角膜基质细胞体外长期培养过程中生物学特性的改变

目的 研究兔角膜基质细胞在体外长期培养传代过程中,细胞增殖能力和胞外基质表达水平的改变。方法 取体外培养兔角膜基质细胞,由光镜对各代细胞的形态学变化进行观测。通过对各代细胞生长曲线的绘制,得出其各自的群体倍增时间;MTT法比较各代细胞增殖能力的改变。RT-PCR和Western杂交检测各代细胞中Ⅰ、Ⅲ型胶原表达水平的改变;爱茜蓝法检测糖胺聚糖(GAG)的含量。结果 体外培养兔角膜基质细胞随着传代的进程,逐渐显现衰老的形态特征。细胞群体倍增时间由第7代起显著延长(P<0.01);MTT比色法的结果亦显示,第7代细胞的增殖能力开始大幅下降(P<0.01)。第9-11代时,Ⅰ、Ⅲ型胶原在mRNA和蛋白水平的表达都有明显减少(P<0.01),降至第1代细胞的30％左右;GAG的含量也降至40％左右。结论 兔角膜基质细胞经历长期体外培养后,细胞增殖能力和胞外基质表达水平显著下降,逐渐丧失原有的功能。但作为构建组织工程化角膜的种子细胞,在它的生物学特性未发生改变之前,经3次传代培养,获取的细胞量达到组织块消化所得细胞的240倍左右,已足以用于构建之用。     

腹腔镜与结肠镜联合治疗早期结直肠肿瘤的临床效果分析

目的 分析腹腔镜联合结肠镜治疗早期结直肠肿瘤的临床疗效,进一步说明双镜联合技术在早期结直肠肿瘤治疗中的应用价值。 方法 回顾性分析2014年1月-2017年5月在江苏大学附属医院应用双镜联合技术治疗31例早期结直肠肿瘤患者的临床资料,结肠镜进行全结直肠内病灶探查并定位,术中根据快速冰冻病理结果选择在腹腔镜下行相应手术治疗。 结果 31例均顺利完成腹腔镜联合结肠镜手术,22例术前诊断为Ⅰ期结直肠癌,术后诊断Ⅰ期20例(T1N0M0期13例,T2N0M0期7例),Ⅲ期2例(T2N1M0期)。9例术前诊断为癌前病变,术后病理诊断为高级别上皮内瘤变2例,7例为高级别上皮内瘤变伴局灶癌变。其中6例患者为多灶病变同期行肠管其他部位息肉切除术,术中快速冰冻病理证实为低级别腺瘤样息肉,没有追加手术。31例均获随访,全部患者均术后半年门诊复查肠镜,以后每年复查1次,同时监测肿瘤标志物。随访时间6~42个月,中位时间为32个月,随访期间未见有复发转移患者。1例术后2年死于脑梗塞,其余存活至今。 结论 腹腔镜联合结肠镜技术治疗早期结直肠肿瘤可发挥两者优势,尤其适用于单镜难以定位或完全切除的病变,可提高治疗精确性及手术安全性。      

成人血源性间充质干细胞的分离和鉴定

目的建立一种分离、培养扩增成人血源性间充质干细胞(MSCs)的方法进行鉴定,并与骨髓源性MSCs比较生物学特性。方法30名成年志愿者随机平分为二组,一组直接抽静脉血,并细分为全血细胞法组和外周血密度梯度离心法组,同时抽骨髓为骨髓密度梯度离心法组;另一组为血细胞分离机法组。各组进行细胞存活率、集落形成率、形态学、流式表型分析、胶原染色等研究。结果外周血密度梯度离心法分离成人静脉血后培养,贴壁细胞呈梭形,集落形成率为(0.12±0.08)/106单个核细胞,传代扩增到第5代时每份平均细胞数达51.4674×106,表达CD44、CD54、CD105和CD166,不表达CD14、CD34、CD45和CD31,细胞分泌Ⅰ、Ⅲ型胶原。全血细胞法和血细胞分离机法获得的细胞不能连续多次传代。结论外周血密度梯度离心法比全血细胞法和血细胞分离机法简单,贴壁细胞培养扩增容易,获得的血源性MSCs与骨髓源性MSCs的生物学特性相似。     

