晚期神经母细胞瘤患儿伴发凝血障碍:附 12例分析

目的 研究晚期神经母细胞瘤凝血象的变化。方法 选取12例Ⅳ期神经母细胞瘤患儿,以凝固法测定血浆凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)及纤维蛋白原(FIB),以ELISA双抗体夹心法测定血浆D-二聚体(DD)。结果 6例活动期Ⅳ期神经母细胞瘤患儿,凝血检查结果均出现异常。而5例处于静止期或完全缓解期(CR)的患儿除1例血浆DD轻度增高外,凝血检查结果均在正常范围。血浆DD为更敏感的指标,总阳性率为58．3％(7／12例),其中复发或活动期患儿85．7％(6／7例)出现异常,而处于静止期或CR期的患儿仅20．0％(1／5例)增高。结论 晚期神经母细胞瘤患儿在活动期和复发期伴有明显的凝血障碍,血浆DD是检测凝血异常的敏感指标,并对了解病情严重度、临床分期及疗效观察有重要价值。     

儿童造血干细胞支持的强烈化疗和化疗加放疗急性毒性及造血恢复

目的 在儿童恶性肿瘤患者中评价自体造血干细胞支持的以马法兰为主的大剂量化疗的急性毒副反应及造血功能恢复.方法 对以马法兰为主的大剂量化疗和化疗加全身放疗急性毒副作用和造血功能的恢复进行比较.24例恶性肿瘤患儿接受治疗,其中,放疗组:化疗加全身放疗9例(基本方案为环磷酰胺加分次全身放疗);马法兰组:单纯化疗15例(基本方案为马法兰加卡铂、足叶乙苷).化疗或联合全身放疗后,全部病人均接受自体外周血造血干细胞输注.按Bearman标准进行相关毒性评分,并观察腮腺、监测血糖和血淀粉酶.干细胞回输后每日做外周血白细胞、血小板和中性粒细胞计数观察造血功能恢复.结果 急性相关毒性:两组黏膜、胃肠道反应发生率相近,但放疗组中黏膜Ⅱ级反应率33%,腮腺反应率67%,高于马法兰组(P<0.05).外周血达到WBC1.0×109/L、ANC0.5×109/L、ph20×109/L,恢复时间(d)分别为:化疗加放疗组(24.78±8.50)、(32.20±10.60)、(36.79±9.50)d;马法兰组(17.92±5.21)、(23.96±6.59)、(29.07±5.87)d.结论 接受以马法兰为主的强烈化疗治疗的患儿黏膜反应程度轻,无放射性腮腺炎发生,造血功能恢复快.     

大剂量化疗造血干细胞移植治疗IV期神经母细胞瘤的长期疗效研究

目的：目前IV期神经母细胞瘤患儿无论采用何种方法治疗均疗效差,长期生存率低,需要探索新的治疗途径。该文采用大剂量化疗、自体外周血造血干细胞移植及13-顺式维甲酸治疗等方法,试图提高IV期神经母细胞瘤的长期疗效。方法：选择IV期神经母细胞瘤患儿28例,年龄2.1~11.5岁,平均3.3±1.9岁,发病时间1~7个月,平均3.1±0.7个月。原发部位:肾上腺23例,胸部3例,胸腹联合1例,骶骨1例。强烈化疗6疗程,期间进行外周血造血干细胞采集、手术切除,然后进行自体外周血造血干细胞移植,术后行局部放疗及13-顺式维甲酸治疗,定期随访。结果：28例患儿诱导化疗结束时13例取得完全缓解,11例取得部分缓解,4例化疗中病情进展。完全缓解及部分缓解的24例患儿完成治疗进入本研究。随访3.5±0.7年,两组4年无病生存率29.2%。完全缓解组中位无复发生存时间4.1±0.7年;部分缓解组中位无复发生存时间2.8±0.5年,两组中位无复发生存时间差异有显著性(t=3.9,P<0.01)。结论：大剂量化疗、自体外周血造血干细胞移植及13-顺式维甲酸治疗IV期神经母细胞瘤可取得较好疗效,4年无病生存率29.2%,移植前达到完全缓解时可取得更好疗效     

反向聚合酶链式反应测定Ewing肉瘤患者骨髓微小残留病变

目的　建立以EWS FLI 1融合基因为标志 ,用反向聚合酶链式反应 (PCR)测定骨髓Ewing肉瘤细胞的体系。方法　用RPMI 16 40培养液培养Ewing肉瘤T1细胞系 ,将其与正常人骨髓单个核细胞按比例混合 ,使T1细胞浓度依次为 10 0 % ,10 -3 ,10 -4 ,10 -5,10 -6,10 -7,0 ,提取总RNA ,合成cDNA ,PCR扩增EWS FLI 1;同时选择 5例骨髓转移的Ewing肉瘤患者 ,测定诊断时及缓解后骨髓EWS FLI 1融合基因。结果　T1细胞浓度为 10 0 % ,10 -3 ～ 10 -6时 ,EWS FLI 1均阳性 ;10 -7及 0时阴性。 5例患者诊断时骨髓EWS FLI 1均阳性 ,完全缓解后 2例转阴。结论　以EWS FLI 1融合基因为标志的反向PCR测定骨髓Ewing肉瘤细胞的灵敏度为 10 -6,它是测定骨髓Ewing肉瘤细胞高度敏感的方法 ;Ewing肉瘤患者完全缓解时 ,部分患者骨髓仍存在肿瘤细胞。     

