人血管内皮生长因子165基因腺病毒载体的构建及其在C17.2神经干细胞的表达

[目的]构建含有人血管内皮生长因子165(VEGF165)基因的重组腺病毒载体并观察其在C17.2神经干细胞的表达,为下一步脑缺血的转基因细胞移植治疗提供基础.[方法]将VEGF165基因克隆至腺病毒穿梭质粒pAdTrackCMV,获得重组质粒pAdTrack VEGF165,经酶切线性化后,与腺病毒骨架质粒pAdEasy共同转染大肠杆菌BJ5183同源重组获得重组腺病毒质粒,将线性化的重组腺病毒质粒转染293细胞包装获得有感染能力但复制缺陷的重组腺病毒pAdCMV VEGF165,转化体外培养的C17.2神经干细胞.通过RT-PCR、原位杂交、免疫组化、Western blot法检测其在C17.2神经干细胞中的表达.[结果]重组腺病毒AdCMV VEGF165在293细胞中包装成功,病毒滴度达2×1011efu/mL.病毒上清液经ELISA检测VEGF165表达的量为(1135±138)ng/L.重组腺病毒转染神经干细胞后有稳定表达.[结论]成功构建pAd VEGF165重组腺病毒,获得了稳定表达VEGF165的神经干细胞克隆,为下一步脑缺血的转基因细胞移植治疗提供了基础.     

阿尔茨海默病易患性与人类白细胞抗原的相关性研究

近年来 ,国外研究显示人类白细胞抗原 (ＨＬＡ)与散发性阿尔茨海默病 (ＳＡＤ)的发病有关 ,但是报道不尽一致 ,而国内目前尚缺乏这方面的研究。我们对此进行了研究 ,现报道如下。资料和方法 :ＳＡＤ组 44例 ,男性 11例 ,女性 33例 ,年龄(74.2± 2 .8)岁。全部病例从广州市精神病院中筛选 ,应用简易精神状态检查 (ＭＭＳＥ)量表及日常生活能力量表 (ＡＤＬ)初筛出有痴呆 ,Ｈａｃｈｉｎｓｋｉ缺血指数 <4分的患者 ,再根据美国国力神经病、语言机能紊乱和卒中研究所及阿尔茨海默病和相关疾病协会 (ＮＩＮＣＤＳ ＡＤＲＤＡ)临床诊断标准 ,把诊…     

传染性非典型性肺炎患者出现焦虑、抑郁等神经精神损害症状的特征

背景传染性非典型性肺炎(severe acute respiratory syndrome,SARS)是一种新型冠状病毒所致的急性传染病,临床表现以肺脏的急性炎症性损伤为主,可合并心、脑、肾等多脏器损害,除躯体症状外,情感障碍是SARS患者的另一显著神经精神症状.目的对SARS合并神经精神损害的临床特点进行分析总结.设计以患者为观察对象,回顾性病例分析.单位中山大学第二附属医院的神经科,呼吸科和放射科.对象2003-02/05中山大学第二附属医院及广州市第八人民医院住院确诊SARS病例325例,其中出现神经精神症状者173例.方法回顾分析325例SARS病例,其中173例出现神经精神症状,总结分析其临床资料.主要观察指标神经精神损害的临床表现,眼底检查结果,部分死亡病例尸检病理结果.结果①SARS神经精神症状发生率为53.2%,主要有以下几类头痛116例(67.1%),头晕50例(28 9%),意识障碍18例(10.4%),精神障碍8例(4.6%),伴神经系统局灶定位体征者1例(0.6%),抽搐2例(1.2%),情感障碍53例(30.6%),其中焦虑35例(20.2%),抑郁11例(6.4%),自杀倾向2例(1.2%),恐惧13例(7.5%).②325例中,重症SARS 56例,伴发神经精神损害者47例,其发生率明显高于轻症(P＜0.01).③4例病例眼底检查显示视乳头边缘欠清晰,生理凹陷存在,静脉充盈.④2例死亡病例尸体解剖脑组织病理显示脑组织出现不同程度的水肿,局部神经纤维出现脱髓鞘现象.结论SARS神经精神损害症状多样,与病情轻重显著相关.病理检查可见脑水肿及神经元脱髓鞘等损害.     

