晶体中游离氨基酸的含量与白内障的关系

本文概述了关于晶体中游离氨基酸的研究以及在白内障晶体中游离氨基酸的变化。研究发现,晶体中游离氨基酸的含量大大高于房水和血浆中含量,表明晶体中游离氨基酸是通过膜的主动转运过程进入晶体的。晶体中有较高含量的谷氨酸和谷胱甘肽,这与晶体特殊的氧化还原功能有关。在糖尿病性和老年性白内障晶体中,游离氨基酸的含量都逐渐降低。     

实验室常用生物安全设备的使用与维护

为落实国家有关实验室生物安全的法规政策，提升实验室的管理水平，针对Ⅱ级生物安全防护医学实验室常用的生物安全柜、高压灭菌器、超净台和通风柜等防护设备，从设备的工作原理、操作规程和检定维护几方面进行了阐述，从而强调了生物安全设备安全操作和规范管理的重要性和意义，并结合自身工作介绍了经验与体会。     

H2O2和ouabain对培养晶体中Na K-ATPase活性的影响及与晶体混浊度的关系

在体外培养的条件下，大鼠晶体中Na K-ATPase可被1mmol／L ouabaia所抑制，抑制的程度随着ouabaia作用的时间而加强。鼠晶体被ouabain作用后，湿重增加，晶体膨胀，逐渐变为混浊，表明晶体中的Na K-ATPase在维持晶体中的离子浓度及渗透压平衡上起着重要作用。此外，通过H2O2对培养晶体的作用，表明晶体及晶体的Na K-ATPase易被氧化损伤．1mmol／L H2O2 20小时即可使晶体的Na K-ATPase活力下降56％，致晶体混浊。     

携带TIMP-4 cDNA的重组腺病毒载体的构建

目的 克隆细胞外基质金属蛋白酶组织抑制因子4(tissue inhibitor-4 of metalloproteinases,TIMP-4)基因,构建包装携带TIMP-4基因的重组腺病毒载体(Ad/T4),为基因治疗血管再狭窄的实验研究打下基础.方法 以人心脏cDNA文库为模板,应用PCR克隆TIMP-4基因,经DNA测序确定克隆结果.构建具有强启动子CMV,携带TIMP-4和报告基因GFP的穿梭质粒pAdTrack-T4,利用AdEassy系统,在大肠杆菌BJ5183经同源重组产生重组腺病毒质粒pAd/T4.脂质体介导转染293细胞,包装重组腺病毒载体(Ad/T4).结果 克隆出含TIMP-4全部编码序列的cDNA片断,并通过亚克隆和同源重组等将其重组入腺病毒,构建包装了重组腺病毒载体Ad/T4.结论 Ad/T4中含有TIMP-4和GFP的完整表达盒,可用于基因治疗的实验.     

辛伐他汀涂层内固定对大鼠骨质疏松骨折愈合晚期的影响

背景：降脂类药物辛伐他汀具有一定的促进骨形成作用潜能,局部应用效果更佳。先前研究对骨质疏松大鼠骨折愈合中期的观察证实辛伐他汀涂层内固定可促进骨质疏松大鼠骨折愈合,但其对骨折愈合晚期的影响未见报道。目的：观察局部应用辛伐他汀涂层内固定对骨质疏松大鼠骨折愈合晚期进程的影响。方法：将雌性SD大鼠分为单纯骨折组、骨质疏松性骨折组及辛伐他汀干预组。单纯骨折组仅暴露腹腔卵巢不予切除,其余2组采用双侧卵巢切除法建立骨质疏松模型。卵巢切除后6周,所有大鼠建立股骨中段开放性骨折模型,单纯骨折组、骨质疏松性骨折组及辛伐他汀干预组分别采用无涂层、聚乳酸涂层和辛伐他汀复合聚乳酸涂层克氏针内固定。骨折造模后12周分析骨折侧股骨骨密度,X射线摄片和苏木精-伊红染色分析骨折愈合情况,免疫组织化学分析骨形态发生蛋白2在骨折局部的表达。结果与结论：骨密度检测结果提示股骨全长及中段骨密度骨质疏松性骨折组、辛伐他汀干预组显著低于单纯骨折组,辛伐他汀干预组骨折部位骨密度显著高于骨质疏松性骨折组。X射线摄片结果提示,单纯骨折组骨折两端对位、对线良好,骨痂与骨皮质密度接近相同并相互连接,塑形基本完成;骨质疏松性骨折组愈合质量差,骨痂密度浅淡,部分标本仍见模糊的骨折线;辛伐他汀干预组骨折线消失,骨痂填满骨缺损,骨膜反应深,单纯骨折组、辛伐他汀干预组X射线评分显著高于骨质疏松性骨折组（P〈0.05）。苏木精-伊红染色提示,骨质疏松性骨折组骨折愈合进程较单纯骨折组延迟,辛伐他汀干预组骨小梁较骨质疏松性骨折组更规则有序。免疫组化结果提示各组大鼠骨形态发生蛋白2的表达水平差异无显著性意义。提示辛伐他汀局部应用可有效促进骨质疏松大鼠骨折愈合。     

大鼠面神经核的纤维联系-HRP逆行追踪研究

向大鼠一侧面神经核导入HRP,结果表明:延髓和脑桥同侧的Kolliker-Fuse核、三叉神经核、结合臂旁核和双侧的前庭内侧核、延髓中央网状核,中脑对侧的外侧丘系腹侧核、红核、上丘和双侧Cajal氏间位核均有向面神经核的直接投射。并在同侧下丘脑室旁核、未定带和底丘脑核发现逆行标记细胞。     

