血液核酸筛查室内质控品浓度选择的探讨

<正>献血者血液检测HBV、HCV和HIV病原体的核酸能有效缩短病原体感染性指标检测的窗口期,降低输血传播性疾病风险,提升血液安全[1～3]。目前我国采供血机构正在逐步推广血液核酸检测技术的应用,而在《血站技术操作规程     

一种新的B3变异型相关的B糖基转移酶基因M142T突变研究

目的 研究中国人个体ABO血型系统中具有混合外观凝集特征的B3变异型的分子遗传背景.方法 血型血清学方法鉴定2例ABO血型疑难样本的红细胞表型,应用连续凝集方法和13个短串联重复序列(short tandem repeat,STR)位点检测法,排除外源性或内源性DNA嵌合的可能.对ABO基因第6、7外显子和部分内含子进行聚合酶链反应和DNA序列分析,并进一步通过克隆测序法鉴定2个样本的ABO基因单倍型.结果 2个无关个体红细胞与抗-B和抗-AB发生混合外观凝集,连续凝集法和STR检测排除了样本的外源性DNA污染和内源性遗传嵌合子,根据血清学特征确定这2个个体红细胞均为A183血型.单倍型序列分析发现2个样本为A1B杂合子,其中B等位基因与B101相比,差异仅在第7外显子的425T>C错义突变,导致B糖基转移酶多肽链M142T替换.结论 在中国人群中发现一种新的可能导致B3变异型的ABO等位基因.     

浙江省汉族人群血小板同种抗原1—6基因频率的研究

目的：检测浙江省汉族人群中HPA1－6系统对偶抗原a,b基因频率的情况,方法：实验样本DNA的抽提采用愉速盐析法,HPA基因分型采用PCR－SSP方法。结果：在本研究的浙江省汉族人群中HPA－Ia基因频率为0．996,HPA－1b基因频率为0．004,HPA－2a基因为0．903,HPA－2b基因为0．097,HPA－3a基因频率为0．681,HPA－3b基因频率为0．319。HPA－4a基因频率为0．996,HPA－4b基因为0．004,HPA－5a基因频率为0．967,HPA－5b基因频率为0．03,HPA－6a基因频率为0．991,HPA－6b基因频率为0．009,结论：HPA 1－6系统中对偶抗原b基因频率最大的为HPA－3b。     

国产某丙型肝炎病毒抗体试剂中吸光度/临界值的作用

目的研究某国产抗-HCV试剂样本吸光度／临界值（S／Co）的意义，探讨国产试剂检测抗-HCV的初步程序和标准。方法采用某国产试剂通过ELISA法检测295000例无偿献血者的抗-HCV，对其阳性反应的样本采用Ortho抗-HCV试剂通过ELISA法进行检测。Ortho试剂阳性反应的样本进行HCV重组免疫印迹实验（RIBA），并对其中的106例Ortho试剂阳性反应的样本进行核酸检测。结果在295000例样本中，某国产试剂抗-HCV阳性反应为681例，阳性率为0．23％。某国产试剂阳性反应的样本经Ortho试剂检测后阳性反应为367例，符合率为53．8％，其中Ortho试剂S／Co值≥3．8为66．2％。在Ortho试剂S／Co值≥3．8的样本中，某国产试剂S／Co值≥8．0的占94．2％；而Ortho试剂S／Co值〈3．8的样本中，某国产试剂S／Co值〈8．0的占99．2％。367例Ortho阳性反应样本中，RIBAHCV阳性223例，阳性率为60．8％；在国产试剂S／Co值≥8．0的样本中，RIBA阳性率为95．7％；而同一种国产试剂S／Co值〈8．0的样本中，RIBA阳性率为2．2％。106例Ortho试剂阳性反应样本中核酸检测阳性为42例。结论国产抗-HCV试剂在检测无偿献血者样本中存在较高的假阳性率，一定程度上造成了血源和血液的浪费。某国产试剂S／Co值≥8.0和Ortho试剂S／Co值≥3．8具有一定的相关性，在实验室检测抗-HCV上具有一定诊断价值。     

血小板成分中残留白细胞的新检测方法

目的建立一种基于流式细胞术的灵敏、准确的残留白细胞检测方法。方法用CD45/CD61和核酸染料/CD612种标记方法分别对人工制备的含不同含量白细胞的血小板悬液进行流式细胞仪检测,并与理论值比较。取实际血小板成分样本,进行CD45/CD61标记法检测,并加入FlowCount参照荧光微球进行绝对计数。结果CD45/CD61标记法检测结果与理论值较为接近,二者间差异无显著性意义(P>0.05);核酸染料/CD61标记法检测值均高于理论值,特别是白细胞含量在50%以下的样本,二者间差异有统计学意义(P<0.05)。结论CD45/CD61法能较好地检测微量的白细胞,为准确检测少白细胞血小板成分中残留白细胞的含量打下基础,使少白细胞血小板成分的质量控制更为准确。     

