ELISA法和电化学发光免疫法检测血清HBsAg结果比较分析

目的对酶联免疫吸附试验（ELISA）和电化学发光免疫法（ECLIA）检测血清中的乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）结果进行比较分析。方法采用ELISA和ECLIA 2种方法分别检测8 913例血清中的HBsAg。结果 ELISA法和ECLIA法检测出的总阳性数和总阳性率分别为519例占5.82%,451例占5.06%;以ECLIA法为参照,ELISA法假阴性率为0.67%,假阳性率为1.43%,相对敏感性为88.3%,相对特异性为98.5%二者的符合率为97.9%;403例阳性标本用ECLIA法复检,ELISA法的假阳性率为11.9%,相对敏感性为100%,相对特异性为50%,二者的符合率为88.1%;116例弱阳性标本用ECLIA法复检,ELISA法的假阳性率为69%,相对敏感性为100%,相对特异性为50%,二者的符合率为31%;8 394例阴性标本用ECLIA法复检,ELISA法的假阴性率为0.71%,相对敏感性为50%,相对特异性为100%,二者的符合率为99.3%。结论血清HBsAg ELISA法检测存在一定的假阴性率和假阳性率,敏感性和特异性较ECLIA法差,且随HBsAg浓度变化较大。ECLIA法快速、准确、敏感性、特异性更高。     

不同的梅毒血清学试验方法检测1 808例血清标本结果分析

目的结合患者临床资料,比较快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)、梅毒螺旋体特异性抗体化学发光法(CLIA)和梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)检测梅毒的优缺点。方法 1 808例标本分别采用RPR法和CLIA法检测,结果阳性的标本再用TPPA法复测。结果1 808例患者中共确诊170例梅毒感染患者。RPR法敏感性和阳性预测值较低,与CLIA法和TPPA法相比差异有统计学意义(P<0.05);RPR法特异性与CLIA法相比差异无统计学意义(P>0.05);阴性预测值低于CLIA法,差异有统计学意义(P<0.05)。CLIA法敏感性与TPPA法相比差异无统计学意义(P>0.05),阳性预测值低于TPPA法,差异有统计学意义(P<0.05)。三种方法均存在一定的生物学假阳性,RPR法和TPPA法存在一定的假阴性。结论梅毒血清学试验CLIA法和TPPA法在梅毒诊断方面优于RPR法,建议改进梅毒检测流程并且结合流行病史、临床资料及实验室检查结果综合判断。     

流式细胞术检测RA患者外周血CD4^＋CD25^＋FOXP3^＋ Treg细胞及其GITR表达

目的研究FOXP3和糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(GITR)在类风湿关节炎(RA)患者外周血Treg细胞的表达并探讨其临床意义。方法用五色流式细胞术(FCM)检测40例健康体检者、61例RA患者外周血CD4 CD25 FOXP3 调节性T细胞(Treg)及其中GITR的表达情况。结果RA患者组FOXP3的平均荧光强度(MFI)低于健康对照组(P<0.05),CD4 CD25 FOXP3 Treg占CD4 T细胞的比例、CD4 CD25 FOXP3 Treg中GITR的表达率、GITR MFI和健康对照组相比无统计学差异(P>0.05);活动期RA患者的FOXP3 MFI和GITR MFI均显著低于非活动期组(P<0.01和P=0.032),CD4 CD25 FOXP3 Treg占CD4 T细胞中的比例、CD4 CD25 FOXP3 Treg中GITR的表达率与非活动期组相比无统计学差异(P>0.05)。结论RA患者的FOXP3表达低下,活动期组的FOXP3表达低于非活动期组,为其作为RA病情变化的判断指标提供进一步的证据。     

直接标记的抗体芯片筛选血清疾病候选标志物的研究

目的应用血清样品直接标记和抗体芯片方法进行抗原和疾病标志物的筛选。方法分别取正常、糖尿病和甲亢患者的血清,采用FMB的ASB600抗体芯片的样品及相关的标记试剂盒,对3μl血清样本进行直接生物素标记。抗体芯片孵育后,用链霉亲合素标记的Cy3荧光显色芯片,经扫描仪检测杂交信号,分析比较芯片内、芯片之间的信号结果重复性,初步筛选疾病样本中与正常样本有差别的蛋白标志物。结果芯片内的两点重复性相关系数R2达到0.95～0.99,芯片重复实验间的相关系数R2达到0.98。对不同样本间的芯片信号进行比较,可以发现与疾病相关的新蛋白分子。结论本研究中使用的ASB600抗体芯片和直接标记荧光检测的实验方法可用于疾病相关的血清分子标志物的识别与寻找。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌医院感染爆发流行的实验室调查

目的采用耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)mecA基因相关高变区(HVR)长度多态性分型了解MRSA的医院感染爆发流行情况。方法选取临床分离的38株MRSA菌株,采用聚合酶链反应(PCR)方法扩增MRSA mecA基因HVR,据扩增片段大小差异进行基因分型。结果根据PCR产物片段大小,38株MRSA被分为A、B、C、D 4个基因型,其中C型23株(60.53%)、A型7株(18.42%)、B型3株(7.89%)、D型2株(5.26%)、未分型3株(7.89%)。C型在临床各科室均有分布,但主要集中于老干部科。MRSA呈严重且多重耐药,故首选抗菌药物为万古霉素、替加环素、奎奴普汀/达福普汀和替考拉宁。结论医院内存在着MRSA菌株的克隆传播,应加强检测,控制医院感染爆发流行。     