初发脑梗死后急性期抑郁发病率及与相关因素的关系

目的:探讨初发脑梗死急性期抑郁发生率及与年龄、性别、梗死部位及日常生活活动能力的关系。方法:采用汉密顿抑郁量表及中国精神障碍分类与诊断标准第3版(CCMD-3)关于脑卒中后抑郁状态(post-strokedepression,PSD)的诊断标准对70例急性期脑梗死的患者进行评分及诊断,同时采用Barthel指数评定病情严重程度,并统计分析抑郁与年龄、性别、梗死部位及日常生活活动能力的相关性。结果:PSD总发病率为29%,其中轻度22%,中度4%,重度3%。病灶位于左侧、Barthel指数分值低与抑郁存在相关性(r=-0.8557,P<0.05),而与年龄、性别无关。结论:脑梗死急性期的抑郁原因可能是肢体瘫痪程度影响了患者的日常生活活动能力而引起的心理反应。     

急性放射性脑损伤鼠模型的建立

背景：目前国内外关于放射性脑损伤动物模型的研究均处于探索中，尚未形成成熟的模型制作方法。目的：建立急性放射性脑损伤的鼠模型，为进一步研究放射性脑损伤正确有效的预防措施提供实验依据。设计：以实验动物为研究对象，随机对照观察研究。单位：一所大学医院动物实验室。材料：实验于2001-06／2002—08在中山大学附属第二医院实验室完成。SD大鼠60只，体质量(300&;#177;30)g，雌雄各半，空白对照组20只，实验组40只。方法：SD大鼠头部接受^60Coγ射线照射，7Gy／次，1次／d，连续照射6d，总剂量42Gy。照射结束后每日观察大鼠摄食、饮水量及次数，自主活动情况．有无出现神经系统症状与体征，每周检查并记录大鼠头部照射区毛发与皮肤情况、体质量变化，照射结束后第3，7，14，30天断头取脑，行病理组织学检查。主要观察指标：①一般情况观察。②照射后脑组织病理改变。结果：照射第3天起即出现每日摄食、饮水量减少；照射第1，2天，自主活动较对照组增多，第3天起活动渐减少；无异常神经系统体征；随观察时间延长体质量增长较对照组慢，但差异无显著性意义；所有大鼠均于照射后约2周时出现照射野轻度脱毛；照射后出现脑组织神经元变性坏死。结论：该模型制作方法切实、可靠，较好地模拟放射性脑损伤的过程，可用于预防或减轻放射治疗对脑组织损伤的实验研究。     

白介素-1受体拮抗剂基因多态性与散发性帕金森病的关系

目的探讨白介素-1受体拮抗剂（IL-1RA）基因多态性与帕金森病（PD）的关系。方法本实验用PCR-片段长度多态性分析法检测了89例中国散发性帕金森病病人和67例正常对照的白介素-1受体拮抗剂基因多态性。结果与对照组相比,PD组中IL-1RA基因VNTR多态性的A2等位基因有增加的趋势,但两者差异无统计学意义（P〉0.05）。帕金森病合并痴呆组（PDD组）中IL-1RA基因A2等位基因频率较非痴呆组（PDND组）有显著性增加（P〈0.05）,而且在PDD组中,IL-1RA基因A2/A2纯合子和A1/A2杂合子基因型频率较PDND组有显著性增加（P〈0.05）。结论IL-1RA基因多态性可能与我国人散发性帕金森病的发病无关,而与帕金森病并发痴呆发病过程中有关。     

外源性碱性成纤维细胞生长因子对放射诱导神经干细胞凋亡的抑制效应

背景：已证实放射性神经干细胞损伤是放射性脑损伤的可能途径之一,而碱性成纤维细胞生长因子对放射性损伤具有保护作用,但其机制尚不清楚。 目的：观察外源性碱性成纤维细胞生长因子对放射诱导C17.2神经干细胞凋亡的抑制作用。 设计、时间及地点：随机分组设计,对比观察,于2006-11/2008-06在中山大学附属第二医院林百欣实验中心完成。 材料：C17.2神经干细胞系为小鼠小脑祖细胞永生化后构建的神经干细胞系。 方法：以直线加速器进行总量为8 Gy外照射C17.2神经干细胞建立离体放射性损伤模型,以1×107 L-1的细胞浓度接种C17.2神经干细胞悬液至96孔板,每孔加细胞悬液200 μL,按0,25,50,100 μg/L(0 μg/L作对照)分别加入碱性成纤维细胞生长因子干预。 主要观察指标：四甲基偶氮唑盐法检测细胞活性并拟合生存曲线,流式细胞仪检测细胞凋亡率。 结果：随碱性成纤维细胞生长因子浓度升高,C17.2神经干细胞增殖比明显增加(P < 0.01),呈现明显剂量-效应关系。碱性成纤维细胞生长因子浓度为100 μg/L时活性最强,未显示细胞毒性。流式细胞仪检测结果显示：对照组细胞凋亡率高于25,50 μg/L碱性成纤维细胞生长因子组(P < 0.01),25,50,100 μg/L碱性成纤维细胞生长因子组组间相比,差异具有显著性意义(P < 0.05~0.01)。 结论：外源性碱性成纤维细胞生长因子对放射诱导的C17.2神经干细胞凋亡具有明显抑制作用。     

