单纯性超重、肥胖青少年血清脂联素、瘦素、游离脂肪酸及炎症因子水平变化及相关性分析

目的探讨单纯性超重、肥胖青少年血清脂联素、瘦素、游离脂肪酸（FFA）、超敏C-反应蛋白的水平变化及其与糖、脂代谢的相互关系。方法按中国肥胖问题工作组发布的中国学龄儿童青少年超重、肥胖筛查体重指数值分类标准,随机选择15岁青少年单纯性肥胖组（组1）77例、超重组（组2）120例和正常对照组（组3）109例,测定空腹血清脂联素、瘦素、游离脂肪酸（FFA）、超敏C-反应蛋白（hs—CRP）、胰岛素（Fins）、血糖（FBG）血脂谱及临床基本资料。结果空腹血糖在3组间无显著性差异（P=0．152）。组3至组1的甘油三酯（TG）呈梯度升高,高密度脂蛋白胆固醇（HDL—C）呈梯度下降,各组间差异显著（P〈0．001）。组3至组1的FFA、hs—CRP、Fins、胰岛素抵抗指数（HOMA—IR）呈梯度升高,脂联素呈梯度下降,各组间差异显著（P〈0．001）。瘦素在组1中明显升高,组2、组3间无统计学显著性差异（P〉0．05）。306例受试者经多元逐步线性回归分析显示：脂联素的独立影响因素是体重指数（BMI）、HDL—C、hs—CRP（R=0．429,R^2=0．184）;瘦素的独立影响因素是BMI、Fins、低密度脂蛋白胆固醇（LDL—C）（R=0．364,R^2=0．133）;FFA的独立影响因素是BMI、TG（R=0．661,R^2=0．437）;hs—CRP的独立影响因素是脂联素、BMI、HDL—C、HOMA—IR（R=0．445,R^2=0．198）;HOMA—IR的独立影响因素是瘦素、BMI、FBG、FFA（R=0．574,R^2=0．330）。结论单纯性超重、肥胖青少年血游离脂肪酸、瘦素、hs—CRP明显升高,脂连素明显降低;体重指数是瘦素、脂联素、胰岛素抵抗、hs—CRP共同的独立决定因素;脂肪细胞因子在调节糖、脂代谢及炎症方面有重要意义,可能是肥胖与代谢及发生心血管疾病之间的联系分子。     

TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR联合检测难辨梭菌菌属基因及毒素基因方法学的建立

目的 建立一种简便、快速难辨梭菌菌属鉴定及其毒素基因筛查的荧光定量PCR检测方法。方法 采用TaqMan-MGB探针，通过real-time PCR分析系统，同时检测难辨梭菌菌属基因磷酸丙糖异构酶（Tpi）、A毒素（TcdA）、B毒素（TcdB）及缺失部分基因的A毒素（TcdAT），从特异度、灵敏度及其抗干扰性等方面评价该方法，并联合全自动酶联荧光免疫系统（VIDAS）检测50 例临床不明原因腹泻病例粪便标本探讨其应用价值。结果 难辨梭菌非产毒株 Tpi 基因（tpi）的检测下限是6×10^-2 CFU/μl，产毒株 tpi、tcdA、tcdB、tcdAT 的检测下限为 6×10^-1 CFU/μl；难辨梭菌非产毒株tpi检测下限批内、批间变异率分别为2.1%和2.3%；产毒株tpi、tcdA、tcdB、tcdAT的检测下限批内、批间变异率依次为3.0%和3.4%、2.9%和3.2%、5.3%和5.7%、2.7%和2.8%。临床常见分离菌株及梭菌属其他细菌对检测无干扰。50 例不明原因腹泻病例粪便标本中，采用TaqMan-MGB 探针实时荧光 PCR 与 VIDAS 酶标免疫检测 39 例阴性标本其符合率为 100%；6 例两方法检测均为阳性；3例VIDAS酶标免疫检测为可疑及2例为阴性，经TaqMan-MGB探针实时荧光PCR检测为A-/B＋菌株。结论 建立的TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR具有高通量、高灵敏度和重复性好的特性，且可筛查携带缺失部分基因的TcdA难辨梭菌菌株。     

