神经干细胞移植治疗小鼠机械性脑损伤的实验研究

目的探讨神经干细胞移植后的体内存活、增殖与分化,及其对小鼠机械性脑损伤的治疗作用。方法运用牙科钻制作小鼠运动区皮质机械性损伤模型。48只清洁级昆明小鼠,雌雄不拘,体质量为18～20g,按体质量编号随机分为4组:神经干细胞移植组(损伤后原位移植经鉴定确认的原代培养的小鼠神经干细胞)、3T3移植组(损伤后原位移植3T3细胞)、单纯损伤组(损伤后不行神经干细胞移植)和空白对照组(仅施行麻醉),每组12只小鼠。于伤后第3天进行行为学检测;第10、30天行损伤区脑组织nestin及NF200免疫荧光染色,观察神经干细胞生长、分化情况。结果损伤后,获得原代培养的神经干细胞在移植早期贴附于损伤区域且向周边组织呈浸润生长;移植后期Hoechst33342及NF200染色显示损伤区附近可见分化形成的神经元。单纯损伤组小鼠出现偏瘫症状;而神经干细胞移植组小鼠植入神经干细胞后则症状减轻,运动功能明显改善,与其他各组相比差异有显著性意义(P<0.001)。结论神经干细胞移植能够改善小鼠机械性脑损伤后的神经功能状态。     

纤溶酶原激活抑制因子1基因在人脑星形细胞瘤中的表达及意义

采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ分子杂交和ＡＢＣ免疫组化方法检测３６例人脑星形细胞瘤纤溶酶原激活抑制因１基因ｍＲＮＡ和蛋白表达，所有星形细胞瘤组织均可表达３．０ｋｂ和２．２ｋｂ的ＰＡＩ－１ ｍＲＮＡ转录物，高级别星形细胞瘤ＰＡＩ－１ ｍＲＮＡ表达水平显著高于低级别星形细胞瘤，ＰＡＩ－１display status     

脑室系统病变的立体定向手术治疗经验

脑立体定向技术在神经外科的使用范围不断扩大,近年来已用于处理脑重要功能区及深部病变。脑室系统先天异常或脑脊液分流等,手术精确,附加损伤小。我们从1994年5月至1997年3月采用计算机体层摄影(CT)脑立体定向手术治疗脑室系统病变20例,取得了较好效果。     

机械性损伤诱导体外培养皮层神经元Homer1蛋白表达及其意义

目的探讨体外培养皮层神经元机械性损伤后Homer1蛋白各亚型表达变化规律,阐明神经元损伤与Homer1基因表达的关系及意义。方法大鼠皮层神经元体外培养7d,以细小的微量移液器塑料滴头划割培养之神经元,造成机械性损伤。伤后不同时间点(10、30min、1、3、6、12、24、72h),裂解细胞,SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳,Westernblot法检测Homer1蛋白各亚型表达变化情况。对照组不进行机械性划割,其他处理同损伤组。结果Homer1a蛋白相对分子质量为28×103,对照组无Homer1a表达,机械性损伤后10min,Homer1a少量表达,伤后30min起,Homer1a表达明显增加,一直持续至伤后72h。Homer1b/c蛋白相对分子质量为47×103,损伤前后Homer1b/c表达量无明显变化。结论微量移液器塑料滴头划割造成培养之皮层神经元机械性损伤,创伤刺激诱导神经元Homer1a表达量迅速增加,而损伤前后Homer1b/c表达量无明显变化。Homer1a表达呈动态变化,与Homer1b/c共同调节第I组代谢型谷氨酸受体的功能。     

胶质瘤细胞系对γ射线辐射敏感性实验研究

目的:探讨γ射线杀伤胶质瘤细胞的剂量-效应关系、时间-效应关系和杀伤作用的机制,比较两种不同种属来源的胶质瘤细胞系对γ射线照射的敏感性.方法:以胶质瘤细胞系C6和SHG-44为实验对象,应用60Co放射源产生的γ射线行单次照射,设对照组、4 Gy,8Gy,16 Gy,32 Gy和64Gy组.照射后光镜下观察细胞形态改变并进行细胞凋亡检测,流式细胞术测定照射后不同时间和不同剂量照射时瘤细胞坏死、凋亡和存活的比例.结果:照射后24 h,32 Gy和64Gy组两种细胞均可见多数细胞出现明显的类似凋亡的细胞形态学改变,Hoechst33342染色可见细胞核呈致密浓染.随着照射后观察时间的延长,两种细胞的凋亡率逐渐提高,6 h后各时间点细胞凋亡率均高于对照组,差异有非常显著性(P＜0.01).两种细胞在照射后48 h凋亡率与48 h前各时间点相比明显增高,差异有非常显著性(P＜0.01).48 h后各个时间点的凋亡率与48 h相比,无显著差异(P＞0.05).随着照射剂量的增加,照后48 h两种细胞凋亡率均逐渐增高,与对照组相比差异有非常显著性(P＜0.01),但32Gy以上剂量照射后细胞凋亡率趋于稳定.在各种照射剂量下两种胶质瘤细胞坏死率与对照组相比均无显著差异(P＞0.05).SHG-44细胞与C6细胞相比,在吸收剂量为4 Gy、32 Gy和64Gy时凋亡率较高,有非常显著差异(P＜0.01).结论:γ射线照射可以诱导体外培养的C6和SHG-44胶质瘤细胞发生凋亡.细胞凋亡高峰出现在照射后48 h左右.随着剂量的增大,凋亡的比例增加,但凋亡率提高至一定的水平(50%左右),将照射剂量继续增加则不能引起凋亡率的明显提高.与C6细胞相比,SHG44细胞对γ射线更加敏感.     

