pCD-rbFGF重组质粒的构建及其在成骨细胞中的表达

为了构建碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)真核表达质粒,并探讨应用bFGF基因治疗骨科各种疾患的可能性,将鼠碱性成纤维细胞生长因子cDNA克隆至真核表达载体pcDNA3中,构建了重组质粒pCD-rbFGF.通过Liofectin介导将pCD-rbFGF转染兔成骨细胞,经免疫组化检测证实兔成骨细胞获得了bFGF的瞬时表达.提示该bFGF真核表达质粒有效,可用于进一步基因治疗研究.     

儿童臀肌挛缩症免疫发病机理的研究

本文对４１例儿童臀肌挛缩症患者外周血及３２例儿童臀肌挛缩症臀肌进行了系统的免疫学研究。结果表明：儿童臀肌挛缩症患者免疫调节功能紊乱，红细胞免疫功能低下，臀肌组织免疫复合物沉积，臀肌小血管数目减少及管壁损伤。由此认为免疫病理因素是儿童臀肌挛缩症的主要发病机理。     

胎兔骨髓基质前成骨细胞的培养及鉴定

为了证实体外培养的胎兔骨髓基质骨祖细胞具有成骨细胞系特征。采用胎兔长管骨骨髓细胞 ,加入 DMEM培养 ,传代四代后 ,用活体相差显微镜、透射电镜、组织化学染色、免疫组化等方法进行观测。结果显示体外培养的基质细胞具有成骨细胞系特征。提示胎兔骨髓基质骨祖细胞 ,可以作为修复骨缺损的种子细胞。     

短发夹状RNA使骨肉瘤细胞缺氧诱导因子HIF-1α基因沉默

目的构建低氧诱导因子HIF-1α发夹状小干涉RNA真核表达载体，观察发夹状双链小干涉RNA对骨肉瘤细胞HIF-1的转录后的基因沉默效果?方法体外合成两对互补的寡核苷酸链，分别针对缺氧诱导因子HIF-1αmRNA序列的两个靶位点。退火形成双链，插入pSilencer^TM neoU62．1真核表达载体。将构建好的载体经脂质体介导转染骨肉瘤SaOS-2细胞，观察HIF-lα基因的沉默效果。半定量RT—PCR检测HIF-1αmRNA的抑制程度，免疫荧光和免疫印迹(Western Blot)检测HIF-1α蛋白表达情况。结果测序证实成功构建HIF-1α发夹状小干涉RNA真核表达载体。转录生成的发夹状小干涉能够特异抑制HIF-1α表达。RT—PCR结果显示针对HIF-1αmRNA序列的两个靶位点的沉默效果分别为69％和92％，免疫荧光显示转染后荧光强度显著降低，免疫印迹显示两个靶位点的发夹状小干涉RNA分别使HIF-1α蛋白表达下降66％和90％。结论通过体内转录生成的发夹状小干涉RNA能够使骨肉瘤细胞缺氧诱导因子HIF-1α基因沉默。     

同种异体交叉韧带移植和半腱半膜肌腱重建前交叉韧带的临床比较

有作者将异体和自体移植重建交叉韧带从组织活力、胶原形态学、抗拉力、稳定等方面进行研究,显示自体移植优点较多且无继发性损伤。Jackson等曾作了可行性同种异体韧带移植修复前交叉韧带的动物试验。本文作者将同种异体交叉韧带及半腱半膜肌修复交叉韧带进行了临床应用观察。     

Up-regulation of Niacinamide in Intervertebral Disc Aggrecan in vitro

The regulatory effects of niacinamide （Nia） on intervertebral disc （IVD） aggrecan in vitro was investigated. Chiba＇s 10 ng/mL interleukin-1 （IL-1）-induced rabbit IVD degeneration model in vitro was established. 0.5, 0. 25 and 0.05 mg/mL Nia was added to normal and degenerated IVDs for intervention. On the first and second week after intervention, safranin O-fast green staining intensity and glycosaminoglycan （GS） content were measured. The expression of aggrecan core protein was detected by RT-PCR. The results showed： （1） After treatment with 0. 5 mg/mL Nia for one week, the GS content in nucleus pulposus （NP） was increased by 44.80% as compared with control group （P〈0. 01） ; The GS content in IL-1 induction groups was increased with the increase of Nia concentrations： After treatment with 0. 5 mg/mL for one week, the GS content in NP was increased by 68.30% as compared with control group （P〈0. 01）. After two weeks, GS content in NP and fibrous rings was still higher than in control group at the same period （P〈0. 01） and untreated group （P〈0.01）. （2） Safranin O-fast green staining revealed that with the increase of Nia concentrations, staining density in NP and fibrous rings was increased and histological structure damage to IVDs by IL-1β was alleviated. （3） RT-PCR showed that the expression of core protein gene in IL-1β-induced degenerated IVDS was increased with the increase of Nia concentrations. It was concluded that under conditions in vitro, Nia could up-regulate the expression of aggrecan in IVDs and protect IVDs from IL-1β-induced degeneration at least partially, which offers a potential choice for IVD degeneration clinical therapy.     

