膀胱癌表达谱的全基因组芯片检测及易感标志基因的筛选研究

目的 采用70mer全基因组寡核苷酸基因芯片研究膀胱癌基因表达谱,获得差异基因并筛选出膀胱癌特异的肿瘤易感标志基因.方法 取正常膀胱移行上皮、肌层浸润性(T2以上)膀胱癌组织各10例,抽提mRNA逆转录成cDNA后,再反转录成cRNA并标记后,与70 mer oligo全基因组基因芯片杂交,洗脱,扫描及数据分析,采用Cluster及Trecvicw等统计分析软件比较正常膀胱移行上皮与膀胱癌组织基因表达谱差异,获得差异基因及其表达差异水平.进一步采用Panther数据库检索差异基因在各信号通路中的存在情况,初步阐述浸润性膀胱癌发生的可能的分子机制,筇选出膀胱癌特异的肿瘤标志基因.结果 在19 568个探针的全基因组芯片上,发现膀胱癌基因表达谱共同差异表达基因152个,其中表达上调的基因70个(膀胱癌中上调10倍以上的29个),与肿瘤发生明确相关的基因23个;下调基因81个(膀胱癌中下调10倍以上的16个),与肿瘤发生明确相关的基因17个;通过Panther数据库检索,发现上调基因涉及32条信号通路,下调基因涉及38条信号通路,其中部分信号通路已被证实与肿瘤发生密切相关.结论 采用70met oligo全基因组基因芯片分析膀胱癌基因表达谱,获得的差异表达基因及膀胱癌标志基因,对膀胱癌发生机理阐明、早期诊断以及人群基因易感性预测的前瞻性研究具有重要意义.     

溶剂解吸-气相色谱法同时测定工作场所空气中糠醇和糠醛

目的 建立用GDX-501采样,丙酮解吸-气相色谱法同时测定工作场所空气中糠醇和糠醛的快速检测方法.方法 空气中糠醇和糠醛用GDX-501采样,丙酮解吸,FFAP毛细管柱(HP-FFAP 30 m×0.320 mm,0.25 μm)分离,氢火焰离子化检测器测定,在进样口和检测器温度为200℃、220℃;柱温为140℃的...     

胚胎植入前遗传学诊断的研究进展

自从1990年首例植入前遗传学诊断（PGD）应用于临床以来，这项技术在多个临床生殖中心迅速的开展起来，对于辅助生殖技术（ART）产生了巨大影响，这主要得益于人类对遗传性疾病认识的深入和分子诊断技术的不断提高，综述了这些遗传学检测技术的新进展，并对存在的问题和发展的前景做了进一步的阐述和展望。     

B型链球菌数量感应通路测定及LuxS缺失突变株的构建

目的对GBS中可能存在的AI-2数量感应通路进行测定，构建数量感应相关分子LuxS缺失突变株并对其基因型进行确认。方法培养GBS至不同D（λ）值．利用V．harveyi BB170作为报告菌株，对GBS诱导生物发光的能力进行测定，然后寻找GBS中LuxS同源基岗，通过同源重组法在GBS中构建LuxS缺失突变株，Southern杂交分析确证。结果GBS中的某种分泌成份可在报告菌株中诱导生物发光活性，提示GBS中存在AI-2数量感应通路，在GBS中发现了LuxS同源基因并成功地构建了LuxS缺失突变株。结论本研究为探索LuxS在GBS中AI-2数量感应通路中的重要性及GBS毒力研究建立了细菌模型     

医学院校研究生分子生物学实验教学改革探讨

结合南方医科大学分子生物学实验课程教学改革的实践,从课程内容的设置、教学方法的丰富、考核办法的改革等方面进行了总结和探讨,有助于分子生物学实验教学迈上一个新台阶.     

应用基因芯片技术研究成年男性精子的基因表达

目的:初步研究健康成人精子中基因的表达情况。方法:收集成年男性活力正常的精子,提取总RNA,以健康成人淋巴细胞总RNA作对照。两组RNA逆转录为cDNA之后,cDNA经酶切、加接头后进行RD扩增,在扩增同时分别掺入Cy3(精子)和Cy5(淋巴细胞)荧光染料标记,标记样品与自制的精子基因表达谱芯片杂交。结果:检测发现在560个基因片段中,有72个基因表达上调,321个基因表达下调,另外167个基因表达无差异。其中与基因复制、转录、翻译及调控等相关的基因表达基本属于无差异表达类型或低表达类型,而与精子发生相关的基因、精子本身的特异性抗原等基因显著高表达,精子中糖酵解相关基因表达上调,而与氧化磷酸化相关的基因则表达下调。结论:在健康成人精子中有丰富的基因表达,而且基因的表达与精子自身的功能和特点相一致。     

