腺病毒载体介导的胞嘧啶脱氨酶/单纯疱疹病毒-1-胸苷激酶双自杀基因对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的：观察构建的含胞嘧啶脱氨酶／单纯疱疹病毒－1－胸苷激酶（CD／TK）双自杀基因的重组腺病毒对血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖的影响。方法：将含CD／TK单、双自杀基因的重组腺病毒感染培养至3－5代的大鼠VSMCs。荧光显微镜观察报告基因绿色荧光蛋白的数量确定感染效率。用MTT法检测前体药物对各转基因组细胞增殖的抑制作用。结果：单、双自杀基因组腺病毒均可100％感染VSMCs。当感染复数（M．0．I）为10时，双自杀基因组靶细胞的存活率仅10％，明显低于腺病毒（Ad）－TK（43％）和Ad-CD(64%)单基因组（P＜0．05）。当M．O．I≤20时双自杀基因能够对细胞产生最大（90％）杀伤而CD、TK单基因组和单基因共转染组则不能，而且双基因组所需前体药物的浓度（无环鸟苷0．1μg/ml,5－氟胞嘧啶10μg/ml)低于单基因组（无环鸟苷0．5μg/ml，5-氟胞嘧啶50μg/ml）。双基因组的TK或CD基因单独作用时对细胞的抑制作用接近或低于相应的单基因组。结论：双自杀基因共表达腺病毒载体对VSMCs的抑制作用、安全性及可调控性均优于单基因。     

初步筛选心血管相关基因——表达序列片段测定法

目的从正常人胎儿心脏ｃＤＮＡ文库中，用ＤＮＡ自动测序的方法筛选心血管相关基因。方法（１）人胚胎心ｃＤＮＡ文库的构建；（２）挑取有目的基因片段插入的噬菌斑，选用正向Ｔ３和反向Ｔ７引物做ＰＣＲ扩增；（３）直接使用其ＰＣＲ产物做ＤＮＡ测序模板，用荧光标记的Ｔ３Ｂ引物做再次ＰＣＲ扩增；（４）用ＤＮＡ测序仪（ｐｈａｒｍａｃｉａ）测定基因表达序列片段（ＥＳＴｓ）；（５）将所获得的ＥＳＴｓ输入Ｇｅｎｅｂａｎｋ数据库做同源序列分析。结果（１）所构建的人胎儿心脏ｃＤＮＡ文库的库容量为１×１０９克隆，平均目的基因片段１．２～１．５ｋｂ，ＰＣＲ产物阳性克隆检出率高达７０％以上，用６％尿素－聚丙烯酰胺凝胶电泳５ｈ，可测ｃＤＮＡ序列片段２１０～５５０ｂｐ，平均３００ｂｐ；（２）在所测３１３２个克隆的ＥＳＴｓ中，新ＥＳＴｓ为４７．４％，已知序列片段为４４．１％。结论利用人胎儿心脏ｃＤＮＡ文库测定ＥＳＴｓ是筛选心血管基因的有效方法；构建高质量的ｃＤＮＡ文库是成功测定ＥＳＴｓ的保证。     

房水蛋白的研究

充满眼前、后房的房水在维持眼球正常生理功能上起着重要作用。当由各种原因引起房水生成量增多或流出障碍时,都会使眼压升高,引起青光眼或角膜水肿。当房水的化学成分发生改变,可以出现视力降低,房水闪光阳性。目前,房水产生和流出的机制已被阐明,但关于房水内含有的成分例如:电解质、酶和蛋白质的性质及其含量仍在研究之中。这里只介绍一些作者对房水蛋白的研究概况。     

用宫腔镜代替羊膜镜观察孕妇羊水33例报告

在高危妊娠时,常常合并胎儿宫内隐性窘迫,当胎儿乏氧时,羊水被胎儿排出的粪便污染,使羊水变成黄色,使用宫腔镜代替羊膜镜直接观察羊水的改变,可有助于早期发现胎儿乏氧,以便及时处理。我院用宫腔镜代替羊膜镜初步观察33例病人,现将结果报告如下。     

基质金属蛋白酶2基因多态性与缺血性收缩性心衰预后相关

目的基质金属蛋白酶家族（Matrix metalloproteinases,MMPs）是一组蛋白溶解酶系,在心肌细胞外基质降解过程中发挥重要作用。MMP-2作为家族中的重要成员,在心力衰竭心肌重构过程中起关键作用。我们推测MMP-2基因多态性可能会影响收缩性心衰的预后。方法对387位缺血性收缩性心衰患者进行随访,用限制性片段长度多态性的方法（restriction fragment length polymorphism,RFLP）分析MMP-2基因的三个单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphisms,SNPs）位点rs243864,rs243866,rs17859821。结果随访到335位患者,随访率86．6％。在随访期间（0～47个月,中位随访时间24个月）,有72例（21．5％）患者死亡,56例（16．7％）患者因心衰再次入院,3例（0．9％）患者再次心肌梗塞,24例（7．2％）再次血运重建。1年、2年、3年的生存率分别是86％、79％、73％。MMP-2 rs17859821 A等位基因携带者全因死亡率、心源性死亡率、心衰死亡率和主要心脏不良事件率（major adveme cardiac event,MACE）均高于GG基因型者（OR=0．513,0．416,0．472,0．671;P=0．010,0．002,0．021,0．022）。使用Cox回归分析校正年龄、束支传导阻滞、LVEF和NYHA分级后,A等位基因携带者心源性死亡率和心衰死亡率仍显著或临界显著低于GG基因型者（OR=0．475,0．518;P=0．010,0．050）。结论研究结果提示携带MMP-2 rs17859821A等位基因的缺血陛收缩性心衰患者预后较好。     

