NMDA对离体培养人海马神经干细胞凋亡的影响

目的研究N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）对离体培养的人胚胎海马神经干细胞（NSCs）凋亡的影响。方法从胎龄8～12周人胚脑中分离、传代培养并鉴定海马NSCs,取传代培养的海马NSCs随机分组：①正常组;②μmol／LNMDA组;③10μmol／LNMDA组;④30μmol／LNMDA组;⑤100μmol／LNMDA组。每组设4个复孔,分别在3、7、12天取各组细胞,用Hoechst33258进行荧光染色,计算海马NSCs的凋亡率。结果在3、7、12天时,各实验组的人胚胎海马NSCs凋亡率与正常组相比均无明显差异。结论-定条件下,早期离体培养人胚胎海马NSCs对浓度为100μmol／L及其以下的NMDA有较好的耐受性。     

腺病毒介导EGFP基因转染神经干细胞的实验研究

目的探讨腺病毒（adenovirus）介导的增强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因在神经干细胞（NSCS）的表达规律及转染对神经干细胞增殖、分化的影响。方法用不同感染复数的携带EGFP基因的腺病毒（Ad/EGFP）转染NSCS,在荧光倒置相差显微镜下观察EGFP的表达情况,同时用台盼蓝染色、细胞球计数、免疫细胞化学方法分别检测对照组和转染组细胞的活力、增殖、分化情况。结果Ad/EGFP转染16 h后NSCS发出绿色荧光,在第7天左右荧光强度达高峰并可持续稳定表达20天左右,Nestin表达阳性。在分化后细胞的胞体与突起均可见绿色荧光,部分细胞β-Ⅲtubu lin、GFAP表达阳性。同时观察到对照组和转染组的NSCS在第7天、14天、21天时细胞活力、增殖、分化情况均无统计学差异（P〉0.05）。结论Ad/EGFP可以高效转染新生大鼠海马NSCS,且不影响NSCS的存活、生长和分化。EGFP基因是神经干细胞的理想的报告基因。     

地佐环平对缺氧缺糖海马脑片CA1区Bcl-2蛋白和Bax蛋白表达的影响

目的:观察N-甲基-D-门冬氨酸(NMDA)受体非竞争性拮抗剂MK-801对缺氧缺糖海马脑片CA1区Bcl-2蛋白和Bax蛋白表达的影响。方法:新生6～9dSD大鼠断头取脑,制备海马脑片,将各孔脑片单纯随机分为3组,分别为正常对照组(HOTC)、单纯缺氧缺糖组(OGD)和预加MK-801再缺氧缺糖组(MK-801+OGD)。海马脑片进行缺氧缺糖培养,最后进行免疫组织化学染色和图像分析处理。结果:各组海马脑片CA1区均有不同程度Bcl-2,Bax蛋白表达。OGD组Bcl-2蛋白的表达(15.7±1.1)弱于HOTC组(18.5±0.9)和MK-801+OGD组(18.0±0.9),差异均有显著性意义(F=6.495,P<0.05);OGD组Bax蛋白的表达(13.1±2.5)强于HOTC组(7.3±1.1)和MK-801组(8.7±1.1),其差异均有显著性意义(F=9.770,P<0.05)。同时,OGD组CA1区出现细胞缺失形成的空洞,其他两组与OGD组相比有所减少。结论:MK-801可增强缺氧缺糖海马脑片CA1区Bcl-2蛋白的表达,降低Bax蛋白的表达,并减轻该区锥体细胞损伤程度。     