组织蛋白酶K在骨关节炎软骨中的表达及作用

目的检测组织蛋白酶k(Cathepsin-k)在人骨关节炎软骨中的表达和分布,探讨组织蛋白酶k表达与骨性关节炎软骨退变之间的关系。方法收集正常组、早期及中晚期组软骨标本。免疫组化方法及逆转录PCR方法检测组织蛋白酶k在软骨中的表达及分布。结果组织蛋白酶k在OA软骨基质破坏区域周围巢聚软骨细胞表达明显增高,而正常软骨细胞仅有少量表达。早期及中晚期骨关节炎组软骨中组织蛋白酶K较正常组明显升高,差异具有显著性意义(P<0.05);在mRNA表达水平上,中晚期组较早期组有明显增高,差异具有显著性意义(P<0.05)。结论组织蛋白酶k与骨关节炎软骨退变关系密切,特别在早期发病中有重要作用。     

CT图像三维重建在骨肿瘤诊治中的应用探讨

目的探讨螺旋CTN学图像三维重建在骨肿瘤诊断中的价值及其对手术的指导意义。方法对128例骨肿瘤患者采用螺旋CT进行薄层扫描和三维重建进行诊断。CT扫描全部采用SiemensSOMATOMSensation16型多排高速螺旋CT机,1．0mm层厚。扫描所得断层资料通过网络传送至计算机工作站进行处理。采用Window．NT3．51平合上Insight三维重建软件进行三维重建。结果三维CT图像能够围绕X轴和Z轴任意旋转、切割以从不同角度观察,能够清晰显示骨肿瘤与周围组织结构的解剖形态特点。结论三维CT重建在骨肿瘤的诊断及手术方案的制订方面具有很大的临床应用价值,有助于骨肿瘤的立体定位和肿瘤破坏范围的正确评估,并为手术入路的设计、重建和内固定选择提供客观依据。     

PDTC抑制大鼠骨关节炎一氧化氮表达的实验研究

目的：观察核因子kappa B（NF-kappa B）抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）对大鼠骨关节炎一氧化氮表达的影响，探讨NF-kappaB抑制剂能否应用于骨关节炎的治疗。方法：通过前交叉韧带切断的方法制造大鼠骨关节炎（OA）动物模型，将大鼠动物模型分为实验组和对照组，于造模后每隔48h肌肉注射PDTC10mg／kg，对照组仅肌注生理盐水0．1ml，术后6周后处死大鼠，观察实验组和对照组一氧化氮的免疫组化染色，比较两组问有无差异。结果：实验组和对照组一氧化氮免疫组化染色阳性细胞分数分别为51．8±10．0和70．2±12．4，二者间差异有统计学意义。结论：NF-kappaB抑制剂能够抑制大鼠骨关节炎一氧化氮的表达，有潜在治疗骨关节炎的意义。     

三七总皂甙对大鼠脊髓损伤后iNOS表达及细胞凋亡的影响

目的探讨大鼠脊髓损伤后应用三七总皂甙对诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达及细胞凋亡的影响。方法采用Allen’s法将64,只成年SD大鼠造成脊髓中度损伤模型,再随机分为损伤组和三七总皂甙组,分别给予生理盐水及三七总皂甙注射液治疗,损伤后不同时间点(1、3、7、14d)处死大鼠,用HE染色观察损伤脊髓组织病理变化,用免疫组化染色检测iNOS阳性细胞,原位末端标记法(TUNEL法)标记凋亡细胞。结果HE染色镜检发现脊髓组织病理学改变三七总皂甙组明显轻于损伤组;两组均发现iNOS表达及凋亡细胞,且损伤组iNOS表达及神经细胞凋亡指数均高于三七总皂甙组(P<0．05)。结论三七总皂甙注射液能抑制脊髓损伤后iNOS表达及神经细胞凋亡。