组织工程神经导管在外周神经再生过程中的应用

组织工程方法修复周围神经缺损近年来得到迅速发展。目前研究集中在设计一种由生物活性材料制备的神经导管，构建神经再生室来提高生物相容性、减少毒性反应、促进轴突的延伸。雪旺氏细胞对周围神经再生起到非常关键的作用，植和地管中可引导轴突端再生，减少纤维细胞浸润，保持导管内神经营养因子的浓度。     

雪旺氏细胞的发育、存活及其调控机制

雪旺氏细胞（schwann cells,SC)是周围神经系统的胶质细胞，在神经再生过程中起到至关重要的作用。本阐述SC的发育，存活及其相关的调控因子。了解了SC及其前体的生物学特性。轴突源性Neuregulin和SC自分泌调控的信号对其存活的调控。以及SC凋亡的调控。以便在体外模拟体内环境大量扩增SC，解决目前组织工程神经修复中的难点。     

不同诱导环境对牙周膜干细胞膜片生物学特性的影响

目的:探讨不同诱导体系对牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)膜片的构建以及生物学性能的影响。方法:分离培养大鼠发育期根端复合体(developing apical complex,DAC)细胞,隔天更换收集细胞培养液上清并过滤冻存(DAC条件培养液)。分离培养人PDLSCs,并扩增构建PDLSCs细胞膜片,利用DAC条件培养液和成骨诱导液分别诱导PDLSCs膜片5、10、15 d。通过倒置显微镜、HE染色、免疫组化、RT-PCR检测经过诱导的人PDLSCs细胞膜片形态学和功能学变化。结果:与成骨诱导相比,DAC诱导后膜片含有丰富短棒状细胞和大量细胞外基质(extracellular matrix,ECM),细胞膜片ALP和periostin表达丰富,体外成骨基因表达更高。结论:与成骨诱导体系相比,DAC诱导体系更适合PDLSCs膜片的形成。     

转化生长因子β及重组人骨形成蛋白2对雪旺细胞生物学行为影响的实验研究

目的研究转化生长因子β(transformin ggrowth factorβ,TGF-β)、重组人骨形成蛋白2(recom binant humanbonemor phogenetic protein2,rhBMP-2)对雪旺细胞生物学行为的影响。方法体外培养SD乳鼠雪旺细胞,按5×103/孔接种96孔板,分为3组。A组:加入50ng/mlTGF-β;B组:加入50ng/mlrhBMP-2;C组不作任何处理,作为空白对照组。采用MTT法每天取4孔连测9d细胞数,并绘制生长曲线;流式细胞仪测定细胞周期以观察雪旺细胞增殖情况;ELISA双夹心法测定培养液中神经生长因子(nervegrowth factor,NGF)含量。结果MTT法检测显示A、B组细胞生长曲线远离C组,逐渐上升到第8、9天差异明显,A组较B组上升趋势更明显,差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞仪测定显示A组和B组细胞增殖指数较C组高(P<0.05)。ELISA法检测A组上清NGF含量最高,各组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论外源性TGF-β、rhBMP-2均能促进雪旺细胞增殖和分泌NGF的功能,而TGF-β更优于rhBMP-2。     

人组织工程全层皮肤在烧伤创面中厚供皮区的应用

目的观察人组织工程全层皮肤(ActivSkin)在中厚供皮区临床应用效果.方法 9例患者,年龄17～43岁.其中5例1%～6%总体表面积烧伤,深Ⅱ度～Ⅲ度;4例烧伤后瘢痕.每例患者2个部位创面,均使用自体中厚皮片修复.切取皮片后供区遗留创面随机分为试验组和对照组,行自体对照观察.试验组创面采用ActivSkin修复,对照组创面采用凡士林油纱覆盖.术后观察创面疼痛、愈合时间及治愈率;术后7～30 d每日观察创面愈合情况,1、3、6个月定期随访.结果试验组创面术后疼痛明显减轻,愈合时间为9.67±2.92 d,比对照组16.56±2.96 d提前,差异有统计学意义(P＜0.05);治愈率均为100%.术后随访试验组创面供皮区愈合后未见水疱、残余创面发生,瘢痕形成减轻;对照组创面4例于术后3个月内有水泡形成,残余创面发生. 结论ActivSkin可减轻中厚供皮区创面疼痛,加速愈合,并能预防供皮区愈合后水疱、残余创面发生,降低瘢痕形成.     

