一种高效表达小干扰RNA载体的构建研究

目的：用mir30前体骨架来构建高效表达小干扰RNA载体。方法：通过基因合成的方法，将mir30前体骨架进行全长基因合成，并在合成的mir30前体骨架中引入合适的酶切位点用于外源发夹DNA的克隆，然后将之克隆到含U6启动子的表达载体中。将针对绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）的小干扰RNA克隆到以上表达载体中，通过转染及Western blot来检测新的小干扰RNA表达载体的基因沉默效率。结果：同目前常用的含polⅢ的小干扰RNA表达载体相比较，用mir30前体骨架表达针对GFP的小干扰RNA的表达载体可以明显抑制GFP的表达。结论：用mir30前体骨架构建的小干扰RNA表达载体可高效表达外源小干扰RNA。     

人Slit2全长cDNA的真核表达及鉴定

目的:对人神经轴突导向因子Slit2(hSlit2)全长cDNA进行真核表达并进行鉴定。方法:采用分段克隆的方法获得hSlit2全长cDNA的克隆,并构建hSlit2全长cDNA真核表达重组质粒pCMV-GFP-C/hSlit2,用磷酸钙共沉淀法将其转染到人胚肾细胞HEK-293细胞中,通过免疫印迹法鉴定其蛋白表达。结果:经酶切鉴定证实hSlit2全长cDNA的真核表达载体构建成功,免疫荧光蛋白和Western blot结果证实hSlit2全长cDNA在HEK-293细胞中的表达。结论:人神经轴突导向因子hSlit2真核表达载体构建成功,为进一步完善hSlit2蛋白及各水解片段功能研究提供了实验基础。     

用瑞格列奈二甲双胍片治疗II型糖尿病的研究进展

用瑞格列奈二甲双胍片治疗Ⅱ型糖尿病,主要是通过两种不同作用机制的抗高血糖药物对此病患者的血糖进行控制。瑞格列奈是通过刺激胰腺释放胰岛素来控制患者的血糖,二甲双胍是通过降低患者基础血糖和餐后血糖来改善患者的糖耐量。用瑞格列奈二甲双胍复方片治疗Ⅱ型糖尿病,可提高患者对胰岛素的敏感性及有效控制其体重,可显著降低其发生心脑血管疾病等并发症的危险。此药值得在临床上推广使用。     

RNA干扰HIF-1α对食管鳞癌血管生成拟态的影响

背景:研究表明大量高度恶性肿瘤组织中存在血管生成拟态(VM),其分子机制已形成相关假说,但确切机制和关键信号通路尚未明确。目的:探讨缺氧诱导因子(HIF)-1α在食管鳞癌VM形成中的作用。方法:设计合成3种HIF-1α-siRNA质粒,测序后瞬时转染293T细胞,蛋白质印迹法鉴定质粒的干扰效果。将筛选出的pGCsi-HIF3质粒稳定转染食管鳞癌细胞株Eca109和TE13,以蛋白质印迹法检测干扰效果,三维培养法观察VM形成情况,蛋白质印迹法检测VE-cadherin、EphA2、LN5γ2和MMP2蛋白表达。结果:成功构建了3个靶位的质粒,其中pGCsiHIF3的干扰效果最好。pGCsi-HIF3稳定转染食管鳞癌细胞株Eca109和TE13后,与对照组相比,HIF-1α表达明显降低,细胞体外管道形成能力被明显抑制(P0.05)。常氧下转染组细胞中VE-cadherin、EphA2、LN5γ2均显著下调(P0.05),MMP2表达无明显差异,且缺氧条件下上述指标蛋白表达无明显增加。结论:Eca109和TE13细胞能形成管状结构,HIF-1α可能通过调节VE-cadherin、EphA2、LN5γ2等的表达而调节食管鳞癌VM的形成。     

杨文华治疗真性红细胞增多症1例报告

真性红细胞增多症是一种造血干细胞的克隆性慢性骨髓增殖性疾病,起病隐匿,常表现为骨髓红、粒和巨核细胞三系不同程度的增生,以红细胞增多为其突出表现。中医学将其归属于＂血积＂、＂虚劳＂等范畴。杨文华教授认为本病以正虚为本,以热毒、肝火、血瘀、痰结为标,病理上以血实、血瘀、血痹为主,率先提出清肝化瘀法治疗真性红细胞增多症,病变初期以攻为主;中期扶正与祛邪兼顾,标本兼治;晚期以扶正为主,临床取得了满意疗效。     

双隧道与单隧道经口内镜下肌切开术治疗贲门失弛缓症的疗效比较

目的:评价双隧道与单隧道经口内镜下肌切开术（peroral endoscopic myotomy,POEM）治疗贲门失弛缓症的长期临床疗效。方法:设计随机对照试验,纳入2018年6月—2019年6月于南京医科大学第一附属医院消化内科行POEM治疗的30例贲门失弛缓症患者,采用计算机随机数字法将30例患者随机分为单隧道P...     

