苯噻啶对人肺腺癌细胞增殖、迁移与侵袭能力的影响

目的 观察不同浓度苯噻啶(Pizotifen)对人肺腺癌A549和PC9细胞增殖、迁移与侵袭能力的影响,并初步探究其机制。方法 取对数生长期的A549和PC9细胞,分为对照组(细胞对照组为培养基直接作用于细胞,溶剂对照组为含有0.1%DMSO的培养基作用于细胞)和实验组(浓度分别为10、20、30、40μmol/L的苯噻啶作用于细胞)。CCK-8法检测人肺腺癌细胞的增殖能力,划痕实验和Transwell迁移实验检测其迁移能力,Transwell侵袭实验检测其侵袭能力,ELISA法检测Wnt3a/β-catenin信号通路蛋白、上皮-间质转化(EMT)相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cad)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达水平。结果 与溶剂对照组相比：CCK-8结果显示,实验组A549和PC9细胞活力降低,出现不同程度的增殖抑制现象,在20、30、40μmol/L浓度组有一定的时间依赖性(P<0.05);划痕实验结果表明,实验组划痕愈合率小于对照组,苯噻啶浓度越高,划痕愈合率越低(P<0.05);Transwell迁移和侵袭实验结果显示,实验组穿过小室的肺腺癌细胞数量明显低...     

14-3-3蛋白在神经退行性变疾病诊断中的应用

14-3-3蛋白是分布十分广泛的真核生物蛋白质。在脑组织中含量丰富。哺乳动物中，14-3-3蛋白主要包括7个亚型，在体内发挥诸多重要的生物学功能。目前，14-3-3蛋白检测主要用于对克一雅病(CJD)的辅助诊断。14-3-3蛋白也可在一些其他的神经系统退行性变疾病中检出，如某些病毒性脑炎、急性脑梗塞、中风等。随着针对14-3-3蛋白各亚型抗体的制备以及14-3-3蛋白检测技术的改进，为神经退行性变疾病之间的鉴别诊断提供了可能，同时也为进一步研究14-3-3蛋白的作用机制提供了有效的手段。     

基于2-DE和蛋白质组技术筛选的日本血吸虫鸟氨酸氨基转移酶的表达及其诊断应用

目的扩增并表达日本血吸虫鸟氨酸氨基转移酶（SjOAT）,评价其在日本血吸虫病免疫诊断中的应用价值。方法构建pET28a／sjOAT质粒,转化至E．coli BL21,IPTG诱导表达;应用Ni^2＋亲和层析法纯化OAT;SDS-PAGE和Western blot分析、鉴定表达产物;应用ELISA法检测待检患者血清,比较SjOAT与日本血吸虫可溶性虫卵抗原（SEA）对血吸虫和其它寄生虫感染的检测结果。结果成功克隆表达了SjOAT,Western blot检测结果表明rSjOAT能被血吸虫病患者血清识别;以rSjOAT—ELISA和町SEA—ELISA分别检测急／慢性血吸虫病患者和其它寄生虫感染者血清的结果经校正χ^2检验,差异无统计学意义（P〉0．05）;对于正常对照者血清和疫区粪检阴性者血清,两种检测方法的特异性比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论rSjOAT在体外获得表达,用于诊断人血吸虫病具有高度敏感性和特异性。     

干血滤纸片试剂盒和水煮法提取间日疟原虫DNA用于PCR检测的比较

目的：比较水煮法和干血滤纸片基因组DNA分离试剂盒提取间日疟原虫DNA用于PCR检测及克隆研究的差异。方法：采集间日疟患者末梢血制备干血滤纸片,分别用水煮法和QIAamp DNAmini kit试剂盒提取间日疟原虫基因组DNA10份。PCR扩增LDH基因,并克隆质粒pGEM-PvLDH。分析比较2种提取方法的差异。结果：水煮法和试剂盒法提取的间日疟原虫gDNA,均扩增出LDH基因特异条带,但试剂盒提取的gDNA目的条带亮于水煮法。结论：水煮法操作简便、快速、经济,在等量血源条件下,所得DNA量较少、纯度较低;试剂盒提取可获得较高的得率,在定量检测和复合扩增时受到的影响因素较少,成功率较高。     