B型链球菌数量感应通路测定及LuxS缺失突变株的构建

目的 对GBS中可能存在的AI-2数量感应通路进行测定,构建数量感应相关分子LuxS缺失突变株并对其基因型进行确认。方法 培养GBS至不同D(λ)值,利用V.harveyi BB170作为报告菌株,对GBS诱导生物发光的能力进行测定,然后寻找GBS中LuxS同源基因,通过同源重组法在GBS中构建LuxS缺失突变株,Southern杂交分析确证。结果 GBS中的某种分泌成份可在报告菌株中诱导生物发光活性,提示GBS中存在AI-2数量感应通路,在GBS中发现了LuxS同源基因并成功地构建了LuxS缺失突变株。结论 本研究为探索LuxS在GBS中AI-2数量感应通路中的重要性及GBS毒力研究建立了细菌模型。     

应用RNA干扰技术抑制K562细胞BCR-ABL基因表达及诱导细胞凋亡

目的运用RNAi技术,设计针对BCR-ABL基因融合位点的。iRNAs,研究其干扰后细胞变化。方法针对BCR-ABL基因的融合位点设计siRNAs,用脂质体法转染K562细胞,进行MTY法、RT-PCR及流式细胞仪检测,观察其干扰效果。结果转染组与对照组相比细胞增殖减少,BCR-ABL mRNA表达量降低,并有明显的细胞凋亡。结论运用RNAi技术,可以有效地抑制BCR-ABL的表达,诱导细胞凋亡,为白血病的分子机制研究和基因治疗奠定基础。     

E3 泛素连接酶HERC4在乳腺癌中的表达及临床意义

目的研究HERC4在人乳腺癌组织中的表达,探讨其与乳腺癌临床特征的相关性。方法RT-qPCR法检测67例乳腺癌组
织及配对癌旁乳腺组织标本中HERC4的mRNA表达水平;Western blot和免疫组化法检测67例乳腺癌组织及配对癌旁乳腺组
织标本中HERC4的蛋白表达水平。结果RT-qPCR结果显示HERC4的mRNA的表达水平在乳腺癌组织中较癌旁乳腺组织高
（P<0.05）。Western blot结果显示HERC4蛋白在乳腺癌组织中高表达（P<0.05）。免疫组化结果表明HERC4主要在细胞质中
表达。乳腺癌组织中HERC4阳性表达率为61.2%,癌旁乳腺组织阳性表达率为19.4%。HERC4的表达与乳腺癌TNM分期和
组织学分级密切相关（P<0.05）。结论HERC4与乳腺癌的发生和发展存在相关关系,并有可能作为乳腺癌早期诊断标志物和
治疗靶点。
     

浸润性膀胱癌差异基因的互作网络分析及验证研究

目的 采用蛋白互作网络分析研究表达谱基因芯片数据,构建浸润性膀胱癌基因互作网络图并对筛选出的网络中心节点进行实验验证.方法 将表达谱芯片筛选到的浸润性膀胱癌152个共同差异表达基因,导入STRING在线数据库进行分析,绘制差异基因瓦作网络图,并将瓦作网络数据导出到Cytoscape 2.6.2软件中,筛选出网络中心节点.采用KEGG数据库等进行信号通路分类及基因功能研究,进而采用实时定量RT-PCR对其基因表达进行验证,筛选出基因表达在膀胱癌组与正常膀胱粘膜组差异最大的基因,并对浸润性膀胱癌发生的分子机制进行初步探讨.结果 共有103个膀胱癌共同差异表达基因编码的蛋白经STRING筛选存在相互作用.并构成一个复杂的互作网络图;Cytoscape共筛选出26个网络中心节点,广泛参与肿瘤发生的多条信号通路;实时定量RT-PCR结果表明UBE2C、VEGF、TGFBR2、CAV1四个基因表达量在膀胱癌组与正常膀胱粘膜组的差异最大,分别为9.45、4.17、0.13、0.18倍(以GAPHD作为内参,计算2-△△α),与芯片检测结果的趋势一致.结论 本研究构建出的浸润性膀胱癌差异基因互作网络图,尤其是其中的网络中心节点基因,对于浸润性膀胱癌发生分子机制的研究、早期诊断及分子靶向治疗研究具有较好的提示作用.