2009年秋季北京市3家哨点医院甲型HIN1流感病毒监测结果特征分析

目的回顾分析2009年秋季北京市3家哨点医院甲型H1Nl流感监测结果,为科学防控提供指导。方法回顾分析2009年5月8日～12月31日北京市西城区、海淀区、朝阳区3家哨点医院对甲型H1N1流感病毒监测情况,共计2632例流感样病例入选。其中,男性1418例,女性1214例,年龄1～98岁;采用real-timePCR方法对人选病例咽拭子标本进行甲型HIN1病毒核酸检测,同时全血细胞计数仪检测血常规。结果2632例流感样病例中,甲型H1N1流感病例占流感样调查人群的14．7％。其中,男性H1N1病例占其调查人群的15％,女性H1N1病例占其调查人群的14．3％,二者统计学无显著性差异（P〈0．01）。易感人群以7～18岁中小学生为主（占甲型H1N1流感病例的53．4％）;5～7月份甲型HlNl流感病例以输入性病例为主（占同期甲型H1N1流感病例的88．5％）,9、10月份多起聚集性疫情致本地感染病例达到高峰（占甲型H1N1流感病例的37．2％）;甲型川N1流感病例主要以发热（98％）,咳嗽（95％）,喉咙痛（81％）,流涕（76％）为主要症状就诊,甲型H1N1流感组与病毒检测阴性组比较,H1Nl患者白细胞总数与血小板计数明显偏低,差异具有统计学意义。而与非HlNl型甲型流感组比较,血常规各指标无显著性差异（P〉0．05）。结论本次甲型H1N1流感的临床表现及血常规检查与普通季节性流感相似,北京地区9、10月份是其最适流行季节,最适温度范围12～23℃,7～18岁中小学生是主要防控对象。     

异质性万古霉素中介金黄色葡萄球菌的筛选和生物被膜形成能力的研究

目的 调查笔者医院异质性万古霉素中介金黄色葡萄球菌(hVISA)的分离率,并探索hVISA菌株的生物被膜形成能力。方法 收集临床139例MRSA菌株,采用浓度为5mg/L的替考拉宁脑心浸液琼脂平皿(BHIA5T)进行hVISA筛选,应用改良菌群分析-曲线下面积(PAP-AUC)法进行确证,报告笔者医院hVISA的发生率。用刚果红琼脂和结晶紫染色法检测hVISA的生物被膜形成能力,微量肉汤稀释法和K-B纸片法检测生物被膜中细菌对抗生素的敏感度。结果 经过PAP-AUC方法检测,从139株MRSA中确定1例为hVISA阳性,hVISA的分离率为0.72%。分离出来的hVISA菌株可以形成生物被膜,hVISA菌株的最低抑制生物被膜浓度(MBIC)明显升高,K-B法检测显示它对利奈唑胺和替加环素敏感。同时,研究发现低浓度的万古霉素可能对生物被膜的形成有促进作用。结论 笔者医院hVISA的发生率虽然不高,但此菌株可以形成生物被膜,形成生物被膜后细菌对万古霉素敏感度降低,需要引起临床的高度重视,此时可尝试换用利奈唑胺或替加环素。     

