彩色多普勒超声心动图对诊断多发孔房间隔缺损的价值

目的:探讨经胸彩色多普勒超声心动图对多发孔房间隔缺损(MASD)的诊断价值。方法:回顾性分析经手术证实的35例MASD。结果:35例MASD均经手术确诊,其中漏诊、误诊11例,诊断正确率68.6%(24/35)。结论:经胸彩色多普勒超声心动图对多发孔型房间隔缺损的诊断具有重要价值。     

兔抗hCG CP22抗血清体外抑制肿瘤细胞生长的研究

目的:探讨抗原抗体反应检验若干人肿瘤细胞分泌β-hCG情况,和抗hCGCP22抗血清体外抑制肿瘤的作用。方法:采用细胞免疫荧光染色测定5个肿瘤细胞株是否表达β-hCG,用CCK-8试剂盒检测CP22抗血清(AS CP22)和β-hCG羧基端37肽(CTP)抗血清(AS CTP)体外抑制肿瘤细胞生长的光密度。结果:以AS CP22为探针和AS CTP为阳性对照,体外培养的人胰腺癌BXPC-3、人卵巢癌HO-8910和人结肠癌Lovo细胞膜上都能观察到绿色荧光,提示肿瘤细胞均表达β-hCG亚单位,而人前列腺癌PC-3和Du-145细胞则未检测到绿色荧光;与正常兔血清(NS)比较,AS CP22和AS CTP均可显著的体外抑制BXPC-3和HO-8910细胞生长,P<0.001。AS CP22抑制BXPC-3和HO-8910肿瘤细胞的作用都强于AS CTP,P<0.05。结论:人胰腺癌BXPC-3、人卵巢癌HO-8910和人结肠癌Lovo细胞在体外培养的情况下均表达β-hCG亚单位,且它们的体外生长都能被兔抗hCG嵌合肽(CP22)抗血清体外抑制。     

四种止血材料对鼻内镜术后鼻腔填塞的疗效观察

目的:探讨各种止血材料对鼻内镜术后鼻腔鼻窦和填塞的止血效果。方法:对407例鼻内镜术后的患者,分别采用凡士林纱条,膨胀海绵,瑞纳(RHINO)快速止血材料及可吸收性止血绫填塞鼻腔,48h后抽出填塞物,观察患者填塞及抽出填塞物鼻腔胀痛,头痛,出血程度及粘膜水肿情况进行比较。结果:瑞纳组填塞期不适程度最小,抽出比较容易,凡士林纱条组抽出时渗血最多,患者不适症状较重,膨胀海绵及吸收性止血绫介于二者之间,适用于出血量少,以渗血为主的出血。结论:不同止血材料各具有优缺点,应针对不同病情恰当选择和使用。     

人釉原蛋白基因重组慢病毒载体的构建及在293T细胞中的表达

目的:构建含人釉原蛋白(human Amelogenin,hAm)成熟肽编码区基因的慢病毒载体FuAmw,并观察在重组慢病毒感染的293T细胞中釉原蛋白的表达.方法:以构建好的重组质粒PQE30-Am为模板,采用PCR技术体外扩增hAm成熟肽编码区.将扩增产物与慢病毒载体转移质粒FUGW分别用BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切后连接,构建重组慢病毒载体,转移质粒FUAmW,并进行酶切及测序鉴定.通过聚乙烯亚胺(polytheylenimine,PEI)法将三质粒共转染293T细胞,包装得到重组慢病毒FUGW和FUAmW,然后分别离体感染293T细胞,培养 72h后,经荧光显微镜下观察和流式细胞计数检测感染效率,采用RT-RCR及Western印迹法检测釉原蛋白基因的表达.结果:重组质粒经测序证实.插入片段与人釉原蛋白成熟肽基因序列完全一致.流式细胞仪测得重组病毒感染293T细胞绿色荧光蛋白(green fluoresence protein,GFP)的阳性率为67.38%.RT-RCR和Western印迹均证实,重组慢病毒FUAmW感染的293T细胞能够表达人釉原蛋白.结论:成功构建携带人釉原蛋白成熟肽基因的重组慢病毒载体质粒,以293T细胞包装得到的重组人釉原蛋白病毒能感染真核细胞并获得表达.     

人类新血小板反应素R-spondin 3的细胞定位及其对肿瘤细胞功能的影响

目的观察人类新血小板反应素R-spondin 3(Rspo 3)的细胞定位,并探讨其在肿瘤发生发展中的可能作用。方法利用荧光显微成像法观察EGFP-Rspo 3在HEK293细胞中的分布。将重组质粒pcDNA-Rspo 3转染结肠癌细胞HT-29、LoVo,采用流式细胞术观察Rspo 3基因过表达对肿瘤细胞周期与凋亡的影响;采用Matrigel、Transwell实验分别检测Rspo 3基因过表达对肿瘤细胞黏附及侵袭能力的影响。结果荧光显微成像法观察发现,EGFP-Rspo 3融合蛋白在细胞核表达,呈弥散点状分布。流式细胞术观察发现,Rspo 3基因过表达对肿瘤细胞生长周期没有明显影响;Rspo 3基因过表达不影响低恶性的HT-29细胞凋亡,但诱导高恶性的LoVo细胞凋亡(P<0.01)。Rspo 3基因过表达增强肿瘤细胞黏附性(P<0.01),降低肿瘤细胞的侵袭力(P<0.01),对肿瘤细胞移行有一定抑制作用。结论 Rspo 3有核定位功能,能诱导部分肿瘤细胞凋亡并抑制其转移扩散。     