应用hMSCs-脱钙骨复合物体内构建软骨组织的实验研究

目的 观察成软骨诱导后人骨髓间充质干细胞和脱钙骨复合物在裸鼠皮下组织形成情况。方法 从志愿者髂前上嵴处抽取骨髓,得到骨髓间充质干细胞,将第1代的骨髓间充质干细胞密度调整到1.5×107/mL,均匀接种于脱钙骨,培养4 h后以含有TGF-β3(10 ng/mL)DMEM培养液的培养作为实验组,加10％FBS的DMEM为对照组Ⅰ,空白材料为对照组Ⅱ,体外培养6 d,嘲植到裸鼠皮下。回植前及回植后2、4、6、8、10周取材,石蜡切片进行Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原的免疫组化、Masson’s、Alician Blue’s染色鉴定。结果 回植前及回植后各时间段,实验组免疫组化测到Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原的表达,对照组未见Ⅱ型胶原表达;实验组Masson、Alician染色可见材料内的胶原分泌非常旺盛,有硫酸化酸性粘多糖沉积,对照组则表达量极少。结论 诱导后人骨髓间充质干细胞一脱钙骨复合物在裸鼠皮下能表达特异性软骨基质。     

国人卵圆孔穿刺深度X线解剖测量的研究

目的 :为探讨国人卵圆孔穿刺深度提供X线解剖依据。方法 :35例颅骨 (70侧 )标本 ,将卵圆孔涂钡后 ,摄取球管向头侧倾斜 2 0°角度的头颅侧位片 ,测量卵圆孔与内耳门中心点到前床突尖端连线 (耳—床线 )之间的距离 (孔—线距 ) ,进行统计学处理。结果 :左右各组孔—线距值均不能拒绝总体为正态的假设 (P >0 0 5 ) ;左右两侧之间孔—线距值有差别 ,具有统计学意义 (P <0 0 5 )。左侧孔—线距参考值为 (14 .71± 1.4 6 )mm ,右侧为 (15 .5 7± 1.80 )mm。结论 :在X线图像上以耳—床线为基线、孔线距参考值为标准 ,可间接测算卵圆孔的位置 ,推算卵圆孔穿刺时穿刺针进针的深度。     

不同类型人软骨细胞体外生物学特性比较

目的　通过研究人耳软骨和肋软骨两种不同类型软骨细胞体外分离、增殖、老化规律 ,为选择合适的组织工程种子细胞提供依据。方法　取小耳畸形残耳软骨和肋软骨 ,体外分别用0 .0 5 %和 0 .15 %Ⅱ型胶原酶消化 16h分离 ,台盼蓝染色计活细胞数 ,得原代细胞获得率。体外单层培养 6代 ,观察形态学改变 ,群体倍增时间 (PDT ) ,免疫细胞化学染色及逆转录 聚合酶链反应(RT PCR)检测Ⅱ型胶原和Aggrecan评定软骨细胞老化规律。 结果　人残耳软骨组织平均细胞获得率为 ( 1.5 4± 0 .14 )× 10 6/ g ,肋软骨平均获得率为 ( 0 .46± 0 .0 9)× 10 6/ g ,两类软骨细胞P1的PDT最短 ,前 3代增殖力较强 ,P3 以后PDT明显延长 ,P6代细胞不再增殖。免疫细胞化学及RT PCR均证实耳软骨细胞 3代内、肋软骨细胞 4代内软骨细胞表型稳定。结论　第 2代的耳软骨细胞与第 3代肋软骨细胞可作为人体内组织工程化软骨构建的种子细胞。     

皮肤成纤维细胞构建组织工程化猪角膜基质样组织

目的 探讨以皮肤成纤维细胞为种子细胞,在猪角膜微环境中构建组织工程化角膜基质组织的可行性.方法 分离获取胎猪皮肤成纤维细胞经体外培养、扩增.通过转染绿色荧光蛋白(GFP)基因标记细胞,示踪细胞的转归.选取第3代的细胞接种于可吸收生物材料聚羟基乙酸(PGA),形成细胞-生物材料复合物,体外培养1周后,移植于猪的角膜基质层内,于第8周取材进行大体、组织学检查及超微结构观察.以角膜基质细胞为种子细胞构建的组织工程化角膜基质组织作为对照.结果 术后8周,实验组角膜逐渐恢复透明,与对照组角膜无明显差别.组织学检查显示形成新生的角膜基质样组织,呈板层状,排列较规则,与对照组角膜组织相似.超微结构观察及胶原纤维直径检测显示,实验组与对照组角膜组织差异无统计学意义.荧光显微镜观察到GFP阳性细胞存在.结论 皮肤成纤维细胞可能替代角膜基质细胞,在猪角膜内构建角膜基质样组织.     

