GPR30激活后下调P53-PUMA信号抑制全脑缺血诱导的海马神经元线粒体凋亡途径

目的 采用GPR30特异激动剂、拮抗剂作为工具药,已证实GPR30激活具有抗神经炎症和抗凋亡作用.但具体机制尚不清楚.文章旨在研究揭示G蛋白耦联雌激素受体30(GPR30)激活对脑缺血后海马CA1区神经元凋亡的作用并进一步阐明其对P53-PUMA信号的影响.方法 采用大鼠四动脉结扎全脑缺血模型,选择性诱导海马CA1区神...     

大鼠βB2-晶体蛋白的表达纯化及多克隆抗体的制备

目的表达并纯化βB2-晶体蛋白,制备其多克隆抗体,用以研究βB2-晶体蛋白聚合的机制。方法用RT-PCR的方法扩增了βB2-晶体蛋白的cDNA并克隆到原核表达载体pMON5473中。用萘啶酮酸诱导recA启动子后,蛋白质在大肠杆菌中得到了高效表达。表达的蛋白质用DEAE纤维素层析和凝胶过滤纯化,SDS-PAGE显示一条带。与佐剂混合后免疫新西兰大白兔。结果纯化了大鼠βB2-晶体蛋白,成功制备了其多克隆抗体。结论制备的多克隆抗体为下阶段的研究提供了重要的实验材料。     

βB2-晶体蛋白的克隆和在大肠杆菌中的高效表达和纯化

目的表达βＢ２－晶体蛋白，以研究其结构与功能的关系。方法用ＲＴ－ＰＣＲ的方法从大鼠晶状体中获得βＢ２－晶体蛋白的ｃＤＮＡ，将ｃＤＮＡ克隆到表达载体ｐＭＯＮ５７４３，转染Ｅ．ｃｏｌｉ菌株ＪＭ１０１，以萘啶酮酸诱导表达βＢ２－晶体蛋白，用ＤＥＡＥ纤维素层析纯化。结果ＲＴ－ＰＣＲ扩增获得约７００ｂｐ的ｃＤＮＡ，在Ｅ．ｃｏｌｉ中获得高效表达，βＢ２－晶体蛋白占细菌总蛋白的３０％。ＤＥＡＥ纯化后获一２４ｋＤ蛋白，分子量与βＢ２－晶体蛋白一致。结论βＢ２－晶体蛋白ｃＤＮＡ可在大肠杆菌中获高效表达，表达产物的分子量约２４ｋＤ。     

培氟沙星注射液和甲硝唑注射液的配伍实验

培氟沙星注射液和甲硝唑注射液的配伍实验姬怀雪王艳胡道德郭海贵胡书群（附属医院药剂科）（生物化学教研室）关键词培氟沙星甲硝唑配伍中图法分类号Ｒ９６９．３甲硝唑是一种广谱抗厌氧菌药，培氟沙星是第３代喹诺酮中的优良品种，抗菌谱广。临床上常将其两种注射液分别...     

miRNA-1246通过NF-κB介导乳腺癌细胞紫杉醇耐药的机制研究

目的探讨微小RNA-1246(miR-1246)在乳腺癌细胞紫杉醇(PTX)耐药中的作用及相关机制。方法以SK-BR-3细胞构建PTX耐药乳腺癌细胞SK-BR-3/PTX作为SK-BR-3/PTX组,以正常SK-BR-3细胞作为SK-BR-3组;CCK-8实验检测两组细胞活力并计算凋亡指数;RTFQ-PCR检测miR-1246表达水平;免疫荧光实验和Western blot法检测P-gp蛋白表达。SK-BR-3/PTX细胞转染miR-1246 inhibitor和阴性对照(NC)inhibitor,分别设为miR-1246 inhibitor组和NC inhibitor组;Western blot法检测p-NF-κB p65、IκBα和P-gp蛋白表达。PTX处理miR-1246 inhibitor组和NC inhibitor组,流式细胞术检测细胞凋亡。结果成功构建PTX耐药乳腺癌细胞SK-BR-3/PTX,耐药指数为51.3。与SK-BR-3细胞相比,SK-BR-3/PTX细胞miR-1246表达水平显著升高(P<0.01),P-gp和p-NF-κB p65蛋白显著上调,IκBα蛋白明显下调(P<0.01),细胞核中NF-κB p65蛋白显著上调(P<0.01)。转染miR-1246 inhibitor可逆转SK-BR-3/PTX细胞上述蛋白表达变化(P<0.01)。miR-1246 inhibitor还可显著增强PTX诱导的SK-BR-3/PTX细胞凋亡(P<0.01)。结论miR-1246可能通过NF-κB信号通路诱导P-gp蛋白表达上调,从而诱导乳腺癌SK-BR-3细胞PTX耐药。     