非亲缘脐血造血干细胞移植治疗儿童非霍奇金淋巴瘤1例报道

目的观察非亲缘异基因脐血造血干细胞移植治疗儿童非霍奇金淋巴瘤的临床效果。方法 1例5岁非霍奇金淋巴瘤（Ⅳ期）患儿接受了高剂量放化疗联合非亲缘异基因脐血造血干细胞移植的治疗。结果静脉输注脐血后无异常反应。白细胞植入时间为移植后17d,血小板植入时间为移植后25d。移植后出现Ⅰ度急性移植物抗宿主病（GVHD）,分别于24d、40d采集患者外周血,经短串联重复序列GeneScan方法分析判定供者造血干细胞在患者体内存活。患儿移植后43d出院,随访至2010年6月,已无病存活67个月,至今状况良好,无复发、无并发症、无慢性GVHD发生。结论大剂量化疗联合非亲缘异基因脐血造血干细胞移植治疗非霍奇金淋巴瘤儿童患者的移植效果较好,并发症较少。     

HLA-B新等位基因B*9534的测序分析及其单链扩增技术的建立

目的 分析HLA-B新等位基因HLA-B*9534的核苷酸序列,并建立HLA-B * 9534单链扩增技术.方法 采用商品化快速抽提试剂盒抽提标本基因组DNA,采用PCR技术扩增先证者HLA-B基因的第1～8外显子序列,PCR产物经双酶切后直接测序分析第2、3、4外显子.应用序列特异性引物PCR建立HLA-B*9534单链扩增技术,获得HLA-B*9534等位基因的单链产物,并对单链产物进行第2、3、4外显子测序分析.结果 先证者标本存在2个HLA-B等位基因,直接测序结果经软件分析显示与最接近的HLA-B*1518和B*4601组合存在1个碱基不匹配,即第593位A/G杂合.单链扩增技术将先证者等位基因分离后,测序得到两个等位基因为HLA-B*4601和HLA-B*9534.与最接近的HLA-B*1518的第2～4外显子序列相比,HLA-B*9534仅在第3外显子存在一个碱基的不同,即第593位A→G的改变,导致第174位氨基酸天冬酰胺改变为丝氨酸,该等位基因序列已递交GenBank(EU046491),并经世界卫生组织HLA命名委员会正式命名为HLA-B*9534.结论 发现一个新的HLA-B*9534等位基因,建立的HLA-B*9534单链扩增技术是可行的.     

浙江汉族人群HLA-DPA1和-DPB1基因多态性分析

目的 检测浙江地区汉族人群HLA-DPA1和HLA-DPB1等位基因及单倍型频率.方法 应用PCR-直接测序分型法对100名健康、无血缘关系的浙江汉族人外周血标本进行HLA-DPA1和HLADPB1等位基因分析.结果 在100份标本中检出8个HLA-DPA1等位基因和19个HLA-DPB1等位基因.HLA-DPA1等位基因频率较高的依次为DPA1*020202(47.0%)、DPA1*010301(38.5%)和DPA1*020101(10.5%).HLA-DPB1等位基因中,频率较高的依次为DPB1*0501(39.5%)、DPB1*020102(13.5%)和DPB1*040101(13.0%).连锁分析发现共有44个HLA-DPA1-DPB1单倍型,单倍型频率最高为DPA1*020202-DPB1*0501(29.5%).结论 浙江地区汉族人群HLA-DPA1和DPB1基因座等位基因具有丰富的多态性,2个基因座呈现连锁不平衡.     

丙型肝炎病毒抗体阴性献血人群中丙型肝炎病毒核心抗原检测的研究

目的观察丙型肝炎病毒(HCV)抗体阴性献血人群HCV核心抗原的流行情况,初步评估经HCV抗体检测后输血传播HCV的潜在风险. 方法 抗HCV抗体和HCV核心抗原检测采用ELISA试剂盒,丙氨酸氨基转移酶检测采用速率法,HCV RNA检测采用实时荧光PCR检测试剂盒. 结果在抗HCV检测阴性的1 758份无偿献血者标本中,HCV核心抗原检测有3份阳性,阳性率为0.17%;HCV核心抗原阳性的3份样本HCV RNA检测为阴性. 结论结果提示抗HCV检测后,经血液传播HCV的潜在风险已经很低.     

一种新的B3变异型相关的B糖基转移酶基因M142T突变研究

目的 研究中国人个体ABO血型系统中具有混合外观凝集特征的B3变异型的分子遗传背景.方法 血型血清学方法鉴定2例ABO血型疑难样本的红细胞表型,应用连续凝集方法和13个短串联重复序列(short tandem repeat,STR)位点检测法,排除外源性或内源性DNA嵌合的可能.对ABO基因第6、7外显子和部分内含子进行聚合酶链反应和DNA序列分析,并进一步通过克隆测序法鉴定2个样本的ABO基因单倍型.结果 2个无关个体红细胞与抗-B和抗-AB发生混合外观凝集,连续凝集法和STR检测排除了样本的外源性DNA污染和内源性遗传嵌合子,根据血清学特征确定这2个个体红细胞均为A183血型.单倍型序列分析发现2个样本为A1B杂合子,其中B等位基因与B101相比,差异仅在第7外显子的425T>C错义突变,导致B糖基转移酶多肽链M142T替换.结论 在中国人群中发现一种新的可能导致B3变异型的ABO等位基因.