上海市各级医院检验科现况的抽样调研

目的调研上海市各级医院检验科现况。方法分层随机选取上海市20家社区医院,10家二级医院和10家三级医院的检验科,对检验科的基本情况、人员构成及继续教育等情况进行详细的调研。结果各级医院检验科人员构成在技术、职称类型和学历方面差异均有统计学意义（P〈0.05）,各级医院检验科继续教育部分问题中,是否到大医院进修、是否参加上级医院会诊和是否有高级人员讲课三个问题差异有统计学意义（P〈0.05）,社区医院与二、三级医院在质控水平及细胞形态识别上差异有统计学意义。结论增加继续教育的机会与方式,是提高目前各级医院检验科人员技术水平的有效方式。     

类风湿关节炎患者SIRL-1表达及其调控NETs形成的作用

目的：探讨白细胞信号抑制受体-1(SIRL-1)在类风湿关节炎（RA）患者关节滑膜组织和外周血中性粒细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞中的表达及其对中性粒细胞外捕网（NETs）形成的影响。方法：免疫组织化学染色比较RA患者和骨关节炎（OA）患者滑膜组织中表达SIRL-1的阳性细胞数；流式细胞术分析RA患者和健康志愿者（HC）外周血中性粒细胞、单核细胞和嗜酸性粒细胞表面SIRL-1表达；密度梯度离心法分离RA患者和HC外周血中性粒细胞，分析SIRL-1单克隆抗体（SIRL-1mAb）自发形成NETs的影响。结果：RA滑膜组织中表达SIRL-1的阳性细胞数少于OA滑膜组织（P=0.040 2）；与健康对照组相比，RA患者外周血中性粒细胞和单核细胞表面SIRL-1表达明显降低（P=0.029 8,P=0.006 7），但两组人群嗜酸性粒细胞SIRL-1表达差异无统计学意义（P=0.401 7）;RA患者中性粒细胞比健康对照组更易自发形成NETs(P=0.000 2)；与未使用SIRL-1 mAb组相比，SIRL-1 mAb处理的RA患者形成NETs水平明显降低（P=0.036 8）,SIRL-1 ...     

高效液相色谱-串联质谱法检测血清油酸及其在胰岛素抵抗中的应用

目的建立高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)检测血清油酸(OA),初步评估OA在2型糖尿病(T2DM)胰岛素抵抗(IR)中的作用。方法用OA-[~(13)C_5]作为同位素内标物,OA和OA-[~(13)C_5]的离子对分别为281.3/281.3和286.3/286.3。ZORBAX SB-Aq C18反相色谱柱,流动相A为超纯水,流动相B为甲醇乙腈(1∶1,v/v),梯度洗脱,流速0.3 mL/min。根据EP15-A3文件,考察精密度和正确度、线性范围、稳定性、携带污染率等性能以评价该方法的可靠性。选取临床确诊T2DM患者109例及体检健康者100例,用HPLC-MS/MS检测血清OA,并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)评价IR,进一步分析OA与IR的关系。结果建立的检测OA的HPLC-MS/MS特异性好,在10～1 000μmol/L范围内线性关系良好,y=0.007 55x+0.004 83,r=0.997 7,定量限(LLOQ)为10μmol/L,批内不精密度(以变异系数CV表示)≤1.62%,实验室内CV≤1.73%,方法精密度较好,适合临床血清样品的测定。与健康人对照组血清OA水平(113.20±58.00)μmol/L比较,T2DM组血清OA水平(425.58±220.17)μmol/L升高,且对照组和T2DM组OA与HOMA-IR均呈正相关。以OA诊断IR的AUC为0.689,当根据约登指数确定cut-off值为235.8μmol/L时,敏感性为70.4%,特异性为63%;当OA联合FPG诊断IR时,AUC增至0.806,且与OA诊断IR的AUC比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论建立了科学、高效定量检测血清OA浓度水平的HPLC-MS/MS,为动态监测代谢性疾病人群OA含量的变化提供了可靠的方法。     

Detection of Klebsiella pneumonia in respiratory tract samples by the loop-mediated isothermal amplification method

目的:建立环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测呼吸道感染患者痰液中肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,Kpn)的方法并进行初步应用。方法:基于Kpn phoE基因设计4条特异性引物,对反应条件中的Mg^2+和甜菜碱浓度进行优化,建立检测Kpn LAMP方法并进行特异性和灵敏度试验;收集308例呼吸道感染患者痰液样本,进行细菌培养法、LAMP法、DNA测序技术检测,评估LAMP检测体系。结果:8 mmol/L、0.4 mmol/L确定为Mg^2+和甜菜碱的最佳扩增浓度;该体系特异性强,与其他菌株无交叉反应,灵敏度为104 CFU/mL;临床样本中Kpn的LAMP检出率(53.89%)高于培养法(42.20%),差异有统计学意义(χ^2=161.65,P<0.05);LAMP法与细菌培养法在Kpn阳性样本、无细菌生长样本、非Kpn其他细菌阳性样本中的一致率分别为96.15%、100%、65.25%,46例不一致样本经DNA测序验证,LAMP法与测序符合率为86.95%(40/46);LAMP法和DNA测序法对131例样本同时进行检测,经Kappa检验两者具有极好的一致性(Kappa系数=0.817)。结论:与细菌培养法相比,LAMP法具有准确性高、灵敏度高、特异性强、反应省时等优势,可以作为肺炎克雷伯菌的快速检测方法。