t(13;14)家系一例

先证者,男,5岁,因“发育迟缓。多方诊治无效而到本室就诊。患者孕期有“羊水过少”,足月剖宫产,因新生儿呼吸窘迫曾在新生儿监护室监护一日。约两岁始可扶物行走及说单音节词语,现可在平地自行行走,能理解部分简单词语。患儿父母双方均有兄弟姐妹6人,正常婚育,双方家族内无不良孕产史。体检:精神呆滞,能说部分单音词,不     

49例染色体检查分析

染色体检查是最重要的遗传学检查方法,亦是基因定位研究的基本手段之一,对染色体病的防治及开展优生学服务有重要意义。作者近期从门诊患者中,结合病史,体格检查对49例染色体检查结果进行分析,试探讨染色体检查的适应征及临床价值。 结果:在49例病人中,男性23人,女性26人。就诊原因主要是不良孕产史、智力迟钝及     

一个phiC31相互作用的蛋白：人锌指蛋白403功能分析

背景：phiC31是重要的基因治疗工具酶,其与细胞内蛋白的相互作用可能影响细胞内各种通路,从而关系到基因治疗的安全性。 目的：构建锌指蛋白403基因原核表达载体,观察其在真核细胞的表达情况。 设计、时间及地点：单一样本观察,于2007-10/2008-12在复旦大学遗传工程国家重点实验室完成。 材料：大肠杆菌DH5α菌株及大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株均为实验室保存。 方法：用pLexA-phiC31作为“诱饵”,对人胎脑cDNA文库通过酵母双杂交进行筛查,分离阳性克隆。对锌指蛋白403基因构建原核表达载体并纯化鉴定。脂质体介导真核细胞进行转染并细胞定位观察。 主要观察指标：锌指蛋白 403的原核表达载体的构建、纯化及在真核细胞细胞质中定位的结果。 结果：酵母双杂交进行筛查后分离61个阳性克隆中,有1个包含17号染色体17q12上的基因序列,其具有一个锌指结构,故名锌指蛋白403。成功构建了锌指蛋白403的原核表达载体,并纯化组氨酸标记的锌指蛋白403。在真核细胞中,构建了绿荧光融合载体,证明了此蛋白在细胞质中的定位。 结论：实验结果发现了一个新的phiC31整合酶相互作用蛋白,成功构建了znf403基因的原核表达载体,znf403蛋白主要在细胞质中聚集和分布。     

人釉原蛋白的原核表达、纯化及鉴定

目的 构建含人釉原蛋白(hAm)成熟肽基因的重组原核表达质粒,在大肠杆菌中表达重组人釉原蛋白,鉴定经纯化获得的融合蛋白.方法 利用限制性内切酶EcoR I和Sal I将hAm基因插入原核表达载体PGEX4T1,对重组表达质粒PGEX4T1-hAm进行双酶切和测序鉴定.选择测序正确的质粒转化E.coli.RosettaTM,用终浓度0.3 mmol/L的IPTG诱导表达带有亲和标记谷胱甘肽-S-转移酶(GST)的重组hAm.经亲和层析纯化获得融合蛋白GST-hAm,并通过SDS-PAGE和Western blotting鉴定原核表达的重组hAm.结果 重组质粒经双酶切和测序鉴定证实插入序列准确无误.在大肠杆菌RosettaTM中经IPTG诱导表达并纯化得到的融合蛋白GST-hAm,经SDS-PAGE鉴定分子量约为46 000,主要以包涵体形式存在,与预测一致;Western blotting证实该融合蛋白能被特异性抗hAm多克隆抗体识别.结论 成功构建含有hAm成熟肽基因的重组原核表达质粒,表达的融合蛋白GST-hAm可通过纯化获得,经鉴定为hAm.大量纯化的hAm成熟肽的获得为开展其功能研究奠定了基础.     

人类组氨酰tRNA合成酶类似物的原核表达及其多克隆抗体的制备

目的：在原核系统中表达并纯化人类组氨酰tRNA合成酶类似物蛋白，制备多克隆抗体。 方法： 设计引物扩增其开放阅读框，重组入原核表达载体pQE30,并在大肠杆菌M15中诱导表达; 应用纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔。 结果： ①成功构建人类组氨酰tRNA合成酶类似物的原核表达载体；②经Ni亲和层析获得纯度较高的重组蛋白；③制备了高滴度的兔抗人类组氨酰tRNA合成酶类似物蛋白的多克隆抗体。 结论： 原核表达载体的构建、重组蛋白的表达、纯化及多克隆抗体的制备为今后研究该蛋白的功能提供了良好的基础。