富血小板血浆的三次离心法制备及其对脂肪干细胞增殖、成骨矿化的影响

目的 探索高效制备富血小板血浆(PRP)的方法,并观察不同体积分数的PRP对Beagle犬脂肪干细胞(ADSC)体外增殖及其向成骨细胞分化的影响.方法 抽取3只Beagle犬静脉血各40 mL,分别用传统的二次离心法和改良的三次离心法制备PRP,进行血小板计数分析.分别将体积分数为5%、100k、15%、20%的PRP...     

肺炎克雷伯菌产ESBLs的检测及耐药性分析

目的了解临床分离的肺炎克雷伯菌产ESBLs情况及耐药性,为临床合理使用抗生素提供依据。方法用VITEK-32细菌鉴定及药敏分析仪对2009年1月-2010年10月临床送检标本中分离出的124株肺炎克雷伯菌进行鉴定及药敏试验,同时用仪器法和双纸片协同试验检测ESBLs。结果肺炎克雷伯菌在重症监护病房(ICU)、感染科检出率分别为17.74%、7.26%;感染部位以呼吸道为主,占37.90%。124株肺炎克雷伯菌共检出ESBLs阳性42株,阳性率为33.87%。产酶和不产酶菌株对氨苄西林均耐药(100%),而对亚胺培南敏感性较高,达89.42%。对其它抗生素的耐药率,产酶菌株均不同程度地高于非产酶菌株,尤其对头孢曲松、头孢他啶、头孢吡肟等头孢类抗生素均耐药。结论 ESBLs是肺炎克雷伯菌对β-内酰胺类抗生素耐药机制之一,产酶菌耐药率较非产酶菌耐药率高,应加强ESBLs的检测。     

日本血吸虫重组信号蛋白14-3-3对日本血吸虫病的诊断价值

目的 探讨纯化的日本血吸虫(中国大陆株)重组信号蛋白14—3—3(rSjl4—3—3)诊断血吸虫病的价值。方法 利用纯化的rSjl4—3—3抗原与成虫抗原，间接EUSA法检测急、慢性日本血吸虫病患者血清。结果 急、慢性血吸虫患者血清rSjl4—3—3抗体检出率为100％和92．0％，与正常人血清未出现交叉反应；抗AWA抗体检出率为98．0％和94．0％，与正常人有7．3％的交叉反应。结论 rSjl4—3—3为抗原诊断日本血吸虫病显示出高度的敏感性和特异性，具有实用价值。     

大鼠CD4~＋CD25-T细胞的Foxp3基因转染及其表达

背景：调节性T细胞在维持机体免疫应答稳态和免疫耐受方面具有非常重要的作用,但外周血中CD4＋CD25＋调节性T细胞含量极低,且增殖能力较差。目的：以携带Foxp3基因的慢病毒EGFP＋载体转染大鼠CD4＋CD25-T细胞,观察其在大鼠CD4＋CD25-T细胞中的表达。方法：以免疫磁珠两步法分选大鼠CD4＋CD25-T细胞,用携带大鼠Foxp3基因的慢病毒载体体外转染分选的细胞,以转染Foxp3基因的CD4＋CD25-T细胞为实验组,EGFP空白质粒组及CD4＋CD25-T细胞为阴性对照组,CD4＋CD25＋T细胞为阳性对照组。荧光显微镜和RT-PCR分别从蛋白和mRNA水平检测Foxp3基因的表达。结果与结论：成功完成了免疫磁珠的分选,获得了纯度较高的CD4＋CD25-T细胞和CD4＋CD25＋T细胞,细胞存活率为（94±2）%,慢病毒转染的CD4＋CD25-T细胞高表达Foxp3基因。表明以携带Foxp3基因的慢病毒载体系统可有效介导Foxp3基因在大鼠CD4＋CD25-T细胞中高表达。