RYBP基因稳定沉默的HL-60细胞系的构建

 【摘要】　目的　利用慢病毒介导的RNA干扰（RNAi）技术,建立RYBP基因稳定沉默的HL-60细胞系。方法　设计针对RYBP基因的5条短发夹状RNA（shRNA）序列,构建RYBP shRNA慢病毒重组载体,分别包装成慢病毒颗粒,直接感染HL-60细胞,同时设空载体和阴性对照shRNA慢病毒对照组。通过观察绿色荧光蛋白表达以监测感染效率,经嘌呤霉素（终质量浓度8 μg／ml）筛选出稳定感染细胞。Western blot实验初步鉴定出蛋白水平最低的RYBP shRNA组,用实时定量聚合酶链反应（PCR）进一步检测该组细胞mRNA表达水平。结果　慢病毒感染的HL-60细胞经嘌呤霉素筛选成功,与对照组比较,5条RYBP shRNA组细胞RYBP表达均有不同程度减低（P＜0.01）,其中以shRNA2沉默效果最佳,且shRNA2组的RYBP基因mRNA水平降低了95 %以上（P＜0.05）。结论　慢病毒介导的shRNA2能高效、稳定地沉默RYBP基因的表达,成功构建了RYBP基因稳定沉默的HL-60细胞系。     

黄芪甲甙在Balb/C小鼠CVB3病毒性心肌炎中抗凋亡作用的机制

目的 观察黄芪甲甙对Balb/C小鼠CVB3病毒性心肌炎心肌细胞凋亡的影响,探讨黄芪甲甙抗心肌细胞凋亡的可能机制.方法 Balb/C小鼠50只随机分5组(每组10只).空白对照组:腹腔无菌注射不含病毒的Eagle's培养基0.1 mL,在腹腔注射病毒培养基30 min后,以生理盐水0.1 mL灌胃,共7天;病毒性心肌炎对照组:小鼠每只腹腔注射0.1 mL内含1×105TCID50 CVB3 的Eagle's培养基,在腹腔注射含病毒的Eagle's培养基30 min后,以生理盐水0.1 mL灌胃,共7天;黄芪甲甙低、中、高剂量干预组:在腹腔注射病毒30 min后,用黄芪甲甙[具体剂量分别为0.07、0.2、0.6 mg/(kg·d)]0.1 mL灌胃,共7天.采用缺口末端标记法(TUNEL)检测心肌凋亡细胞,免疫组织化学检测Bcl-2、Bax蛋白的表达,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Bcl-2、Bax基因的表达,并利用图像分析系统测量平均光密度值进行半定量分析.结果 与空白对照组比较,病毒性心肌炎对照组心肌细胞凋亡发生率增高;抑制凋亡因子Bcl-2基因及蛋白表达下降,而促进凋亡因子Bax基因及蛋白表达增强,Bcl-2/Bax mRNA比值降低.与病毒性心肌炎对照组比较,黄芪甲甙高剂量干预组能降低CVB3病毒性心肌炎心肌细胞的凋亡指数,Bcl-2基因及蛋白水平表达增强,Bax基因及蛋白水平表达下降.结论 黄芪甲甙在Balb/C小鼠CVB3病毒性心肌炎中抗凋亡作用机制可能是促进了抑制凋亡基因Bcl-2表达,抑制了促凋亡Bax基因表达.     

辅助性T细胞及其细胞因子在重症肌无力中的作用

目的探讨辅助性T细胞及其相关细胞因子在全身型MG患者急性期发病中的作用。方法采用流式细胞术检测33例全身型MG患者和34例健康对照组外周血中Tfh细胞亚群CXCR5~+CD4~+T、CD45RO~+CXCR5~+CD4~+T、CD45RA~+CXCR5~+CD4~+T、ICOS~+CXCR5~+CD4~+T和PD-1~+CXCR5~+CD4~+T细胞占CD4~+T细胞的比例。采用流式液相多重蛋白定量(cell based assay,CBA)技术检测MG组及对照组血清中IL-17A、IFN-γ、IL-4、IL-21的含量。应用ELISA技术检测MG组及对照组血清中IL-22的含量。根据QMGs(the quantitative myasthenia gravis score,QMGs)对纳入研究的MG患者进行评分,QMGs反映了MG患者的病情严重程度。结果 MG组外周血中的循环Tfh细胞(ICOS~+CXCR5~+CD4~+T和PD-1~+CXCR5~+CD4~+T)较对照组增高(P=0.016,P0.001),且PD-1~+CXCR5~+CD4~+T细胞与MG患者病情严重程度正相关(r=0.405,P=0.019)。MG组血清IL-21、IL-17A、IFN-γ的含量较对照组升高,有统计学意义(P=0.007,P=0.016,P=0.007);MG组血清IL-4的含量较对照组略有增多,IL-22含量较对照组略有减少,但均无统计学意义。MG组IL-4含量QMGs呈负相关,差异具有显著性(r=-0.393,P=0.024)。结论 MG急性期ICOS~+和PD-1~+的循环Tfh细胞可能促进MG发病;IL-21、IFN-γ、IL-17A同样可能促进MG发病;IL-4可能对MG有保护作用。     

