胚胎和新生大鼠神经干细胞培养与分化的特性比较

目的:比较胚胎和新生大鼠神经干细胞的体外培养与诱导分化特性,为脊髓损伤、神经再生等疾病的治疗提供参考依据。方法:实验于2004-11/2005-05在安徽医科大学微生物学实验室完成。选取清洁级孕12d的SD大鼠和新生1d的SD大鼠各1只。①分别将胚胎鼠和新生鼠的大脑皮质体外分离培养,每3天换液1/2,每7d传代1次。②选取第3代神经干细胞克隆球吹打成单细胞悬液接种于预先涂有多聚赖氨酸的盖玻片的12孔培养板中,补足神经干细胞分化培养基,继续培养7d,进行神经干细胞的诱导分化。③通过形态学观察和Nestin免疫细胞化学鉴定,以及5-溴脱氧尿核苷法检测神经干细胞的增殖能力,并检测分化成熟的神经细胞标志抗原MAP2、胶质纤维酸性蛋白抗原的阳性细胞数及细胞总数。结果:①胚胎鼠与新生鼠原代、传代、分化培养的细胞形态学观察结果:胚胎鼠形成的神经球数量和每个神经球所含细胞数均多于新生鼠。胚胎鼠与新生鼠培养的球形克隆均可连续传代获得大量亚克隆细胞,并诱导分化成3种主要形态的神经细胞。②神经干细胞的鉴定结果:原代和传代的细胞均呈神经干细胞标志性蛋白-Nestin阳性反应,结合悬浮培养有神经球形成的现象,证明所观察细胞为神经干细胞。③胚胎鼠与新生鼠不同时间段单位面积Nestin与5-溴脱氧尿核苷阳性细胞数、细胞总数、阳性率的比较:两组培养1,3,7,11,14,28d后单位面积Nestin与5-溴脱氧尿核苷阳性细胞数、细胞总数及阳性率均有显著差异(t=2.41～92.71,P<0.01或0.05)。④胚胎鼠与新生鼠神经干细胞分化指标的测定:胚胎鼠及新生鼠的MAP2阳性细胞分别为(32.6±5.6)%,(30.7±6.7)%,抗原胶质纤维酸性蛋白阳性细胞分别为(47.5±9.4)%,(50.3±8.9)%,P均>0.05。结论:从胚胎鼠和新生鼠的大脑皮质均能够成功分离培养出神经干细胞,表达神经干细胞特异性标志蛋白Nestin,并具有自我更新及体外扩增传代能力。胚胎鼠神经干细胞数量多且增殖能力强,更适合用于神经再生与修复的临床治疗。     

单髁置换术与全膝关节置换术后人工关节遗忘程度的比较

目的探讨分别接受膝关节单髁置换术(unicompartmental knee arthroplasty,UKA)和全膝关节置换术(total knee arthroplasty,TKA)治疗膝内侧骨关节炎患者术后主观感受上的差别,并通过人工关节被遗忘指数(forgotten joint scores,FJS)评分系统分析二者的差异性。方法回顾性分析2014年1月至2017年1月在我院同期行单侧膝关节UKA与TKA治疗膝骨关节炎的患者共60例,分为UKA组和TKA组,每组30例患者,其中UKA组男18例,女12例;年龄55~76岁,平均(63.9±6.7)岁;身体质量指数(body mass index,BMI)平均为(22.4±1.5)kg/m~2。TKA组男17例,女13例;年龄55~75岁,平均(62.6±5.6)岁;BMI平均为(22.0±1.1)kg/m~2。分别记录两组患者术后1年和末次随访时的FJS评分和美国特种外科医院(the hospital special surgery,HSS)膝关节评分。结果所有患者均获随访,随访时间12~38个月,平均(18.3±3.9)个月。术后1年和末次随访时UKA组FJS评分分别为(70.6±3.3)分、(71.8±3.2)分;TKA组术后1年及末次随访时FJS评分分别为(59.3±3.1)分、(59.8±2.4)分;两组患者在同一随访时间段内组间FJS评分比较差异有统计学意义(P0.05),而同组间FJS评分在同一随访时间段比较差异无统计学意义(P0.05)。术后随访1年时UKA组的HSS评分明显优于TKA组(P0.05),末次随访时,两组患者的HSS评分比较差异无统计学意(P0.05)。结论在治疗膝关节内侧间室骨关节炎方面,接受UKA的患者比接受TKA的患者假体的自我化程度更高,初期疗效也更加明显。     