PDZ1-腺病毒重组体的构建及其对KA诱导的海马神经元凋亡的拮抗作用

目的构建PSD-95结构域PDZ1与腺病毒重组体并观察其对海人藻酸(KA)诱导的海马神经元凋亡的作用。方法采用RT-PCR法获得PDZ1的cDNA;与腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV用T4 DNA连接酶连接;连接产物与骨架载体pAdEasy-1共转染至原核包装细胞BJ5183;将原核重组体用脂质体转入真核包装细胞293H;纯化包装后的病毒颗粒并测定其滴度;腺病毒感染培养的海马神经元,加入KA,用DAPI染色后荧光显微镜观察细胞凋亡;用流式细胞仪定量分析细胞凋亡率。结果①经RT-PCR得到了PDZ1的cDNA;②电泳鉴定得到原核重组体;③得到包装完整的具感染能力的病毒颗粒;④纯化的病毒颗粒滴度为1.08×109ifu/mL⑤病毒表达的PDZ1使KA诱导的海马神经元凋亡数量减少(P<0.05)。结论获得了能表达PDZ1-GFP的病毒颗粒,并且PDZ1过表达能拮抗KA诱导的海马神经元凋亡。     

大鼠FasL基因克隆及重组慢病毒载体pLO134-FasL的构建

目的 克隆大鼠FasL基因全长序列,构建其用于真核细胞表达的重组慢病毒载体pLO134-FasL,为进一步研究FasL蛋白生物学功能奠定基础.方法 根据大鼠FasL cDNA序列设计合成上、下游引物,以大鼠脾细胞提取的总RNA为模板,行RT-PCR扩增.扩增片断经限制性内切酶BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后,插入慢病毒载体pLO134中并转化感受态细胞JM101.扩增后酶切鉴定,对正确的阳性克隆行DNA全序列分析.结果 RT-PCR扩增获得870 bp DNA片段,DNA序列分析结果与发表于GenBank上的序列（U03470）完全一致.结论 成功克隆大鼠FasL基因并构建其用于真核细胞表达的重组慢病毒载体pLO134-FasL.     

知母等40种中药对猪晶体醛糖还原酶的抑制作用

醛糖还原酶（ＡＲ）在糖性白内障和其它糖尿病并发症的发病中起着关键性的作用。为从大量中草药及其化学成份中筛选有效低毒的醛糖还原酶抑制剂（ＡＲＩ），建立了猪晶状体ＡＲ的测定方法，其研究了知母等４０种中药水提取液对ＡＲ的抑制作用。发现知母对ＡＲ有较强的抑制作用，其ＩＣ５０为１９ｍｇ／Ｌ。     

海人藻酸诱导大鼠海马CA1区Procaspase3巯基去亚硝基化机制的研究

目的：探讨海人藻酸（Kainic acid, KA）注射诱导大鼠海马CA1区半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3酶原（cysteine aspartate-specific proteasezymogen,Procaspase3）巯基去亚硝基化的机制。方法：将SD大鼠随机分为假手术组（sham组）、KA注射组（KA组）、给药组（NS102组,DNCB组,GSNO组）及溶剂对照组（生理盐水组,DMSO组）。采用KA侧脑室注射构建大鼠癫痫模型。运用生物素转化法检测蛋白质巯基亚硝基化,聚丙烯酰胺凝胶电泳、免疫印迹方法对Procaspase3巯基去亚硝基化进行分析,焦油紫染色法观察大鼠成活海马神经元的数量。结果：与sham组相比,KA组Procaspase3巯基亚硝基化水平明显降低,与KA组相比,NS102组、DNCB组和GSNO组Procaspase3巯基亚硝基化水平显著上升,差异均有统计学意义（P<0.05）,但DMSO组和生理盐水组差异无统计学意义。说明注射浓度为0.6 μg/10μL的KA能够诱导大鼠海马CA1区Procaspase3巯基去亚硝基化;KA通过激活KA受体导致大鼠海马CA1区Procaspase3巯基去亚硝基化,KA受体抑制剂NS102能够抑制Procaspase3巯基去亚硝基化;TrxR参与调节KA诱导的大鼠海马CA1区Procaspase3巯基去亚硝基化;外源性NO供体能够抑制Procaspase3巯基去亚硝基化。焦油紫染色结果显示,与KA组相比,NS102组、DNCB组和GSNO组神经元损伤降低。结论：KA注射通过激活KA受体诱导大鼠海马CA1区Procaspase3巯基去亚硝基化,Procaspase3巯基去亚硝基化受TrxR和外源性NO调节,抑制Procaspase3巯基去亚硝基化对海马神经元具有保护作用。     

黄色素抑制血管平滑肌细胞增殖与3种蛋白激酶的关系

目的：研究黄色素(SY)对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的作用及机制。方法：以培养的家兔VSMC为材料,用细胞计数和³²P-参入法,观察SY对VSMC的增殖及3种蛋白激酶活性。结果：SY抑制VSMC的增殖,且呈剂量和时间依赖性,1.0 mg.mL^-1作用最强,抑制率为54.6%; SY抑制VSMC的DNA合成,1.0 mg.mL^-1作用2 d,抑制率为80.2%;在一定浓度范围内,随着SY浓度的升高,VSMC中3种蛋白激酶(TPK,PKC及MAPK)活性下降。结论：SY对VSMC的增殖有抑制作用,可能是通过抑制TPK和PKC依赖的MAPK信号传导途径而发挥作用。