风湿性心脏病心力衰竭患者抗心脏β_1和M_2受体自身抗体的研究

目的：探讨抗心脏Ｇ－蛋白偶联型β１ 和Ｍ２ 受体的自身抗体是否与风湿性心脏病（ＲＶＨＤ）心力衰竭有关。方法：以心脏Ｇ－蛋白偶联受体β１ 和Ｍ２ 细胞外第二环表位肽段序列的合成肽作为抗原,应用酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）技术检测５０ 例ＲＶＨＤ患者和４１ 例正常人血清中抗心脏β１ 和Ｍ２ 受体的自身抗体。结果：５０ 例ＲＶＨＤ心力衰竭患者中有２０ 例存在抗心脏β１ 受体自身抗体（４０．０％ ）,正常组仅５ 例（１２．２％ ）;前组又有２４ 例存在抗心脏Ｍ２ 受体自身抗体（４８．０％ ）,正常组仅４ 例（９．８％ ）。ＲＶＨＤ组β１ 和Ｍ２ 自身抗体的滴度分别为１∶１０４ 与１∶１１７,正常组为１∶４０ 与１∶２４（Ｐ＜ ０．０５）;心功能Ⅱ～Ⅲ级的阳性率及抗体滴度也明显高于心功能Ⅳ级。结论：抗心脏β１ 和Ｍ２ 受体的自身抗体与ＲＶＨＤ有关,这两种自身抗体可能参与ＲＶＨＤ心力衰竭的病理改变。     

生殖支原体与复发性泌尿道及生殖道感染的调查

目的探讨生殖支原体属(Mg)与复发性泌尿生殖道感染是否有关。方法采用PCR技术对322例泌尿生殖道感染患者及101例健康对照组的分泌物标本进行Mg检测,并对患者与健康对照组、初诊与复诊患者的Mg阳性率进行比较。结果 322例泌尿生殖道感染患者Mg阳性51例占15.8%,其中162例初诊患者Mg阳性16例占9.9%,160例复诊患者Mg阳性35例占21.8%;101例健康对照组Mg阳性2例(2.0%),患者与健康对照组、初诊与复诊阳性率差异有统计学意义(P<0.01)。结论生殖支原体与泌尿生殖道感染的出现、持续存在和复发密切相关。     

增龄因素对大鼠正畸牙齿移动中牙周组织内RANKL因子表达的影响

目的 探讨增龄因素对大鼠正畸牙齿移动过程中牙周组织内核因子-kB受体活化因子配体(RANKL)表达的影响.方法 用幼鼠(A组,35只)和成鼠(B组,35只)建立大鼠牙齿移动模型,以加力移动的左上第一磨牙的牙周膜和邻近牙槽骨为实验对象,免疫组化法检测相应牙周组织内RANKL因子的表达变化.结果 RANKL因子的阳性表达主要位于压力侧牙周组织内的牙周膜细胞和骨陷窝的破骨细胞中.加力后,A组和B组移动牙齿压力侧牙周组织内的RANKL因子表达均增强,峰值分别出现于第1周和第3周.与B组相比,A组加力后第3天和第1周的RANKL阳性表达明显增加,而第3、4、6、8周则减少(P＜0.05).结论 增龄因素使得RANKL因子的表达具有不同的时相性变化规律.     

腺病毒过表达TNNI3K基因对成年大鼠心肌细胞肌丝钙敏感度的影响

目的检测TNNI3K基因过表达对成年大鼠心肌细胞肌丝钙敏感度变化的影响,为进一步研究TNNI3K基因在心肌收缩功能、心肌肥厚、心衰及其它心脏疾病中的作用提供了可靠有效的研究模型。方法恒压Langedoff灌流装置逆向灌流法分离成年大鼠心肌细胞,之后对该心肌细胞进行逐级复钙。然后,将心肌细胞接种于改良的M199培养基中。分别感染Ad.GFP病毒和Ad.TNNI3K病毒,24小时后,以IonOptix单细胞可视化动缘系统检测心肌细胞肌丝钙敏感度。结果成功分离培养了成年大鼠心肌细胞,并在该细胞中成功过表达了TNNI3K基因。钙敏感度测定结果表明,TNNI3K基因能够增强心肌细胞肌丝钙敏感度。结论在本实验成功分离培养的成年大鼠心肌细胞中以腺病毒载体过表达TNNI3K基因,可增强心肌细胞肌丝的钙敏感度,该模型为进一步研究TNNI3K基因在心肌收缩功能中的作用及机制奠定了基础。     

女性尖锐湿疣患者宫颈亚临床感染与复发关系的研究

目的 探讨女性尖锐湿疣（CA）患者宫颈中人乳头瘤病毒（HPV）亚临床感染与CA复发的关系。方法 根据临床及病理结果,收集107例女性CA患者及65例正常女性患者的宫颈拭子,将其分为高复发组（52例）、低复发组（55例）和正常对照组（65例）,利用基因芯片技术检测患者宫颈中是否存在HPV病毒及其亚型,并进行统计学分析。结果 高复发组中67.3％（35/52）例检测出HPV病毒,低复发组中34.5％（19/55）检测出HPV病毒,正常对照组4.6％（3/65）检测出HPV病毒,各组间差异有统计学意义。结论 女性CA患者宫颈中存在HPV病毒感染的潜在病灶可能是CA复发的原因之一。