大鼠臂丛神经损伤后对低级中枢运动神经元凋亡的影响

目的观察大鼠臂丛神经条件性损伤对相应脊髓节段灰质前角运动神经元凋亡的影响方法将35只成年Wasler大鼠分为3组：正常对照组(n=5)、臂丛神经切割伤组(A组，n=15)、臂丛神经撕脱伤组(B组，n=15)。A、B两组按术后取材时间(3、7、14、21、28d)分为5个时间组，每组3只大鼠。各时间组取大鼠的C5～T1脊髓节段，以HE染色及TUNEL法检测细胞的凋亡情况结果正常组及A、B组非损伤侧脊髓灰质前角未检出凋亡细胞；A、B两组伤后早期(3d)脊髓灰质前角即有凋亡细胞出现，A组在伤后14d、B组在伤后7d凋亡率达高峰，以后随时间推移逐渐降低；各时间组细胞凋亡程度B组明显高于A组，差异均有显著性。结论臂丛神经损伤后早期(3d)，其所属神经元即有凋亡，且损伤越重，凋亡速度越快，程度越高。     

38例游离组织移植临床应用

目的 确定患者四肢大面积缺损行皮瓣、肌皮瓣移植及游离骨移植术和手指缺损游离足趾移植再造手指术的最适宜手术时机。方法 应用吻合血管的游离复合组织移植修复四肢大面积软组织缺损；吻合血管游离足趾移植再造手指；吻合血管的的游离骨移植修复骨缺损和先天性胫骨假关节。结果 临床应用３８例，３６例成功，２例失败。急诊行游离（肌）皮瓣移植术９例，４例出现血管危象，１例皮瓣坏死；延期（肌）皮瓣移植４例无血管危象；急诊     

内皮型一氧化氮合酶基因疗法防治小血管吻合口血栓形成的实验研究

目的 探讨内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthtase,eNOS)基因局部转基因表达对小血管吻合口血栓形成的影响.方法 大鼠30只,随机分为实验组和对照组,切断大鼠双侧股动脉,行原位端端吻合,并向吻合口血管腔内注入真核表达载体pcDNA3.0-eNOS质粒与脂质体 Lipofectin 2000的混合溶液(实验组)或真核表达载体pcD-NA3.0质粒与脂质体Lipofectin 2000的混合溶液(对照组),使之在腔内滞留30 min.术后d 5在两组中随机各取5只大鼠,切取以吻合口为中心,长1.5 cm股动脉,将其分成3等份,每份0.5 cm,分别行RT-PCR、Western blotting和组织化学法检测以了解eNOS表达情况.其余大鼠于术后14d处死,切取以吻合口为中心0.5 cm长血管段行病理形态学检测.结果 试验组RT-PCR在591 bp处出现明显条带;Western blotting检测试验组eNOS含量分别为0.517±0.140,明显高于对照组0.248±0.062.;组织化学法检测试验组一氧化氮(nitric oxide,NO)含量(7.6±0.3)μmol/L,明显高于对照组(2.4±0.2)μmol/L.实验组吻合口血栓出现率明显低于对照组(P<0.01).结论 脂质体介导的携带eNOS基因的真核表达载体可以在小血管吻合口中成功表达,并且能有效地防止小血管吻合口血栓的形成.     