移植物化学修饰减轻小鼠半相合骨髓移植后的急性移植物抗宿主病

背景:甲氧基聚乙二醇是一种无免疫原性的兼性聚合分子,可以共价结合方式修饰各种蛋白质,减少其免疫原性.因此,在进行半相合造血干细胞移植时,若能用甲氧基聚乙二醇对移植物的T细胞进行化学修饰,阻断其激活的途径,就可能减轻移植物抗宿主病反应,提高移植成功率.目的:构建小鼠半相合骨髓移植模型,观察甲氧基聚乙二醇修饰移植物对小鼠H2半相合骨髓移植后移植物抗宿主病的影响.设计、时间及地点:随机化配对设计实验,于2003-03/11在解放军总医院医学动物实验中心和小儿内科实验室完成.材料:纳入20只8～10周龄雄性近交系BALB/cH-2d小鼠作为供鼠,60只8-10周龄杂交获得的雌性CB6 F1代".m小鼠作为受鼠.甲氧基聚乙二醇为美国Sigma公司产品.方法:常规制备供鼠骨髓及脾细胞混合悬液.受鼠行总剂量8.0 GY60Co γ射线全身均匀照射,照射后随机分为3组,每组20只.照射对照组每只受鼠经尾静脉输入RPMI-1640培养摹基0.5 mL,单纯移植组照射后12 h内经尾静脉输入未处理的半相合供鼠骨髓及脾细胞混合悬液0.5 mL,修饰移植组照射后12 h内经尾静脉输入甲氧基聚乙二醇修饰的半相合供鼠骨髓及脾细胞混合悬液0.5mL.主要观察指标:移植后观察动物存活率、急性移植物抗宿主病理表现及存活小鼠的染色体核型.结果:照射对照组小鼠均在2周内死亡;修饰移植组小鼠30 d存活率显著高于单纯移植组(75%,40%,x2=5.01,P=0.025).取死亡小鼠的爪垫皮肤、肝及小肠肠管作病理组织学检查,修饰移植组急性移植物抗宿主病病理表现减轻,Thomas病理分级轻于单纯移植组.移植后75 d应片j染色体C带显色法检测存活受鼠的嵌合体,证实为完全供者型植入.结论:甲氧基聚乙二醇修饰移植物可明显减轻急性移植物抗宿主病,提高半相合骨髓移植存活率.     

儿童急性巨核细胞白血病

本研究通过实例分析儿童急性巨核细胞白血病（AMKL）的临床、病理和生物学特征。用骨髓细胞涂片观察细胞的形态;用流式细胞技术和免疫组织化学方法检测肿瘤细胞的免疫表型。结果表明：本例以发热、出血、肝脾淋巴结肿大为主要临床症状,白细胞增多伴两系血细胞减少,骨髓干抽,骨髓原始巨核细胞异常增生超过30%,原始细胞的免疫分型为CD41＋CD61＋。骨髓活检显示,髓内增生的单个核大细胞为CD42b＋。最后诊断为急性巨核细胞白血病。结论儿童急性巨核细胞白血病较为少见,容易误诊,预后不好;免疫分型和免疫组织化学检测有助于该病的早期诊断和预后评估。     

儿童慢性活动性EB病毒感染的相关血液疾病特征

本研究通过4个病例分析儿童慢性活动性EB病毒（CAEBV）感染相关的血液学病征。总结了临床特点，应用显微镜观察骨髓涂片的细胞形态，流式细胞仪分析淋巴细胞亚群，免疫组织化学检测肝穿刺组织，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血浆EBV抗体，实时定量PCR检测血浆EBV—DNA，原位杂交检测外周血单个核细胞（PBMNCs）EBV编码小RNA-1（EBER-1）。结果显示：4例患儿有持续或反复的发热、肝脾肿大、肝功能异常、贫血、血小板减少症、全身炎症反应；骨髓象表现增生减低、成熟障碍、病态造血和噬血细胞增多；4例患者均有CD8^＋T淋巴细胞增多，其中1例进展为T细胞淋巴瘤；2例EBV—VCA-IgG滴度≥1：5120，1例血浆EBV-DNA拷贝数为3．26×10^3／ml，1例PBMNC的EBER1阳性率为1．7％；最后，4例患者均被诊断为CAEBV。结论：免疫相关性血细胞减少、巨噬细胞活化综合征和淋巴细胞增殖性疾病等是本研究中4例CAEBV患儿的血液学病征。     