基质细胞衍生因子-1_α/CXCR4/CXCR7轴对骨髓间充质干细胞迁移的影响

目的探讨基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)受体CXCR4、CXCR7在骨髓间充质干细胞(BMSCs)中蛋白和mRNA的表达;及SDF-1α/CXCR4/CXCR7轴对BMSCs迁移作用的可能机制。方法体外培养大鼠BMSCs,流式细胞术鉴定细胞表面抗原CD29、CD44和CD34。应用CXCR4特异性拮抗剂AMD3100及CXCR7中和抗体分别阻断CXCR4及CXCR7,通过Western blotting和RT-PCR分别检测BMSCs蛋白和mRNA的表达变化;Transwell法检测细胞迁移能力。本次实验分为单纯BMSCs组(A)、AMD3100预处理BMSCs组(B)、CXCR7中和抗体预处理BMSCs组(C)及AMD3100+CXCR7中和抗体预处理BMSCs组(D)。结果经鉴定第3代大鼠BMSCs中CD29和CD44均呈阳性表达,而CD34表达阴性。BMSCs中CXCR4、CXCR7蛋白和mRNA均有表达。与A组相比,B组及D组CXCR4及CXCR7蛋白表达明显受到抑制(P0.05),C组只有CXCR7蛋白表达降低(P0.05);各组CXCR4 mRNA和CXCR7 mRNA的表达差异均无显著性。SDF-1α可以诱导BMSCs迁移,与0μg/L组相比,10μg/L组和100μg/L组穿膜细胞数均显著增多(P0.01),与10μg/L组相比,100μg/L组穿膜细胞数亦明显增多(P0.01);AMD3100和CXCR7中和抗体均能抑制BMSCs的迁移作用(P0.05),当两者同时作用时,抑制效应更为显著(P0.05)。结论 BMSCs共表达CXCR4、CXCR7蛋白及mRNA;BMSCs的迁移具有SDF-1α浓度依赖性;SDF-1α/CXCR4/CXCR7轴介导BMSCs的迁移作用,CXCR4受体和CXCR7受体对BMSCs的迁移可能具有协同促进作用。     

新生大鼠海马神经干细胞的离体培养及细胞连接的超微结构观察

目的观察体外培养的新生大鼠海马神经干细胞球的超微结构特点。方法取处于指数期的原代培养7d的新生大鼠海马神经干细胞,常规制备透射电镜样品后,用日立H-600透射电镜观察并摄片。结果光镜下神经干细胞呈克隆球散在悬浮于培养基中,Nestin免疫荧光阳性;电镜下观察到神经干细胞相互间排列比较松散、核浆比例高,细胞间胞膜增厚,形成特化的结构,有的胞膜上可见胞吞/胞吐小泡。结论体外培养的新生大鼠海马神经干细胞间的细胞连接有间隙连接样结构,并可出现胞吞/胞吐功能,提示细胞间可进行相互交流,传递化学递质或电兴奋活动。     

496名医学硕士研究生考试复试者社会性特质分析

目的 分析硕士研究生考试复试者的社会性特质.方法 使用海斯曼心理CT系统对496名医学硕士研究生考试复试者和48名健康体验者进行明尼苏达多相人格调查问卷(MMPI)的测试,采用协方差分析对数据进行分析.结果 ①女性考研者的社会责任感和无社交性焦虑H1分数高于男性[分别为(59.1±9.0)分,(56.0±8.5)分,P＜0.01;(59.0±10.1)分,(57.3±8.6)分,P＜0.05];本科者的无社交性焦虑H1分数高于大专者[(58.3±9.4)分,(52.1±11.5)分,P＜0.05],与社会的疏远PD4A和与社会的疏远S1A分数低于大专者[分别为(44.2±7.6)分,(51.7±9.0)分,P＜0.01;(39.6±7.4)分,(45.9±9.6)分,P＜0.05];未婚者的与社会的疏远PD4A分数高于已婚者[(44.7±7.7)分,(42.9±7.1)分,P＜0.05].②经协方差分析控制性别、婚姻状况和受教育程度的影响后,考研者的与社会的疏远S1A分数明显高于健康体验者[(40.0±7.5)分,(35.2±6.8)分,P＜0.05].结论 考研者的社会性特质存在性别差异,受到婚姻状况和受教育程度的影响,具有与社会疏远的倾向.     