带蒂胸锁乳突肌移位术修复晚期面瘫

目的　探讨应用带蒂胸锁乳突肌移位术动态修复晚期面瘫畸形的疗效。方法　 1999年 12月以来 ,采用带蒂胸锁乳突肌移位术修复 7例晚期面瘫 ,将胸锁乳突肌的胸骨头及锁骨头移位至患侧口周 ,替代瘫痪的口周肌肉 ,修复因面神经瘫痪所致的口鼻歪斜畸形及活动障碍。保留副神经的其余功能。结果　术后立即矫正静态时口鼻歪斜畸形 ,1周后已能活动患侧口角。术后 1个月 ,经训练能恢复笑容。经 10个月随访 ,所有患者口部活动恢复满意。结论　带蒂胸锁乳突肌移位术能修复晚期面瘫所致的口鼻畸形 ,并能重建口部表情功能     

应用组织工程口腔黏膜重建尿道的初步实验研究

目的 探讨兔口腔黏膜细胞的体外培养方法,并以其为种子细胞与异体膀胱黏膜下脱细胞基质(bladder acellular matrix graft,BAMG)复合,构建组织工程尿道. 方法 18只10周龄雄性新西兰大耳白兔,体重0.3～0.5 kg.取其中12只兔口腔黏膜组织,分离获得口腔黏膜细胞.将口腔黏膜细胞分别接种于有3T3细胞及无3T3细胞的培养皿进行培养,接种后第2天于倒置相差显微镜下观察细胞形态变化,绘制细胞生长曲线,观察生长增殖情况,并行免疫荧光组织化学染色鉴定.取余6只兔膀胱,经脱细胞处理制备BAMG,随机取1 cm×1 cm组织行HE染色,观察脱细胞效果.将接种于有3T3细胞培养皿培养获得的第2代口腔黏膜细胞种植于BAMG上,培养1周后,行HE染色及扫描电镜观察口腔黏膜细胞与BAMG的复合状况. 结果 倒置相差显微镜下观察,接种于有3T3细胞培养皿的口腔黏膜细胞可传至7～8代,其细胞形态均一,功能良好;无3T3细胞培养皿的口腔黏膜细胞形态多样,传至第2代时,即开始出现老化.细胞生长曲线显示,两种方法培养的口腔黏膜细胞均于第8天开始呈对数增长,第14天达峰值.接种于有3T3细胞培养皿的口腔黏膜细胞,培养至融合时所获得细胞数量明显多于接种于无3T3细胞培养皿的u腔黏膜细胞.两种方法培养的口腔黏膜细胞行免疫荧光染色,均呈绿色荧光.HE染色观察,BAMG经脱细胞处理后未见细胞,脱细胞效果良好.复合培养1周后,HE染色及扫描电镜观察口腔黏膜细胞与BAMG复合良好. 结论 兔口腔黏膜细胞可在体外成功培养、扩增,与同种异体BAMG复合后生长良好,为构建组织工程尿道提供了一种新的选择.     

双能量CT心肌灌注碘图图像质量与重组时相的关系

目的 探讨第2代双源CT（DSCT）心肌灌注图像质量与重组时相的关系。方法 收集接受DSCT双能量成像方法扫描的患者,选取其中冠状动脉正常者28例。采用回顾性心电门控间隔5%重建出30%~80% R-R时相的图像,采用280 ms全期相时间窗,定量测量各R-R间期的每段心肌灌注碘图图像的伪影面积,计算心底部、中部、心尖部、心尖层面平均各段的伪影面积,并进行统计学分析。结果 心底部、中部、心尖部、心脏整体平均各段伪影面积差异有统计学意义（P均<0.01）,均以60% R-R间期时相最小[（0.31±0.28）cm²、（0.18±0.23）cm²、（0.13±0.13）cm²）、（0.22±0.18）cm²]。心尖伪影面积不同R-R间期时相差异无统计学意义（P=0.634）。60% R-R间期心底部、中部、心尖部、心尖各层面平均各段碘图伪影面积差异有统计学意义（F=3.701,P=0.014）,心尖部伪影面积最小,与中部差异无统计学意义（P>0.05）,但明显低于其他部位的伪影面积（P<0.05）。结论 第2代DSCT采用280 ms全期相时间窗可提供优良的心肌灌注碘图,其中以60%左右R-R间期图像质量最佳。