苦参碱抑制神经母细胞瘤LA-N-5细胞增殖及MYCN基因mRNA的表达

目的：神经母细胞瘤是4岁以下儿童最常见的恶性实体肿瘤,MYCN基因的高表达导致预后更加恶劣。苦参碱作为中药苦参的重要成分对多种肿瘤有治疗作用,该实验拟应用苦参碱作用神经母细胞瘤细胞(LA-N-5),对肿瘤细胞增殖及MYCN基因mRNA表达受抑制情况进行初步研究,希望可以为神经母细胞瘤的治疗开拓新的思路。方法：以终浓度为0.25 mg/mL,0.50 mg/mL,0.75 mg/mL,1.00 mg/mL苦参碱作用神经母细胞瘤LA-N-5细胞, MTT法检测LA-N-5细胞增殖情况变化,采用SYBR 绿色荧光染料Ⅰ的实时荧光定量RT-PCR检测MYCN基因mRNA表达受抑制情况。结果：苦参碱对LA-N-5细胞增殖的抑制呈明显的剂量、时间依赖性,随剂量的增加,作用时间的延长,抑制效果逐渐加强。1.00 mg/mL作用72 h后肿瘤细胞增殖抑制效率达36.3%,单细胞MYCN基因mRNA表达9.7±0.35拷贝,抑制效率达44.6%。结论：应用苦参碱在体外环境作用LA-N-5细胞,可以有效抑制该细胞的增殖、原癌基因MYCN mRNA的表达,为临床上神经母细胞瘤的治疗开拓了新的思路。     

脂多糖干预小胶质细胞后细胞内促血小板生成素与炎症因子的表达

目的 探讨脂多糖(LPS)干预小胶质细胞后细胞内促血小板生成素(TPO)及炎症因子的表达.方法将BV2细胞分为6组.1.空白12 h组:BV2细胞正常培养12 h,不添加任何干预因素;2.LPS 0.5 mg·L-1 12 h组:在培养好的BV2细胞内添加预先配好的LPS溶液共同培养12 h,并使其终质量浓度为0.5 mg·L-1;3.LPS 1.0 mg·L-112 h组:在培养好的BV2细胞内添加预先配好的LPS溶液共同培养12 h,并使其终质量浓度为1.0 mg·L-1;4.空白 24 h组:BV2细胞正常培养24 h,不添加任何干预因素;5.LPS 0.5 mg·L-1 24 h组:在培养好的BV2细胞内添加预先配好的LPS溶液共同培养24 h,并使其终质量浓度为0.5 mg·L-1;6.LPS 1.0 mg·L-1 24 h组:在培养好的BV2细胞内添加预先配好的LPS溶液共同培养24 h,并使其终质量浓度为1.0 mg·L-1.采用ELISA法检测BV2细胞内炎症因子(IL-1、IL-6、NF-κB)和TPO的表达;实时荧光定量PCR法检测细胞内IL-1 mRNA、IL-6 mRNA、NF-κB mRNA及TPO mRNA表达水平.结果 LPS 0.5 mg·L-1和1.0 mg·L-1干预BV2细胞后12 h和24 h,IL-1、IL-6、NF-κB和TPO表达水平及其mRNA水平均较空白组升高,且12 h组高于24 h组,但其差异均无统计学意义(Pa>0.05).TPO表达水平与IL-1、IL-6、NF-κB及其mRNA水平的表达均呈显著正相关(Pa<0.01).结论 LPS干预小胶质细胞后IL-1、IL-6、NF-κB和TPO表达升高,参与炎症、凋亡和神经元保护等多种调控机制.     

儿童急性淋巴细胞白血病诱导缓解化疗合并大脑后部可逆性脑病综合征的诊治

目的 探讨儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)诱导缓解化疗合并大脑后部可逆性脑病综合征(PRES)的诱发因素,以便早期识别和正确治疗.方法 回顾分析2008年7月-2009年3月收治的4例ALL患儿诱导缓解化疗合并PRES的诊断和治疗.结果 4例PRES患儿的临床表现包括头痛、癫癎、行为异常、认知障碍、昏迷、幻视和皮质盲;头颅MRI检查均显示双侧顶枕叶白质水肿的长T1长T2信号,此外2例额叶受累,1例颞叶受累.4例PRES除可能与联合化疗相关外,2例合并高血压,2例合并败血症.予停化疗、降血压、控制感染等处理,2例临床表现和影像病灶2周内缓解,1例临床表现1周内缓解而影像病灶8个月无明显改善,1例临床表现和影像病灶8个月随访逐渐好转.结论 ALL诱导缓解化疗合并PRES的诱因是多方面的,包括联合化疗、高血压和感染等.行头颅MRI检查以早期确诊并及时去除病因,避免水久性脑损伤.