碱性成纤维细胞生长因子转基因治疗对放射性脑损伤大鼠学习记忆能力的改善作用

目的 观察碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)转基因治疗对放射性脑损伤(RIB)模型鼠学习记忆能力的影响,为探索治疗RIB的新途径提供实验基础.方法 PCR法克隆出bFGF基因片段,酶切后连接法构建bFGF-pcDNA3.1(+)质粒.分组采用直线加速器对Sprague-Dawley大鼠进行全脑单次25Gy照射,bFGF转基因治疗组采用侧脑室注射bFGF-pcDNA3.1(+)质粒,并设未照射组为对照.在照射前及照射后7d,20d,60d分别进行Moms水迷宫试验,分析各组大鼠行为学检测结果.采用平均逃避潜伏期和搜索策略2个指标评价大鼠学习记忆能力,同时观察各组脑组织病理变化.结果 各组大鼠放射前平均逃避潜伏期和搜索策略得分无统计学差异,bFGF治疗组、照射组和对照组在照射后不同时间点平均潜伏期和搜索策略差异有显著性(P<0.05)).bFGF治疗组在放射后7 d、20d平均逃避潜伏期[(68.42±11.35)s、(50.87±12.06)s]和搜索策略[(16.89±2.08)%、(19.98±2.14)%]明显下降,60d时潜伏期[(40.28±10.87)s]和搜索策略[(26.42±2.59)%]恢复至照射前水平,放射组60d后仍没有恢复.照射组病理检查显示海马和皮层神经元轻度变性.胞体萎缩,白质区域较对照组呈现组织结构梳松、血管周隙扩大等表现;bFGF治疗组病变程度明显较照射组轻.结论 25Gy射线照射可降低大鼠学习记忆能力,bFGF转基因治疗可逆转放射造成的大鼠学习记忆能力下降.     

血管内皮生长因子基因转染骨髓间充质干细胞移植治疗放射性脑损伤认知功能损害

目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)基因转染同种异体骨髓间充质干细胞(MSCs)移植治疗对SD大鼠放射性脑损伤认知功能损害的影响.方法 体外分离、纯化、培养大鼠MSCs.构建VEGF腺病毒载体.单次40Gy全脑照射成年SD大鼠,制备脑损伤模型.大鼠随机分为未照射组、单纯照射组和细胞移植3组.细胞移植组采用经尾静脉注射转染后的MSCs.各组大鼠在照射后1个月、2个月、3个月、4个月和6个月分别进行Morris水迷宫试验,采用平均逃避潜伏期和搜索策略两个指标评价大鼠学习认知能力.血管内皮细胞标志物VIII因子免疫组化染色,评价脑微血管密度改变.结果 照射组在3个月时血管密度与未照射组相比明显下降(P<0.05),4个月时开始出现明显的认知功能下降,平均潜伏期[(96.14±8.09)s]和搜索策略[(15.03±1.76)%]差异有显著性(P<0.05).细胞移植组大鼠的学习认知能力显著增加,平均潜伏期[(69.74±7.13)s]和搜索策略(23.74±1.51)%,与单纯照射组相比差异有显著性(P<0.05),在3个月和6个月时,脑微血管密度较单纯照射组显著增加(P<0.05).结论 VEGF基因转染骨髓间充质干细胞移植治疗能够促进放射后大鼠脑微血管的再生和改善其认知功能.     

Nurr1的研究进展

Nur相关因子1(Nurr1)属于孤儿核受体的超家族,人类Nurr1基因位于2号染色体,有8个外显子,在中枢神经系统内有广泛表达,与中脑多巴胺能神经元的发生、发育和存活有密切关系.本文对Nurr1的分子结构、分布、生理功能以及与多巴胺能神经元显型的关系作一综述.