两种限制性标记方法提高基因芯片杂交结果的信噪比

目的 研究采用荧光标记的通用引物扩增或在扩增中掺人荧光标记dNTP两种限制性荧光标记方法标记探针对提高表达谱基因芯片杂交结果信噪比的作用。方法 酵母mRNA经常规逆转录标记方法及两种限制性标记方法进行标记，探针纯化后与酵母表达谱基因芯片进行杂交，在同等条件下进行杂交后清洗和芯片扫描检测。结果 两种限制性标记方法与直接逆转录标记相比杂交结果背景低，信噪比及灵敏度高，其中以荧光标记的通用引物扩增效果最佳。结论 采用限制性标记方法后杂交结果信噪比提高，有利于基因芯片技术的应用。     

探针的纯化与否对基因芯片重复利用的影响

目的观察探针的纯度对基因芯片重复利用的影响。方法将探针分为未纯化、纯化两部分并分别与基因芯片杂交,扫描芯片后,用探针剥脱液洗涤芯片;同等条件成像后,进行下一轮杂交。结果未纯化的探针杂交结果背景高,阳性信号界限不清楚;经探针剥脱液洗涤后,仍留有较高强度的背景和原与靶基因片段杂交的阳性信号,即使洗脱4次后,仍有背景和阳性信号存在。纯化的探针杂交结果显示背景低,一般经2次探针剥脱液洗过后,可以完全去除信号并进行下一轮杂交。结论未纯化的探针与基因芯片杂交后,此芯片不能应用于下一轮的杂交;而纯化的探针杂交后,芯片可以再次利用。由此说明探针的纯化是基因芯片重复利用的前提条件。     

应用PCR快速制备乙型、丁型肝炎病毒诊断基因芯片探针

目的 应用PCR技术扩增乙型、丁型肝炎病毒保守区域基因片段，并进行克隆、测序分析，制备联合诊断乙型、丁型肝炎病毒基因芯片探针。方法 利用Olig06．4软件分别针对乙型、丁型肝炎病毒基因保守区域设计PCR引物，纯化PCR扩增产物，扩增后的产物克隆至pMDl8-T载体并进行快速鉴定，提取阳性克隆质粒进行测序分析及鉴定。结果 获得多个乙型、丁型肝炎特异性基因片段。序列分析表明，所扩增的片段均属于乙型、丁型肝炎病毒特异基因。结论 利用PCR扩增产物制备基因芯片探针是一种快速、简便的实用方法。     

基因芯片中60 mer寡核苷酸SARS冠状病毒探针的制备

目的用合成仪合成60 mer寡核苷酸SARS冠状病毒的探针来制作寡核苷酸基因芯片.方法根据寡核苷酸探针的制作要求,选取SARS冠状病毒的特异序列30条、长度为60 mer的片段进行合成,并对合成后的纯化方法与条件进行探索.将经12%变性PAGE胶纯化后的探针直接点样制备成12×12阵列的寡核苷酸的基因芯片,初步与处理后的临床样品进行杂交.结果经PAGE纯化的寡核苷酸探针的纯度高,能满足寡核苷酸芯片制备的要求.临床SARS患者标本进行处理后与寡核苷酸芯片杂交、扫描检测,效果较好.结论该室合成的60 mer的寡核苷酸SARS冠状病毒探针能用于基因芯片的制备与检测,这为该疾病的实验室诊断提供了一种快速、平行的检测方法.     

microRNA与肿瘤细胞周期的关系及其研究方法进展

 研究发现,某些miRNAs与细胞周期调控有关,它们可以通过靶向E2F、Cdks、cyclins、CKI等促进或阻滞细胞周期的关键调节因子,进而调控细胞周期,并且这种由miRNAs介导的细胞周期调控方式与恶性肿瘤的发生发展密切相关。本综述主要介绍miRNA与肿瘤细胞周期的关系及其研究策略。     

颞叶癫痫相关基因的生物信息学分析

目的从分子水平揭示癫痫的发病机制,为癫痫的基础研究和临床治疗提供新思路。方法从基因芯片公共数据库GEO中下载癫痫相关基因芯片数据,利用String、KEGG、Panther等在线分析软件对差异表达基因进行生物信息学分析。结果在71个差异表达基因所编码的蛋白中,有51个存在蛋白与蛋白的相互作用关系;其涉及的主要生物学通路包括刺激神经的配体-受体相互作用通路、促分裂原活化蛋白激酶信号通路、钙信号通路等。结论通过生物信息学分析癫痫相关基因芯片数据,提示癫痫发病是多种基因作用的结果,对相关基因的进一步分析有利于揭示癫痫的发病机制。     

一种新的基因芯片检测荧光标记技术:通用引物U2联合标记法

目的报告一种新的基因芯片荧光标记技术:通用引物U2联合标记技术(universal primer U2 labeling ,UPL);比较UPL与随机引物等其他标记方法的效率和可重复性。方法流感病毒RNA用四种标记方法处理后与流感病毒寡核苷酸检测芯片杂交,用Spss10.0对杂交结果进行分析。结果UPL方法在标记物杂交的荧光强度、信噪比、探针真阳性率和可重复性等方面均高于随机引物逆转录掺入标记法,而与其他两种RD标记方法相当,但标记过程相对更加简单。结论UPL方法可用于基因芯片研究和应用。     

应用PCR快速制备乙型、丁型肝炎病毒诊断基因芯片探针

目的应用PCR技术扩增乙型、丁型肝炎病毒保守区域基因片段,并进行克隆、测序分析,制备联合诊断乙型、丁型肝炎病毒基因芯片探针。方法利用Oligo6.4软件分别针对乙型、丁型肝炎病毒基因保守区域设计PCR引物,纯化PCR扩增产物,扩增后的产物克隆至pMD18-T载体并进行快速鉴定,提取阳性克隆质粒进行测序分析及鉴定。结果获得多个乙型、丁型肝炎特异性基因片段。序列分析表明,所扩增的片段均属于乙型、丁型肝炎病毒特异基因。结论利用PCR扩增产物制备基因芯片探针是一种快速、简便的实用方法。     

最新分子细胞生物学方法与技术研究进展

分子细胞生物学是从20世纪60年代迅速发展起来的一门新兴学科,通过对细胞核以及细胞质内的各种超微结构及其功能更为直观的认识,尤其是从分子水平上对其进行深入的探讨,使得分子细胞生物学日臻完善,并且也成为研究生命科学的重要技术.在医学研究领域,体细胞核移植、干细胞定向诱导分化、细胞重编程(特别是诱导性多潜能干细胞技术)的研究为我们制备体外疾病模型、研究疾病发生机制、寻求细胞及组织移植的新材料方面提供了重要的技术支撑.     

胚胎植入前遗传学诊断的研究进展

自从1990年首例植入前遗传学诊断(PGD)应用于临床以来,这项技术在多个临床生殖中心迅速的开展起来,对于辅助生殖技术(ART)产生了巨大影响,这主要得益于人类对遗传性疾病认识的深入和分子诊断技术的不断提高,综述了这些遗传学检测技术的新进展,并对存在的问题和发展的前景做了进一步的阐述和展望。