多基因甲基化的检测在肝癌早期诊断中的价值

目的检测肝癌患者癌组织中p14、p15、p16、RB基因启动子异常甲基化状况,探讨其在肝癌诊断中的价值。方法采用甲基化特异性PCR（MSP）方法检测44例肝癌组织及其相对应41例肝硬化组织、44例癌旁组织中p14、p15、p16、RB的甲基化状况。对所得结果进行卡方检验,Fisher精准概率分析。结果肝硬化组织中p14、p15、p16、RB 4种基因的甲基化检出率分别为17.1%（7/41）、28.9%（11/41）、36.6%（15/41）和7.3%（3/41）;肝癌组织中4种基因的甲基化检出率分别为34.1%（15/44）,56.8%（25/44）,70.5%（31/44）和27.3%（12/44）。癌旁组织中检测出p16甲基化阳性产物4例,p15阳性产物1例。癌组织和肝硬化组织中4种基因的甲基化率明显高于癌旁组织（P〈0.05）;不同年龄、性别、肿瘤分化程度和临床分期的肝癌患者各个基因甲基化率没有明显差异。结论 p14、p15、p16、RB基因甲基化在肝癌中频发;多基因甲基化的联合检测在肝癌的早期诊断中有一定的价值。     

宫颈癌中MRP、GST-π的表达及意义

目的:检测多药耐药相关蛋白(multi-drug resistance-associated protein,MRP)、胎盘型谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferase-π,GST-π)在宫颈癌(cervical cancer,CC)中的表达,探讨其在宫颈癌多药耐药(multi-drug resistance,MDR)形成中的作用和相互关系。方法:运用荧光定量PCR(flurescence quantitative-PCR,FQ-PCR)检测47例宫颈癌组织及12例正常宫颈组织中耐药基因MRP、GST-πmRNA的表达情况,并分析其与临床病理参数之间的关系。结果:MRP、GST-π在宫颈癌中的表达分别为0.51±0.28、0.44±0.24,正常宫颈组织中的表达分别为0.20±0.11、0.18±0.10,耐药基因在宫颈癌中的表达高于正常宫颈组织,差异具有统计学意义(P<0.05)。MRP、GST-π表达与病人的淋巴转移、肿瘤分化程度、临床分期之间差异无统计学意义(P>0.05)。MRP与GST-π之间的表达具有统计学意义。结论:MRP、GST-π基因高表达可能在宫颈癌原发性耐药中起重要作用,检测MRP、GST-π基因的表达情况对预测宫颈癌的化疗效果、协助临床选择化疗方案可能有一定意义。     

多基因甲基化对散发性乳腺癌的诊断价值

目的:探讨血清表观遗传学改变即DNA甲基化对散发性乳腺肿瘤的诊断价值。方法:用甲基化特异PCR检测了102例散发性乳腺癌患者及20例健康对照者血清BRCA1,p16和14-3-3 sigma基因甲基化状况。结果:102例散发性乳腺癌患者血清中p16基因甲基化率为29%,BRCA1为32%,14-3-3 sigma为82%,与肿瘤分级和ER受体表达明显相关。p16基因甲基化与组织分型有关,p16与BRCA1基因甲基化和PR相关,14-3-3 sigma基因甲基化与淋巴结转移有关。70%p16、75.8%BRCA1甲基化患者显示血清CEA水平升高,69.7%显示CA153水平升高。多因素分析发现,血清BRCA1和/或p16甲基化可以预示预后不良,死亡风险指数达6.0。结论:散发性乳腺癌患者BRCA1/p16基因甲基化作为肿瘤标志物明显优于蛋白类(CEA、CA153)标志物。     

肺癌患者PTEN基因启动子甲基化和转录表达的研究

目的 探讨张力蛋白同源的磷酸酶基因(PTEN)启动子CpG岛甲基化状态和基因表达水平与肺癌发生的关系.方法 用甲基化特异性PCR检测PTEN启动子CpG岛甲基化状态,实时定量PCR 检测PTEN mRNA的表达水平.结果 在肺癌组织中PTEN基因启动子甲基化的频率为26.67%(12/45),在肺正常组织中未发生甲基化(χ2=7.448,P＜0.01).正常组织中PTEN mRNA全部表达,肺癌组织中表达缺失率为22.22%(10/45),且表达量低于正常肺组织(t=-14.156,P＜0.001),不同年龄、性别、肿瘤大小、恶性程度、肿瘤分类中其表达量无显著性差异(P＞0.05);PTEN甲基化与其mRNA表达下降密切相关.结论 肺癌中PTEN基因启动子甲基化频率明显升高,其表达普遍下调或缺失,提示PTEN启动子甲基可在肺癌发生、发展中起一定作用.     

血浆低密度脂蛋白胆固醇测定参考方法的建立

目的建立一种新的预期用作低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterol,LDL-C）准确测定的参考方法。方法采用密度梯度超速离心技术,从新鲜血浆中分离出低密度脂蛋白（low density lipoprotein,LDL）和其它各类脂蛋白。参考并筒化应用目前国际上公认的胆目醇测定参考方法Abell—Levy—Brodie—Kendall（ALBK）法,以分离的LDL为检测样本,重复多次测定LDL—C,用Excel软件对结果进行统计分析,计算总不精密度（总变异系数CV）、平均批内不精密度（平均批内变异系数CV）和测量不确定度（u）等精密度检验标度,对所建立方法进行精密度评价;并通过回收实验、干扰实验的结果分析对建立方法进行准确度评价。结果密度梯度超速离心成功分离出LDL和其它几类脂蛋白,用ALBK法测定LDL—C的方法学精密度为：总CV为3．21％～4．51％,平均批内CV为1．78％～4．05％,测量不确定度u为0．031～0．042,胆田醇平均回收率达107．2％,血红蛋白（Hb）〈1．95g／L时对该方法干扰度较小。结论密度梯度超速离心技术分离LDL耗费低、易操作;ALBK法直接测定LDL—C,方法学精密度统计分析结果显示该方法重复性好,回收实验、干扰实验的准确度评价结果显示所建立方法稳定、抗干扰能力强,超速离心结合ALBK法可望用作LDL—C的参考方法。     