重型颅脑损伤持续颅内压监护的意义

目的：研究颅脑损伤患者持续颅内压（ＩＣＰ）监护的价值．方法：对５０例重型颅脑损伤患者（ＧＣＳ３～８分）行ＩＣＰ连续监测，并与未作ＩＣＰ监测的对照组作对比研究．结果：监护组中４２例ＩＣＰ有不同程度增高，其原因为颅内血肿、广泛性脑挫裂伤、脑水肿或脑肿胀等，经积极手术及综合治疗，效果良好，并发症较少，死亡率仅为１４％．而对照组并发症较多，死亡率为２８％．结论：重型颅脑损伤患者连续ＩＣＰ监护对减少并发症和死亡率，提高疗效有重要价值．     

缺血性二次脑损伤大鼠脑皮层第Ⅲ组mGluRs改变及意义

目的：研究弥漫性脑损伤（DBI）及其合并缺血性二次脑损伤（SBI）后大鼠脑皮层第Ⅲ组代谢型谷氨酸受体（mGluRs）各亚型变化及意义。方法：SD大鼠175只，随机分为正常对照、假手术、单纯脑缺血、单纯DBI及DBI合并SBI组。在Marmarou DBI模型基础上，制成缺血性SBI模型，伤后1，6，12，24，72和168h进行皮层mGluR4,6-8mRNA原位杂交。结果：脑损伤后mGluR6表达无明显变化（P＞0．05）；与假手术组相比，单纯DBI及合并缺血性SBI组mGluR4,mGluR7和mGluR4 mRNA转录在损伤1h后即有明显增加（P＜0．05）；单纯DBI组伤后6h达到高峰，7d后恢复正常；合并缺血性SBI组伤后6h还在增加，12h达到高峰，单纯DBI组和合并缺血性SBI组之间有显著差异（P＜0．05）。结论：mGluR4,mGluR7和mGluR8参与脑损伤及缺血性SBI脑损害过程，可利用第Ⅲ组mGluRs特异性激动剂治疗DBI及其合并SBI。     

小鼠神经干细胞中一氧化氮合酶的表达

目的：体外分离、培养和鉴定胎小鼠神经干细胞（NSC）并检测其一氧化氮合酶（NOS）的表达，为进一步阐明NOS在NSC中的作用奠定基础。方法：利用含EGF的条件培养基，从胚胎小鼠大脑皮层中分离并体外培养胎小鼠NSC，在含胎牛血清的培养基中诱导其分化；用充纯氮气的方法造成细胞缺氧，观察缺氧对NOS的诱导作用；免疫组织化学方法检测细胞中nestin,nNOS,eNOS和iNOS的表达。结果：原代培养的细胞具有连续增殖并形成克隆的能力，在含血清的培养基中能分化为神经元及神经胶质细胞样细胞；免疫组化nestin,nNOS和eNOS在一般培养条件下呈阳性表达，而iNOS呈阴性表达，经充氮气缺氧诱导后，iNOS呈阳性表达。结论：成功分离并培养小鼠NSC；发现不同亚型的NOS在NSC不同培养条件下有不同的表达。     

BALB/c小鼠C6脑胶质瘤模型的建立及生长特性观察

目的建立BALB/c小鼠C6脑胶质瘤模型,观察其生长特性.方法将体外培养的细胞数为1×103,1×104,5×104个分别悬浮于无血清DMEM培养液10μl中的C6胶质瘤细胞接种于BALB/c小鼠左顶枕区,观察不同C6细胞浓度实验鼠的生存状态及肿瘤生成率.对自然死亡荷瘤鼠行组织病理学和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫组织化学检查.另外,在实验3 d、6 d、9 d、12 d、15d、20 d时解剖实验鼠,对肿瘤体积进行统计测量.结果该方法建立的胶质瘤动物模型在组织病理学上接近人脑胶质瘤,且颅内生长稳定.3组成瘤率分别为65%、75%、80%.未见颅外转移病灶,实验周期短,重复性较好.结论BALB/c小鼠C6脑胶质瘤模型的肿瘤生长特性及病理特征与人脑胶质瘤相似,可作为临床胶质瘤基础研究的理想模型.     

大鼠二次脑损伤模型的建立

目的　建立弥漫性脑损伤 (ｄｉｆｆｕｓｅｂｒｉａｎｉｎｊｕｒｙ ,ＤＢＩ)合并缺血性二次脑损伤 (ｓｅｃｏｎｄａｒｙｂｒｉａｎｉｎｓｕｌｔ,ＳＢＩ)大鼠模型 .方法　在Ｍａｒｍａｒｏｕ模型基础上结扎双侧颈总动脉 3 0ｍｉｎ ,制成缺血性ＳＢＩ模型 ,观察大鼠神经损伤严重程度评分 (ＮＳＳ)、脑组织含水量及室上区皮层损伤神经元数改变 .结果　合并ＳＢＩ组大鼠死亡率 (48.1%)约为单纯ＤＢＩ组 (2 6.2 %)的 2倍 (Ｐ <0 .0 5 ) ;合并ＳＢＩ组在损伤 2 4ｈ后ＮＳＳ明显高于单纯ＤＢＩ组 (Ｐ <0 .0 5 ) ;单纯ＤＢＩ 1ｈ后脑含水量明显升高 ,…