机械性脊髓损伤模型的建立及其评价

目的:了解国内外机械性脊髓损伤模型的研究进展,为临床治疗脊髓损伤提供理论依据。资料来源:应用计算机检索Medline、万方数据库、重庆维普数据库和学术期刊数据库,检索时间段为1983-01/2004-07,检索内容为关于机械性脊髓损伤模型的文章,英文检索词“animalmodel,spinalcordinjury”,中文检索词“脊髓损伤,动物模型”。资料选择:对检索到的文献进行初审,排除题目中不含“脊髓、模型”等词的文章。然后剩余文献查找全文。资料提炼:共收集中文112篇,排除题目中不含“脊髓、模型”等词的文章后纳入29篇。收集到含“animalmodel,spinalcordinjury”英文文献119篇,与模型建立有关19篇,与治疗有关12篇,与解剖和功能评定有关6篇。进一步查看全文,排除重复的文献,最后对25篇文献进行综述。资料综合:机械性脊髓损伤模型的种类有锐性损伤模型(如脊髓全切模型、脊髓半切模型等)、挫伤型模型(包括脊髓背侧损伤模型和脊髓腹侧损伤模型)和钳夹压迫型脊髓损伤模型,各模型均有着各自的特点,可用来研究解决不同的神经生物方面的问题。机械性脊髓损伤模型的研究目前主要集中在构建,解剖和功能变化及治疗运用。结论:此模型的建立对进一步了解机械性脊髓损伤的发病机制,研究此种损伤的病理生理改变及筛选有效的预防治疗提供了良好的基础。     

前入路减压内固定术治疗胸腰椎爆裂骨折

目的：评价前入路减压植骨内固定治疗胸腰椎爆裂型骨折的效果。方法：对15例胸腰椎爆裂骨折患者行前路减压，切除椎体后缘骨块，解除对硬膜的压迫，上下椎体间植骨融合内固定。结果：随访6～24个月，平均9个月，神经功能平均有1级以上的恢复。植骨块全部融合，椎体高度恢复满意，椎管容量扩大，无骨片残留。结论：该术式疗效肯定，但要严格掌握手术要点、适应证。     

Wnt3a基因沉默对内皮祖细胞增殖的影响

目的 探讨wnt3a基因沉默对内皮祖细胞( EPCs)增殖的影响. 方法 体外分离、培养及鉴定EPCs. 将沉默型pEGFP-shRNA-wnt3a重组质粒转染EPCs; Western blot法分析wnt3a 在 EPCs 中的表达变化;MTT 分析 wnt3a 沉默对EPCs增殖的影响. 结果 鉴定培养的细胞为EPCs;Western blot法结果提示pEGFP-shRNA-wnt3a转染EPCs后明显抑制了 wnt3a 蛋白的表达. MTT 提示沉默型 pEGFP-shRNA-wnt3a转染组吸光度值明显低于空白对照组. 结论 成功分离、培养出EPCs,wnt3a有效沉默明显抑制EPCs的增殖,为进一步的实验提供了基础.     

小鼠Wnt-3a基因的克隆、测序与真核表达载体的构建

1 材料和方法 1.1 材料 KM小鼠,孕13.5 d,安徽省实验动物中心提供. 大肠杆菌JM109由安徽医科大学分子生物学教研室提供. Trizol试剂盒、pSecTag2/Hygro B质粒(Invitrogen). 质粒小量提取试剂盒、 RT-PCR试剂盒(Promega);Ex Taq DNA聚合酶、T4 DNA连接酶,DNA Marker, pMD18-T Vector,限制性内切酶(TaKaRa).     

残甲（床）移植修复指端缺损

残甲（床）移植修复指端缺损尹宗生１陆颖辉２我们应用离断指残甲（床）移植结合三角皮瓣推移和远指间关节融合修复指端缺损２４例（３３指），成活２９指，效果满意。１临床资料本组２４例（３３指），年龄１３～４０岁。损伤原因：刀伤、电锯伤、钢丝伤及自行车链条伤等...