兔高胆红素血症性脑性瘫痪的病理改变研究

目的为探讨高胆红素血症性脑瘫脑组织病理改变特点。方法采用新生仔兔腹腔注射胆红素溶液的方法制备脑瘫动物模型。结果腹腔注射胆红素300mg/kg组仔兔,血清总胆红素浓度明显高于正常对照组(P<0.01)。可有不自主运动,肌张力异常等中枢性运动障碍和姿势异常等。可见基底节处明显黄染,镜下神经细胞变性、坏死,数量减少,核固缩、形状扭曲,胶质细胞增生等。结论兔高胆红素血症脑瘫的病理改变与人类核黄疸病理改变基本相似。     

放射治疗增生性瘢痕的分子生物学机制

目的利用基因芯片技术,筛选放射治疗后增生性瘢痕的基差异表达,探讨其分子生物学机制.方法选择两例增生性瘢痕,术前进行1疗程的放射治疗,并将治疗前后的瘢痕标本,制成cDNA探针,与含4000个人类基因的芯片杂交,扫描分析比较治疗前后的差异表达.结果两例平均62个基因出现差异表达,上调约30个,下调约32个,其中凋亡基因、抑癌明显上调,而原癌、细胞周期、蛋白合成类下调明显.结论放射治疗增生性瘢痕是有多面作用,主要通过抑制增殖和生物合成,促进细胞凋亡而实现.     

长效人白细胞介素4拮抗剂的研究

目的：研制保留白细胞介素4受体（IL-4R）结合能力,但不具有激活下游信号活性的人白细胞介素4（IL-4）突变体M5,并通过抗体Fc融合延长其体内半衰期,为变态反应病药物研发提供基础。方法全基因合成人IL-4突变体M5,将其克隆到pBV220表达载体,在大肠杆菌DH5α中表达M5蛋白。同时构建嵌合基因M5-IgG1 Fc,并克隆到pPICZαA载体中,电转化糖基工程毕赤酵母GJK01,经甲醇诱导,分泌表达M5-IgG1 Fc融合蛋白。利用CTLL-2／IL-4R细胞测定纯化所得M5蛋白、M5-IgG1 Fc融合蛋白的IL-4拮抗活性,最后利用ELISA试剂盒检测比较两者在小鼠体内的清除速度。结果由大肠杆菌DH5α表达的M5蛋白和糖基工程酵母GJK01表达的M5-IgG1 Fc融合蛋白都具有IL-4拮抗活性,它们在CTLL-2／IL-4R细胞上拮抗IL-4（5．6×10-2 nmol／ml）的EC50分别为（0．31±0．05）和（0．77±0．03）nmol／ml。小鼠体内M5蛋白在注射后0．5 h时达峰,其在血液中的含量为5．8×10－2 nmol／ml,而在2 h时血药浓度已下降为峰值的2．8％,在8 h时低于ELISA试剂盒的检测限。 M5-IgG1 Fc融合蛋白在注射后0．5 h时血液中浓度也达到峰值,为4．7×10－2 nmol／ml,120 h时其血药浓度下降为峰值的4．3％,而168 h时低于ELISA试剂盒的检测限。结论 M5蛋白具有IL-4拮抗作用。由糖基工程酵母表达的M5-IgG1 Fc融合蛋白不仅具有IL-4拮抗活性,而且在小鼠体内具有较长的半衰期,为下一步将其研发为治疗变态反应病的药物提供了理论基础。     

多功能医学实验平台的研制及在体外细胞温度效应观察中的初步应用

目的 研制一种多功能医学实验平台.方法 选用氧气、二氧化碳、湿度、温度传感器、控制器及效应器构建多功能医学实验平台并用于293细胞、PK15细胞受温度效应影响的试验.结果 该多功能医学实验平台可对温度、湿度、氧气浓度和二氧化碳浓度进行调节和控制,温度调控范围-20～ 60 ℃, 二氧化碳浓度调控范围0%～20%,氧气浓度调控范围0%～100%;湿度调控范围室温湿度至98%.采用该实验平台观察不同温度对293细胞、PK15细胞影响时发现,在10 ℃和20 ℃时,细胞出现胞体皱缩、突起变长等特征,细胞停止增殖.结论 该多功能医学实验平台可调节温度、湿度、氧气浓度和二氧化碳浓度,可用于细胞低温保存等移植相关实验.     