大容量盐水增强MR关节成像用于复发性肩关节前脱位的前瞻性评价

作者在1994年11月～1996年4月对44例复发性肩关节前脱位进行此项评估。男28例,女16例,年龄18～60岁,平均30岁。38例有外伤史,6例无外伤史,左、右肩各22例。向患者详细说明检查程序并获得允许,检查后24小时内避免全身运动,禁止体力劳动。在荧光透视下进针入关节内,固定于适当位置,注入1～2ml曲仑(伊索显),接着注入生理盐水,当病人陈诉不适或疼痛增加或当医师感到注射阻力增加时停止注射,最大剂量为     

齿状突低位(Ⅲ型)骨折:一种新的X线征象

作者描述了见于上部颈椎(枕部、环椎及枢椎)侧位X 线片的枢椎“环”的构成,以及“环”的断裂在认识齿突骨折及其分类上的意义。     

2型糖尿病慢性并发症患者血管紧张素转换酶和醛固酮的变化及临床意义

对31例单纯性T2DM患者,21例伴感染患者,25例伴血管病变患者2,7例伴肾病患者和28例正常对照组测定ACE、Ald、GluI、ns、GHb。结果糖尿病患者无论有无并发症血浆ACE和Ald水平显著高于对照组（P〈0.01）,糖尿病肾病患者血浆ACE和Ald水平显著高于其他慢性病变组（P〈0.01）,其他慢性病变组之间以及与对照组之间比较ACE和Ald水平无差异,血浆ACE与Glu和GHb及Ald与GluI、ns和GHb之间无相关性,ACE与Ins负相关。结论糖尿病患者血浆ACE和Ald水平增高在糖尿病肾病发生与发展中起重要作用。     

甲状腺乳头状癌组织中G-蛋白偶联受体5和组织蛋白酶D的表达及临床意义

目的 分析甲状腺乳头状癌组织与癌旁组织中G-蛋白偶联受体5(LGR5)及组织蛋白酶D(Cath D)的表达与各临床病理因素之间的关系。方法 采用免疫组化的方法检测LGR5和Cath D在67例甲状腺乳头状癌与癌旁正常甲状腺组织中的表达,分析它们的表达与性别、年龄、肿瘤大小、淋巴结阳性、局部包膜侵犯、原发肿瘤区域淋巴结远处转移(TNM)分期等临床病理因素的关系。结果 甲状腺乳头状癌和癌旁正常甲状腺组织中LGR5的阳性表达率分别为62.69%(42/67)、2.99%(2/67),Cath D的阳性表达率分别为70.15%(47/67)、4.48%(3/67),甲状腺乳头状癌组织中LGR5和Cath D阳性表达率均明显高于癌旁正常组织(P<0.05)。在有淋巴结转移和局部包膜侵犯组织中,LGR5、Cath D阳性表达率明显高于无淋巴结转移者和无局部侵犯者(P<0.05);不同肿瘤大小、不同TNM分期的病人甲状腺乳头状癌组织中LGR5及Cath D的阳性表达率均差异有统计学意义(P<0.05);LGR5及Cath D的阳性表达率与病人年龄、性别无关(P>0.05)。结论 甲状腺乳头状癌组织中LGR5和Cath D的高表达与肿瘤的侵袭和转移密切相关。     

冠状动脉粥样硬化性心脏病患者循环白细胞SREBP-2启动子甲基化与其他风险因素的相关性研究

目的探讨冠状动脉粥样硬化性心脏病(CAD)患者固醇调节元件结合蛋白-2(SREBP-2)的启动子甲基化水平与血浆miR-33a以及血脂和心肌酶等生化指标的相关性。方法病例对照研究,2017年8月至2018年4月在湖北医药学院附属太和医院心内科三病区招募冠状动脉造影检查受检者100例,其中冠状动脉造影显示梗阻的CAD患者50例以及冠状动脉造影阴性的对照者50例。采集外周血样本,提取白细胞DNA,通过焦磷酸测序法检测SREBP-2启动子区两个片段,共计12个CpG位点的甲基化水平;提取血浆RNA,定量qPCR检测血浆miR-33a水平;分离血浆,采用全自动生化分析仪检测血浆中血脂、心肌酶、炎症相关因子等15项生化指标。通过Pearson和Spearman相关系数及多因素Logistic回归分析等统计学方法分析其相关性。结果CAD患者SREBP-2启动子区F1-4 CpG位点(转录起始点上游-103bp)甲基化水平显著高于对照组(4.56%±0.70%vs 3.54%±0.72%,t=-3.864,P<0.001);F1-4位点的甲基化水平与血浆中miR-33a-5p水平和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平呈负相关(r=-0.318,P=0.001;r=-0.225,P=0.024)。此外,校正年龄、性别、高血压、高脂血症和糖尿病病史混杂因素之后,F1-4高甲基化是CAD的独立风险因素(OR=2.452,95%CI=1.398~4.299,P=0.002)。结论DNA甲基化和miRNA可能协同调控CAD发病机制中异常的脂质代谢。