考研复试者特殊行为倾向的特点

目的分析考研复试者特殊行为倾向的特点。方法使用海斯曼心理CT系统对496名医学硕士研究生考试复试者和48名健康体验者进行明尼苏达多相人格调查问卷（MMPI）测试,评估其特殊行为倾向、个性特征和心身症状。结果 1经协方差分析控制受教育程度、年龄等影响后,考研复试者的性变态分数低于健康体验者（44.5±8.0 vs 51.1±9.3,P〈0.01）,而吸烟分数高于健康体验组（45.1±8.8 vs 41.0±8.1,P〈0.05）;2特殊行为倾向分数不仅与精神质、神经质、内外向和掩饰相关（r=0.093-0.681,-0.113--0.667,P〈0.05）,且与疑病、抑郁、癔病、精神病态、男女子气、偏执狂、精神衰弱、精神分裂、轻躁狂症和社会内向相关（r=0.088-0.931,-0.089--0.269,P〈0.05）;3个性特征和心身症状对特殊行为有预测作用（Beta=0.069-0.226,-0.081,P〈0.05）,性别、受教育程度和职业也与特殊行为有关（Beta=0.060-0.612,-0.047--0.700,P〈0.05）。结论考研复试者的特殊行为倾向受性别、职业、年龄和受教育程度的影响,与其个性特征和心身症状有关。     

海马神经干细胞不同传代方法的比较

背景：体外培养神经干细胞,在悬浮培养时由于自身增殖特性会形成球,传代时将会面临如何将细胞球分离成单细胞的问题。目的：寻求理想的大鼠海马神经干细胞传代方法,以获得大量可增生的神经干细胞以供研究。方法：分离新生1dSD大鼠海马神经干细胞,原代培养至五六天时,分别用机械吹打法、胰蛋白酶、TrypLE和Accutase消化法分离神经干细胞球。之后每7d传代1次,连续传代3次。分别于每次传代后第1天和传代后第4天计数活细胞比例和细胞球数目,实验重复3次。结果与结论：神经干细胞球经3种酶消化后获得的均是单细胞;经机械吹打后既有单个细胞,也有小细胞球分布于培养液中。在酶消化法中,Accutase消化法传代后神经干细胞的活细胞比例明显高于胰蛋白酶消化（P〈0.01）和TrypLE消化法（P〈0.05）。同时,Accutase消化法传代后新形成的细胞球数目也较其余各组多（P〈0.01）。提示在实验条件下,Accutase消化法能够较好地将神经干细胞球分离成存活率较高、能快速形成新的克隆球的单个细胞,是较为理想的神经干细胞分离传代方法。     

β淀粉样蛋白1-40和氯化铝双干预阿尔茨海默病大鼠模型的建立

背景：目前已建立的各种阿尔茨海默病动物模型均存在一定的局限性。 目的：以β淀粉样蛋白1-40和氯化铝双干预的方式,建立一种较为理想而实用的阿尔茨海默病大鼠模型。 方法：健康雄性老年SD大鼠,经Morris水迷宫训练和筛选后,随机分为模型组、生理盐水组和对照组。采用单侧侧脑室一次性注射β淀粉样蛋白1-40和腹腔连续4周隔天注射3%氯化铝的方式建立阿尔茨海默病大鼠模型。以Morris水迷宫实验和跳台实验检测模型大鼠的行为学变化。以刚果红和苏木精-伊红染色检测大鼠海马淀粉样蛋白沉积以及病理学改变。 结果与结论：与对照组及生理盐水组相比,模型组大鼠水迷宫实验逃避潜伏期明显延长(P < 0.05);跳台实验反应时间、基础错误次数和错误次数显著增加(P < 0.05),潜伏期明显缩短(P < 0.05)。模型组大鼠海马可见淀粉样蛋白物质沉积,细胞形态发生明显的损伤改变且细胞数量减少。以上结果提示,以β淀粉样蛋白1-40和氯化铝双干预的方式能够成功复制出一种比较理想而实用的阿尔茨海默病大鼠模型。