细胞因子微球加强骨髓间充质干细胞移植对猪心肌梗死的疗效

目的 通过观察血管内皮生长因子(VEGF)缓释明胶微球与自体骨髓间充质干细胞(MSC)联合移植于猪心肌梗死模型梗死周边区3周后MSC的生存情况,结合磁共振成像(MRI),阐明改善局部微环境对自体MSC移植于缺血心肌后转归的影响,并直观评价MRI对移植MSC在体示踪及半定量分析的可靠性.方法 以乳化冷凝法制备VEGF缓释明胶微球并评价其缓释性能.成年中华小型猪12头,抽取髂骨骨髓并制备自体MSC,以顺磁性氧化铁颗粒(SPIO)和4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-Diamidino-2-phenylindole dihydrochloride,DAPI)标记细胞.按照随机化表将动物分为MSC移植组及MSC-VEGF缓释微球联合移植组.开胸结扎冠状动脉左前降支制备小型猪心肌梗死模型后第14天,直视下经心外膜于MSC组动物心肌梗死周边区注射MSC(9×107),于MSC-VEGF缓释微球组注射MSC(9×107)及VEGF缓释明胶微球(含9 μg人重组VEGF165).细胞和(或)微球移植后24 h及21 d,磁共振FGRE序列T2*像检测干细胞移植点低信号区的面积及信号强度.病理组织学检测细胞移植区域心肌组织毛细血管密度及干细胞存活情况.结果 明胶微球平均粒径为(104.0±22.6)μm,体内、外缓释VEGF均可达到10 d以上.小型猪心肌梗死模型建立后第14天,梗死区面积为33.6%±8.9%.细胞移植后24 h,MSC注射点于MRI显示为边界清晰的卵圆形T2*低信号区,细胞移植3周后,两组注射点T2*低信号区面积均减小(P<0.05),其与正常心肌组织间的信号对比度均减低(P<0.05).MSC-VEGF缓释微球组移植点毛细血管密度高于MSC组[(15.2±5.4)个/高倍视野比(10.2±5.0)个/高倍视野,t=2.43,P<0.05].MSC-VEGF缓释微球组MSC注射点移植细胞数多于MSC组[(354±83)个/高倍视野比(278±97)个/高倍视野,t=3.14,P<0.05],而MSC凋亡率则小于MSC-VEGF缓释微球组[(6.4±4.1)%比(11.9±4.8)%,t=2.97,P<0.05].结论 VEGF缓释明胶微球可以改善移植于缺血心肌区3周后MSC的生存情况.移植干细胞所生存的微环境是影响其转归的重要因素.MRI对于移植干细胞位置的在体示踪是可靠的,但不能作为对移植细胞定量或半定量分析的依据.     

高血压大鼠左室肥厚差异蛋白质组学研究

目的运用蛋白质组学技术探讨腹主动脉缩窄(AAC)高血压大鼠左室肥厚差异蛋白质表达及其在左室肥厚发生机制中的作用。方法 8周龄 SD 大鼠随机分为 AAC 组及假手术组,9周后行心脏超声、血流动力学、病理学检查,并对二组心肌组织行双向电泳(2DE)找出差异点,MALDI-TOF-MS 质谱鉴定蛋白质及 West-ern-blot 验证。结果 AAC 组心率、收缩压、舒张压、左室收缩末压、左室压力变化速率、室间隔厚度与左室后壁厚度及心质量、心质量/体质量较假手术组均显著增加(P<0.05),心肌细胞排列紊乱、细胞核增大、畸形、染色加深。2DE 中以浓度相差2倍以上为差异点,鉴定的21个蛋白质中,AAC 组相对于假手术组有14个蛋白质上调,4个蛋白质下调,3个蛋白为 AAC 组新出现,上调蛋白质包括:肌球蛋白轻链、心肌α肌动蛋白1蛋白原、β肌球蛋白重链、3磷酸甘油醛脱氢酶、线粒体核糖体蛋白 L15、G 蛋白偶联受体34、酪氨酸蛋白激酶 ZAP-70、RIKENcDNA 9030617003、天冬氨酸 tRNA 合成酶等,下调蛋白为 H~-转运 ATP 合成酶、L-3脂酰辅酶 A 脱氢酶等,两组蛋白表达差异有统计学意...     

大鼠nelin基因干扰质粒的构建及其体外抑制效果研究

目的构建大鼠nelin基因干扰质粒并对其进行体外抑制效果验证,为研究nelin在心脏发育、心肌肥厚、心衰及其它心脏疾病中的作用提供有效的研究工具。方法提取大鼠心肌组织RNA,逆转录为cDNA,设计合成含BamHI和EcoRI酶切位点的引物,以大鼠cDNA为模板PCR扩增获得nelin基因,定向克隆入pEGFP-N1-3FLAG载体,测序验证。以克隆得到的大鼠nelin基因为模板,设计合成候选干扰序列,亚克隆至pGCSIL-U6载体,获得干扰质粒。以nelin基因干扰质粒和重组表达质粒共转染HEK293T细胞,WesternBlot方法检测干扰效果。结果成功克隆了大鼠nelin基因并构建了nelin基因重组表达载体pEGFP-N1-3FLAG-rNelin。设计构建的4个干扰质粒(靶位点分别为+370-388位,+376-394位,+545-563位,+1206-1224,命名为pGCSIL-U6-nelin/siteⅠ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ)均可显著降低nelin基因的表达,尤以靶向(+370-388位)位点即pGCSIL-U6/nelin-siteI质粒的干扰效果最佳。结论本实验构建的大鼠nelin基因特异性干扰质粒能从蛋白水平上高效特异地抑制ne-lin基因表达,为进一步开展其功能研究奠定了基础。