3次,均自然流产.查体:患者体格发育正常,身材中等.生殖器检查:阴茎、阴毛发育正常,睾丸12 mL,质可,附睾大小及形态正常,精管存在,精索静脉未曲张.精子常规检查:量2.8 mL,液化时间30 min,密度17.4×106/mL,活动率53.4%,正常形态率7.5%.     

肝癌靶向性SEA基因重组腺病毒载体的构建及体外生物学活性鉴定

[目的]构建肝癌靶向性葡萄球菌肠毒素A（SEA）基因重组腺病毒载体。[方法]首先利用现有的腺病毒穿梭质粒pShuttle和pShuttle-CMV,构建新的不带CMV增强子/启动子而带有polyA加尾信号穿梭质粒,命名为pShuttle2。将AFP增强子、启动子及SEA基因分别从已构建的pKS-EP载体和pMD18-T-SEA载体上,亚克隆至pShuttle2中,再与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化E.coliBJ5183。以获得的重组子转染HEK293细胞后制备重组腺病毒,然后感染高表达AFP的肝癌细胞系Hepa1-6和不表达AFP的黑色素瘤细胞系B16、成纤维细胞系NIH3T3。采用间接免疫荧光法,经荧光显微镜观察和流式细胞术检测SEA在细胞膜表面的表达。采用3H掺入法检测膜表达的SEA体外诱导淋巴细胞增殖的活性。[结果]SEA能够靶向性地表达在高表达AFP的Hepa1-6细胞膜上,在不表达AFP的B16、NIH3T3细胞膜上不表达,并且体外能够诱导淋巴细胞增殖。[结论]成功地构建了肝癌靶向性SEA基因重组腺病毒载体,为进一步研究SEA在肝癌靶向基因治疗中的应用及其抗肿瘤免疫机制奠定了基础。     

单核苷酸多态性数据的卡方及Logistic回归分析在SPSS统计软件中的实现

目的用SPSS11·0(statistical package fou social sciences)分析软件对贲门癌抑癌基因Ras相关区域家族1A多态性资料进行卡方分析,并用logistic回归分析计算不同基因型的优势比(odds ratio),以期为采用二分类因变量实验设计模型的临床与基础科研工作者提供可借鉴的统计学分析方法。方法应用SPSS11·0中二分类Logistic回归分析方法对病例-对照研究资料进行二值多元(非条件)Logistic回归分析。用单因素分析对自变量进行筛选,再对有显著性意义的自变量做多因素Logistic回归分析。结果可以得到影响患病与否的自变量,并可得到相应修正后的危险度。结论遗传学研究中的基因单核苷酸多态性(SNP)数据,属于因变量为分类变量的多变量资料,可归结于统计中的病例-对照研究资料,可以用Logistic回归分析探究其多态性意义,同时还可进行不同基因型危险度分析。应用SPSS统计软件易于实现该类数据的统计分析。     

IL-11对中子辐射小鼠肠道IL-11受体表达的影响

目的探讨IL-11对4.0 Gy中子辐射小鼠肠道IL-11受体表达影响。方法136只BALB/C二级小鼠,经4.0Gy中子全身照射,于照前3 d或照后即刻注射600μg/kg rhIL-11,每日1次,连用3 d,并于照后6 h、1 d、2 d、5 d活杀取小肠,采用SP免疫组织化学和图像分析等技术,定量研究肠组织中IL-11、IL-11Rα和gp130表达变化。结果正常小鼠中,IL-11和gp130于肠绒毛上皮细胞和隐窝细胞浆呈强阳性,尤以绒毛顶端细胞为显著;IL-11Rα于肠绒毛全层上皮细胞和隐窝细胞浆呈强阳性,其强度高于IL-11。4.0 Gy中子照后2 d内,IL-11、IL-11Rα和gp130于肠绒毛和隐窝上皮细胞表达均明显减少;照前和照后应用IL-11,三者阳性强度均高于4.0 Gy照射组。结论4.0 Gy中子照射后,小鼠肠道IL-11、IL-11Rα和gp130表达减少,应用IL-11刺激肠上皮细胞IL-11受体表达上调,且该作用参与了中子辐射后肠道损伤与修复的病理生理过程。     

阿尔茨海默病相关基因研究进展

本文归纳了目前认为与阿尔茨海默病密切相关的遗传因素，包括淀粉样蛋白前体、载脂蛋白E、早老素1和2、组织蛋白D、半胱氨酸蛋白酶抑制剂C和白介素1基因，这些基因本身的频率或突变在阿尔茨海默病病因上有重要意义。     

免疫组化SP法与PicTureTM两步法的比较

目前，病理科常用的免疫组化方法有SP法、ABC法、PAP法、金银法、两步法等，我们采用SP法、PicTure^TM两步法同时检测肾组织HSP-70和c-Jun的表达，并对这两种方法进行了比较，以探讨其特异性和敏感性，及其在动物实验中的应用价值。     

377例遗传咨询者的外周血染色体分析

目的对2008年至2010年我院377例患者外周血染色体核型进行分析,探讨染色体检查在出生缺陷、流产、不育及孕前检查的意义。方法常规外周血淋巴细胞培养方法制备染色体标本,G带技术进行细胞遗传学分析。结果检出异常核型20例,异常率占5.3%,异常核型涉及3、9、10、13、14、15、21、X及Y共9条染色体。结论新生儿异常面容、儿童发育迟缓、反复流产、不孕不育患者中染色体异常率高。应对高危人群进行染色体检查,重视孕前遗传优生检查,避免遗传病患儿出生。