SFRP2与Periostin的相互作用在瘢痕疙瘩形成机制中的研究

目的利用pull-down技术验证凋亡相关蛋白基因SFRP2（Secreted frizzled-related protein 2）和骨母细胞特异性因子-2 Periostin（Osteoblast-specific factor2）间的相互作用。方法构建能在哺乳动物细胞中表达带HA标签的Periostin融合蛋白（HA—Periostin）的重组载体pCMV—HA—Periostin,经酶切鉴定正确后,和表达带Myc标签的融合蛋白（Myc—SFRP2）的重组真核表达载体pCMV—HA—SFRP2,单独或共转染人293细胞,利用pull-down技术验证Periostin与SFRP2间的相互作用。结果成功构建重组载体pCMV—HA-Periostin．与抗Myc单克隆抗体沉淀Myc—SFRP2相互作用蛋白复合物后,可以检测到HA—PeMostin的表达。通过体外蛋白质结合实验证实了Periostin与SFRP2间的相互作用。结论成功构建带HA标签的Periostin融合蛋白（HA-Periostin）的重组载体,利用pull—down技术证实了Periostin与SFRP2间的存在相互作用。     

损伤控制外科理念在肝脏破裂治疗中的临床应用

目的探讨损伤控制外科（DCS）理念在肝脏破裂救治中的作用。方法收集2009年1月至2012年5月期间我院急诊外科收治的62例外伤致肝脏破裂患者的临床资料,比较DCS理念指导前（传统组）与DCS理念指导后（DCS组）急诊肝脏破裂救治的疗效。结果 DCS组的保守治疗率明显高于传统组〔26.47%（9/34）比7.14%（2/28）,P〈0.05〕,2组间保守治疗成功率比较差异无统计学意义〔100%（9/9）比100%（2/2）,P〉0.05〕;DCS组的死亡率及术后并发症发生率较传统组明显降低〔死亡率：4.00%（1/25）比19.23%（5/26）,P〈0.05;并发症发生率：32.00%（8/25）比61.54%（16/26）,P〈0.05〕;2组手术患者住院时间、出血量、输血量、手术时间及住院费用比较差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论 DCS理念指导下制定出的新的抢救措施,能够明显降低肝脏破裂的死亡率及术后并发症的发生率。     

调节性T细胞的MACS分选和纯度鉴定

目的 建立CD4^ CD25^ 调节性T细胞（Regulatory T Cells,Treg)的磁珠（MACS）分选方法，并对分选结果进行纯度鉴定。方法 采用T细胞纯化柱分离小鼠脾脏T淋巴细胞，以抗－CD8－FITC抗体和抗FITC标记磁珠相结合的阴性选择法剔除CD8^ T细胞，再以抗－CD25－FITC抗体和义气风发FITC标记磁珠相结合的阳性选择法选出CD25^ T淋巴细胞；以FACS流式细胞法检测分选的CD4^ CD25^ 调节性T细胞纯度。结果 MACS磁珠分选法能够成功分选出CD4^ CD25^ 调节性T细胞，分选平均纯度达到73％，分选细胞活力为95％。结论 MACS磁珠分选法能够分选出高纯度的Treg细胞，该分选方法不影响分选靶细胞的细胞活力。     

拘束冷应激对大鼠肾脏热休克蛋白表达和血清皮质醇含量的动态影响

目的：研究拘束冷应激对大鼠肾脏组织热休克蛋白（heat shock protein 70,HSP70）表达和血清中皮质醇（Cortisol,CORT）含量的动态影响及可能的机制。方法：选取50日龄清洁级大鼠77只,随机分为7组,即0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5和3.0 h。采用拘束冷应激法,应激相应时间后,用免疫组织化学方法观察大鼠肾脏组织HSP70的表达,并检测血清中CORT含量。结果：血清中的CORT浓度在1.5 h呈现最高值,其余各时点变化不明显。光镜下可见HSP70在肾小球毛细血管内皮细胞的胞核及肾小管上皮细胞的胞核和胞浆中均有表达。肾脏中HSP70的表达首先呈增加的趋势,1.5～2.5 h HSP70持续高表达（P〈0.01）,之后下降（P〈0.05）。结论：适当强度的拘束冷应激能诱导肾脏组织中HSP70的合成,并且随着时间的延长而增加,但过度的拘束冷应激则可能降低或阻断肾脏HSP70的表达。     

人CTLA4Ig和EGFP双基因共表达逆转录病毒载体构建及鉴定

目的 构建并鉴定人CTLA4Ig和增强型绿色荧光蛋白（EGFP）双基因共表达逆转录病毒载体。方法 利用基因重组技术将IRES序列与CTLA4Ig和EGFP基因构建到逆转录病毒载体中，脂质体法将重组质粒pCTLA4Ig-IRES2-EGFP转染PA317细胞，在G418选择压力下，通过流式细胞检测筛选得到高效共表达CTLA4Ig和EGFP并能产生高滴度重组逆转录病毒的PA317细胞克隆，MTT法测定CTLA4Ig生物学活性。结果 成功构建出含IRES序列的CTLA4Ig和EGFP双基因共表达逆转录病毒载体，生物学活性测定表明CTLA4Ig生物学活性没有受到影响。结论 IRES序列调控CTLA4Ig与EGFP双基因在细胞中同时独立表达。