ABO新生儿溶血病发病与O型血孕妇IgG抗体效价的相关分析

目的探讨黄疸患儿ABO新生儿溶血病(HDN)发病与"O"型孕妇孕期免疫性(IgG)抗体效价的相关性.方法分析60例黄疸患儿血型血清学检查及其母亲产前IgG抗A(B)效价检测结果等有关资料.结果黄疸患儿ABOHDN的发病与其母亲的免疫性抗体效价高低成正相关.结论产前检测夫妇ABO血型不合,特别是"O"型孕妇的IgG抗A(B)效价,对预防和治疗ABOHDN有积极意义.     

内镜超声检查167例患者诊断分析

目的 探讨内镜超声检查（EUS）对上消化道疾病的诊断价值。方法 对167例（手术患者119例）经内镜拟诊为上消化道恶性肿瘤（89例）及粘膜下隆起性病变（78例）的患者进行内镜超声检查，使用的参比方法有手术、活检、其它影像学检查及随访6月以上。结果 EUS对上消化道恶性肿瘤的诊断正确率为81．5％，胃镜为66．7％；EUS对鉴别粘膜下病变是真性壁内肿瘤还是腔外压迫的正确率达100％，对粘膜下肿瘤良、恶性诊断的正确率分别为83％和69％。结论 （1）EUS对上消化道恶性肿瘤的诊断和鉴别粘膜下病变是真性壁内肿瘤还是腔外压迫的准确性明显优于胃镜；（2）EUS对粘膜下肿瘤的良恶性判断的准确性虽有欠缺，但仍是观察粘膜下病变的最佳方法。     

决策树分类分析法在资源护士调配中的应用

目的科学有效地调配医院护理人力资源,满足病区护理工作需求。方法将床护比设为应变量,各病区的入院患者数、特级护理人数、特级护理天数、危重患者数、I级护理天数等19项指标工作量设为自变量,进行决策树分析;选取终末结点实际工作量最大的病区为配备人员接受单位。结果45名护理管理者对资源护士调配的客观性、适用性、接受度及对调配效果均表示满意和比较满意。结论决策树分析法能为资源护士的调配提供客观、有效的决策指导,有利于满足病区护理工作需求。     

愈酚伪麻口服溶液治疗儿童咳嗽的疗效观察

目的 观察愈酚伪麻口服溶液治疗儿童咳嗽的临床疗效.方法 将76例咳嗽患儿随机分为治疗组36例和对照组40例.治疗组采用感酚伪麻口服溶液治疗,对照组采用复方磷酸可待因溶液治疗,对比2组临床疗效.结果 治疗组总有效率为94.4%高于对照组的67.5%,差异有统计学意义（P＜0.05）.治疗组出现不良反应3例（8.3%）,对照组出现不良反应5例（12.5%）,差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 儿童咳嗽的原因是多方面的,因其病因病理较为复杂,在临床上诊治较为困难,在诊治及鉴别诊断时,应认真仔细、全面分析,以早日治愈小儿咳嗽.     

成分血的保存与输注护理

目前越来越多输血工作者和临床医师 ,在临床实践中认识到输注全血的缺点以及成分输血的优越性。近年各大医院成分输血都有明显提高 ,我院近 3年平均已达到 86 6 %。正确地予输注护理和保存各类成分血 ,对提高其作用的发挥极其重要 ,现介绍如下。1　一般护理1 1　输血要求同型相输 :抽配血标本前 ,护士应仔细核对标本的床号、姓名、血型 ,一定要保证其新鲜、准确 ,一般不需要抗凝 ,如输注右旋糖酐或脂肪乳 ,必须在输注前抽取配血标本 ,否则影响血型鉴定和交叉配血的结果。护士凭取血单取血 ,与发血者核对无误 ,以清洁包布包好拿回病房 ,再次…     

P73mRNA在急性淋巴细胞白血病细胞的表达及临床意义

目的 探讨P^73mRNA失表达在小儿急性淋巴细胞白血病(ALL)中的临床意义。方法 RT-PCR法检测40例ALL患儿骨髓单个核细胞内P^73mRNA表达，并分析P^73mRNA失表达与影响ALL预后因素的关系。结果 ALL中存在较高频率的P^73mRNA失表达，又与高白细胞数、高肿瘤负荷、髓外浸润、高危临床分型显著相关。结论 P^73mRNA失表达在小儿ALL发病过程中起重要作用，P^73mRNA失表达与预后不良因素相关，P^73mRNA检测可能对评估小儿ALL预后、指导临床治疗有重要意义。