引起血流感染的耐万古霉素肠球菌基因型、 毒力及MLST分型研究

目的 调查引起血流感染的耐万古霉素肠球菌 (VRE) 的检出情况,并对其进行耐药基因型、毒力和多位点序列分型 (MLST) 研究。 方法 收集2012年7月~2015年7月从笔者医院血培养阳性标本中分离的68株屎肠球菌和28株粪肠球菌,采用含6μg/ml万古霉素的脑心浸液平皿筛选VRE。采用多重PCR法检测vanA、vanB及粪、屎肠球菌种特异基因,另一种多重PCR法检测常见5种毒力基因 (esp、hyl、gelE、asa1和cylA)。采用MLST技术分析菌株序列型 (ST) 从而进行同源性分析。 结果96株肠球菌中共检出22株VRE (22/96,2.9%),包括20株屎肠球菌 (20/68,9.4%) 和2株粪肠球菌 (2/28,7.1%)。所有VRE耐药表型与基因型一致,属vanA型。20株屎肠球菌VRE仅esp (16/20,0.0%) 和hyl (10/20,0.0%) 阳性;2株粪肠球菌VRE仅gelE和 asa1阳性。20株屎肠球菌VRE分属7个ST型,包括8株ST78 (8/20,0.0%)、6株ST17 (6/20,0.0%) 以及2株ST18和ST389、ST414、ST571、ST564各1株。 结论 笔者医院VRE耐药问题严重,耐药基因和毒力基因携带率高。20株屎肠球菌VRE经eBURST软件分析均属于与医院感染相关的CC17克隆复合群。     

白色念珠菌ITS2的实时荧光定量PCR快速检测方法的建立及评价

目的 建立一种快速鉴定白色念珠菌的实时荧光定量PCR检测方法。方法 在白色念珠菌核糖体RNA编码基因（rDNA）中的内转录间隔区2（ITS2）上设计特异性引物和TaqMan-MGB探针,通过实时荧光定量PCR分析系统建立白色念珠菌的检测方法,对其敏感度、重复性和特异性进行方法学评价,并在模拟白色念珠菌血症的血标本中初步探讨其应用价值。结果 所建方法对白色念珠菌纯菌液的准确检测下限为10¹CFU/ml,相应的批内、批间变异系数（CV）分别为1.57%和2.20%。对135株白色念珠菌临床分离株、其他非白念菌株、细菌临床分离株和血液标本进行检测,结果显示该方法特异性为100%。另外,对于模拟白色念珠菌血症的血标本,该方法的最低检测下限为10²CFU/ml。结论 所建方法具有特异性和敏感度高、重复性好的特性,可适用于临床上白色念珠菌引起的血流感染的快速鉴定。     

乙醇脱氢酶1B-rs1229984和乙醛脱氢酶2基因-rs671多态性实时荧光定量PCR检测方法的建立

目的 建立乙醇脱氢酶1B （ADH1B）基因rs1229984（G/A）和乙醛脱氢酶2基因rs671（G/A）多态性的实时荧光定量PCR分型方法。方法 分别采用双TaqMan-MGB探针法建立ADH1B-rs1229984多态性,和ARMS-TaqMan探针法建立ALDH2-rs671多态性的实时荧光定量PCR分型方法。根据荧光定量PCR的循环阈值（Ct值）的差值ΔCt值判定等位基因型,并采用所建方法对345例中国汉族人进行了分型检测。结果 所建方法对345例研究对象分型检测显示,ADH1B-rs1229984多态性的GG （ADH1B*1/*1）、GA （ADH1B*1/*2）和AA （ADH1B*2/*2）型的ΔCt值（ΔCt=G型TaqMan-MGB探针Ct值-A型TaqMan-MGB探针Ct值）分别为-13.72±1.33（40例）、0.50±0.17（150例）和6.62±0.54（155例）;ALDH2-rs671的GG （ALDH2*1/*1）、GA （ALDH2*1/*2）和AA （ALDH2*2/*2）型的ΔCt值（ΔCt=G引物反应体系Ct值-A引物反应体系Ct值）分别为-15.30±0.84（239例）、0.17±0.45（96例）和15.86±0.74（10例）。345例研究对象中,ADH1B*1/*2和ALDH2*1/*1（31.3%）、ADH1B*2/*2和ALDH2*1/*1（28.7%）是2个等位基因的主要组合型（60%）,未见ADH1B*1/*1和ALDH2*2/*2组合型。结论 所建分型检测方法皆具有闭管、一步检测、准确和高通量等特点。     