人NT-3基因转染对雪旺细胞生物学行为的影响

目的观察神经营养素-3(NT-3)基因转染对雪旺细胞生物学行为的影响.方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,从人肝脏组织总RNA中克隆NT-3 cDNA,构建重组真核表达载体pIRES2-EGFP-NT-3;应用混合酶消化法分离、纯化雪旺细胞;采用阳性脂质体介导法将重组质粒pIRES2-EGFP-NT-3转染雪旺细胞,观察外源性NT-3对雪旺细胞生物学行为的影响.结果成功地从人肝脏组织中克隆了NT-3 cDNA,构建了重组真核表达载体pIRES2-EGFP-NT-3;分离、纯化得到了高纯度的雪旺细胞;将重组质粒转染雪旺细胞,与对照组相比,转染NT-3基因的雪旺细胞形态正常;经NT-3抗体免疫组化染色见NT-3转染组雪旺细胞胞浆呈深棕色着色,轴突着色清晰可见,与对照组相比,明显变长;空载体转染组及空白对照组胞浆及轴突着色均较淡;对各组细胞胞浆着色进行半定量分析,结果表明NT-3基因转染组灰度值显著高于对照组(P<0.01).结论 NT-3基因转染后雪旺细胞NT-3含量明显增加,轴突变长,本实验结果有望为面神经损伤后的修复提供新的途径.     

知不足然后能自反，知困然后能自强——对颜面战创伤研究获“国家一等奖”的反思

颜面战创伤与人类战争相随，在我国春秋时期墓葬和古埃及金字塔中都曾找到过凿的文物佐证。近百年来，随着现代战争中高能高爆武器的广泛应用，颜面战创伤占全部战创伤比例已从二战时的3．4％骤升至伊拉克战争时的23％。每场战争后都遗留有大量颜面缺损伤员急需修复。     

组织工程神经中雪旺细胞的形态

目的:观察组织工程神经中雪旺细胞的形态.方法:体外培养雪旺细胞,用倒置显微镜、扫描电镜和透射电镜观察雪旺细胞在PGLA膜上的生长情况和雪旺细胞在BAM凝胶中的形态,用BrdU标记雪旺细胞,观察雪旺细胞-PGLA复合体植入SD大鼠3wk后,雪旺细胞的存活情况.结果:倒置显微镜下,PGLA膜上的雪旺细胞形态与常规培养特点相同,BAM凝胶中雪旺细胞逐渐恢复双极状形态,形成类Büngner带结构,然后可见细胞从凝胶中迁出;扫描电镜下,雪旺细胞细长的双极状形态特点明显,许多细胞聚合类似于Büngner带;透射电镜下,雪旺细胞底部形成一些特殊的钉状突与PLGA膜内接触;免疫组化染色显示组织工程神经中雪旺细胞大量存活.结论:本实验的组织工程神经中雪旺细胞形态正常,生长良好.     

利用异种脱细胞神经基质与脂肪源间充质干细胞构建周围神经移植物

由于合成的神经导管不具有促神经再生的特性,因此不能有效修复长距离神经缺损。本研究,利用异种脱细胞神经基质与神经分化的脂肪源间充质干细胞进行整合,构建了一种含神经再生特性的周围神经移植物。其中制备的异种脱细胞神经基质不但完全去除了细胞与髓鞘,并保留了生长因子和细胞外基质的天然结构,例如多孔隙率与基膜管。     

骨形成蛋白和氯己定双缓释的壳聚糖温敏凝胶用于牙周组织再生的实验研究

目的 观察双重缓释骨形成蛋白和氯己定的壳聚糖温敏载药凝胶修复牙周组织缺损的效果.方法 制备犬前磨牙Ⅱ度根分叉牙周组织缺损模型,分5组于牙周组织缺损处分别注入:①自制的双重缓释骨形态发生蛋白和氯己定的载药凝胶(T1组);②仅加载缓释骨形态发生蛋白的壳聚糖温敏凝胶(T2组);③仅加载缓释氯己定的壳聚糖温敏凝胶(T3组);④未加载任何药物的壳聚糖温敏凝胶(C1组);⑤不注射任何载体及药物(C0组).术后不使用抗生素,常规护理,8周后取材进行大体及组织学观察牙龈炎性反应及牙周组织再生情况.结果 应用壳聚糖温敏凝胶,可以方便地通过注射方式局部安放载体.T1组新生牙槽骨高度平均达到缺损高度的99.2%,T2组新生牙槽骨高度平均达到缺损高度的87.8%,T3组为63.6%,C1组为37.0%,CO组为34.3%;牙龈炎性反应细胞浸润情况显示T1及T3组炎细胞数量明显少于其他组.结论 自制双缓释壳聚糖温敏凝胶有效发挥了骨形态发生蛋白和氯己定各自的作用,并且在牙周组织再生治疗中具有简便性和有效性.