缺氧诱导因子-1α与EphA2在食管鳞状细胞癌中的表达及其相关性研究

目的 检测缺氧诱导因子-1α (HIF-1α) 蛋白与EphA2蛋白在食管鳞状细胞癌中的表达定位并探讨二者表达的相关性.方法 采用细胞免疫荧光法检测HIF-1α与EphA2在食管鳞状细胞癌细胞株Eca109中的表达与定位;采用免疫组化法检测HIF-1α与EphA2在41例食管鳞状细胞癌和25例正常食管组织中的表达;常氧和缺氧条件下,Western 印迹法检测食管鳞状细胞癌细胞株Eca109和TE13经RNA干扰(RNAi)技术特异性沉默HIF-1α后EphA2表达的变化.结果 ①细胞免疫荧光结果显示HIF-1α和EphA2均在Eca109细胞胞质表达.②免疫组化结果显示HIF-1α在食管鳞状细胞癌和正常食管组织中的阳性表达率分别为70.73%(29/41)和0%(0/25),两者比较差异有统计学意义(P<0.05).EphA2在食管鳞状细胞癌和正常食管组织中的阳性表达率分别为78.04%(32/41)和28%(7/25),两者比较差异有统计学意义(P<0.05).相关性检验提示HIF-1α和EphA2在食管鳞状细胞癌中表达呈正相关性(r=0.5654,χ~2=13.11,P<0.05).③ Western印迹结果显示在食管鳞状细胞癌细胞株Eca109和TE13中,EphA2表达随HIF-1α的沉默而受抑制.结论 HIF-1α与EphA2在食管鳞状细胞癌组织中呈高表达,且二者表达呈正相关;EphA2表达受HIF-1α的调控,可能为HIF-1α的靶基因.     

人脂肪干细胞外泌体对糖尿病周围神经病变的作用及其机制

目的探讨糖尿病周围神经病变(DPN)中神经鞘胚素蛋白表达的变化及人脂肪干细胞(ADSC)外泌体对神经鞘胚素蛋白表达变化的调节作用。方法该研究为前瞻性观察性临床研究联合实验研究。将空军军医大学第一附属医院(以下简称本院)2022年5月—2023年10月收治的13例符合入选标准的DPN患者(男9例、女4例, 年龄32～68岁)作为DPN组, 将本院该段时间收治的5例符合入选标准的非糖尿病患者(男4例、女1例, 年龄29～61岁)作为对照组。采集2组患者清创或截肢后弃用组织中的趾神经或腓肠神经组织, 行苏木精-伊红染色后观察神经组织的病理学变化, 行免疫荧光染色后观察神经组织中S100β、神经鞘胚素的蛋白表达并对神经鞘胚素蛋白表达进行定量, 分别采用蛋白质印迹法和实时荧光定量反转录PCR法检测神经鞘胚素的蛋白和mRNA表达(DPN组样本数均为13, 对照组样本数均为5)。取12只雄性3～5 d龄C57BL/6小鼠, 提取施万细胞, 并将细胞分为常规培养组(常规培养)、单纯高糖组(仅用高浓度葡萄糖溶液培养)、高糖+外泌体组(用高浓度葡萄糖溶液和提取的人ADSC外泌体培养)。培养24 h后, 采...     

新型冠状病毒肺炎疫情下的中医四诊信息采集方法概述

通过对新型冠状病毒肺炎疫情期间的中医四诊信息采集方法进行归纳分类,并对当前现代化的四诊信息采集技术进行总结,各述优劣,以期两者可以有机结合、优势互补,服务于新型冠状病毒肺炎抗疫一线,为中医抗疫工作提供帮助.     

穿龙薯蓣皂苷对障碍再生性贫血小鼠骨髓T细胞亚群的影响*

[目的]观察穿龙薯蓣皂苷治疗再生障碍性贫血(简称再障)小鼠的疗效及骨髓CD3+、CD4+、CD8+的表达。[方法]建立再障小鼠模型,各组分别喂饲生理盐水、穿龙薯蓣皂苷、环孢菌素A、雷公藤多苷,连续给药14 d,取骨髓单个核细胞培养24h后,应用流式细胞术检测CD3+、CD4+、CD8+的表达水平。[结果]模型组CD3+和CD4+表达明显低于正常组(P<0.05),CD8+表达高于正常组(P<0.05),各治疗组与模型组相比均有明显差异(P<0.05),穿龙薯蓣皂苷中、高剂量组与正常组相比差异无统计学意义(P>0.05),与两阳性对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。CD4+/CD8+比值:模型组低于正常组(P<0.05),中剂量组与模型组相比有明显差异(P<0.05),其余各治疗组与模型组相比均无明显差异(P>0.05)。[结论]薯蓣皂苷能调节提高再障小鼠骨髓CD3+、CD4+的表达,抑制小鼠骨髓CD8+的表达,促进CD4+/CD8+比值的恢复,从而抑制骨髓T细胞的异常激活,促进骨髓造血功能的恢复。