2型糖尿病患者超敏C-反应蛋白与尿微量白蛋白相关性分析

目的探讨2犁糖尿病（T2DM）患者超敏C-反应蛋白（hs—CRP）水平与尿微量白蛋白相互关系。方法对诊断T2DM有微量门蛋白尿的91例患者（组1）、T2DM微量白蛋白尿正常的140例患者（组2）、尿微量白蛋白正常的非糖尿病137例对照者（组3）的体重指数、血压等临床资料进行调查。同时测定空腹血浆血糖（FBG）及2h血糖（PBG）；空腹血清hs—CRP、胰岛素（FINS）、肌酐（Scr）、胆固醇（TCHO）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL—C）、低密度脂蛋白胆同醇（LDL—C）、糖化血红蛋白（HbA1C）、及尿微量白蛋白（mALB）与尿肌酐（Ucr）的比值（ACR）。结果组1 1g hs—CRP明显高于组2、组3（P〈0．001），组2、组3间无显著性差异（P〉0．05）。经Pearson相关分析显示，1g gs—CRP与年龄、TCHO、1g TG、HDL—C、LDL-C、HbA1C、1g FINS、1g ACR、BMI显著讵相炎（P〈0．05）。多元线性回归显示1g hs—CRP、FBG、HbA1C、1g FINS、BMI、收缩脏是尿1g ACR独立影响因索（R=0．544，R^2=0．296）。结论血清hs—CRP水平对T2DM患者糖尿病肾病的发生和病情监测有重要的临床价值，临床应及时临测hs—CRP水平。     

初诊2型糖尿病患者血清中miR-29a和miR-375表达变化及其与糖、脂标志物相关性研究

目的探讨miR-375和miR-29a在初诊2型糖尿病（DM）患者血清中的表达水平,及其表达变化与糖、脂标志物的相关性。方法排除既往已诊断DM的健康体检者,所有研究对象均行75克葡萄糖耐量（OGTT）实验,根据1999年WHO的DM诊断标准,将研究对象分为糖代谢正常组（38例）和DM组（48例）。以RNU6B作为内参基因,采用实时荧光定量PCR的方法检测血清中miR-29a和miR-375的相对表达水平。结果 DM患者血清中的miR-29a和miR-375表达量皆显著高于对照组。血清中miR-29a和miR-375的表达量与FPG、2hPG和糖化血红蛋白皆呈显著正相关（P〈0.05）,与血脂各指标无显著相关性（P〉0.05）。血清miR-29a和miR-375表达量间呈显著正相关性。结论 miR-29a和miR-375在血清中表达变化有可能作为诊断2型糖尿病的分子标志物。miR-29a和miR-375两者在2型糖尿病的发生、发展中可能具有协同调控作用。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药性，SCCmec分型及毒素基因的检测

目的调查北京大学第一医院致病性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌SCCmec分型情况、耐药状况、PVL、TSST-1基因携带率,初步了解临床耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐药原因,为临床感染控制提供依据。方法收集2007年9月至2008年3月住院患者首次分离的53株有致病意义MRSA,用全自动微生物分析仪进行药敏试验,应用PCR方法检测MBSA的SCCmec基因型、PVL、TSST-1基因。结果53株MRSA呈多重耐药特点,SCCmec分型以ⅢA为主（47．2％）,PVL基因均为阴性,12株（22％）MRSA TSST-1阳性。结论53株MILSA的多重耐药性与SCCmec结构密切相关,SCCmec分型技术是探索MRSA多重耐药性与耐药结构有效的分子生物学手段,TSST-1基因阳性株在临床分离的金黄色葡萄球菌中占有较高的比例。