重楼皂苷Ⅰ对结肠癌HCT116细胞FOXQ1及上皮间质转化的影响

目的:观察重楼皂苷Ⅰ对转录因子叉头框Q1(forkhead box Q1,FOXQ1)及上皮间质转化相关因子表达的影响,探讨重楼皂苷Ⅰ抑制结肠癌转移的可能作用机制。方法:用1.25,2.50μmol·L^-1重楼皂苷Ⅰ作用于结直肠癌HCT116细胞,蛋白免疫印迹法(Western blot),实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)分别检测FOXQ1,E-钙黏蛋白(E-cadherin),波形蛋白(Vimentin)蛋白和mRNA表达情况。结果:与空白组比较,1.25μmol·L^-1重楼皂苷Ⅰ组FOXQ1蛋白和mRNA相对表达量降低,E-cadherin mRNA相对表达量升高,但差异无统计学意义;Vimentin蛋白和mRNA相对表达量降低(P<0.05);E-cadherin蛋白相对表达显著升高(P<0.01)。与空白组比较,2.50μmol·L^-1重楼皂苷Ⅰ组中的FOXQ1,Vimentin蛋白和mRNA相对表达量降低,E-cadherin蛋白和mRNA相对表达量升高(P<0.05,P<0.01)。与1.25μmol·L^-1重楼皂苷Ⅰ组比较,2.50μmol·L^-1重楼皂苷Ⅰ组中的Vimentin蛋白和mRNA相对表达量降低,但差异无统计学意义;E-cadherin蛋白和mRNA相对表达量升高,FOXQ1蛋白和mRNA相对表达量降低(P<0.05,P<0.01)。结论:重楼皂苷Ⅰ抑制结肠癌的转移,可能与抑制FOXQ1的表达,上调E-cadherin的表达,降低Vimentin的表达相关。     

蛋白质组学分析多重耐药的铜绿假单胞菌

目的阐明铜绿假单胞菌多重耐药分子机制。方法应用双向电泳技术比较铜绿假单胞菌多重耐药菌株及敏感菌株全菌蛋白表达谱，差异蛋白进行胶内酶切，肽混合物使用基质辅助激光解吸／电离飞行时间质谱仪（MALDI-TOF-MS）进行质谱分析．将肽质量指纹谱数据输入互联网上蛋白质数据库进行检索。结果鉴定两种与铜绿假单胞菌多重耐药相关蛋白，即Sigma调控因子RpoD和膜孔蛋白F（PorinF）。结论上述蛋白的鉴定为深入研究铜绿假单胞菌多重耐药机制，筛选具有潜在价值的抗多重耐药的铜绿假单胞菌药物靶位有参考价值。     

全自动血液分析流水线血片复检规则的设置及临床应用探讨

目的探讨通过软件设置合理的血液分析仪复检规则,对血液分析仪检测结果异常的标本进行自动筛选和标记,并用自动推片染色仪进行推片和染色以观察细胞形态学异常,用显微镜计数方法证实血细胞计数的异常,从而达到提高工作效率保证血液分析结果的准确性。方法利用Sysmex XE-2100血液分析仪的报警系统,结合国际实验血液学学会（ISLH）推荐的41条复检规则,并结合本科室实际检测患者的特点,制定出了适合我科的复检规则。并根据美国临床和实验室标准化委员会（CLSI）推荐的白细胞（WBC）分类方法和ISLH推荐血涂片阳性标准,并参照《全国临床检验操作规程》推荐的血细胞计数方法,对1300份标本中符合复检标准的“阳性”样本进行对应的复检,对不符合复检标准的“阴性”样本仅进行形态学检查。结果该套规则的阳性预示值为76．63％,阴性预示值为98．50％,该规则的复检率为28．3l％,诊断特异性为89．34％,诊断灵敏度为96．25％,总有效率为77．15％。结论我室制定的针对XE-2100血液分析仪的复检规则,能够有效地筛选出真正异常样本,使操作人员在有限的时间内对真正异常的标本进行复检,达到提高工作效率,保证血液分析结果准确性的目的。     

一种研究耐药性整合子整合功能体系的建立

遗传物质在菌种内以及菌种间的水平传播，是细菌获得新耐药性的重要手段。耐药性快速广泛地传播以及在不同菌种间出现非常相似的耐药方式，说明了上述机制的重要性。细菌可以通过基因突变的方式获得耐药性，然而整合子通过捕获多种耐药性基因盒在临床菌株产生多重耐药性上具有重要意义。Hall和Collisl。将整合子定义为由一系列遗传元件构成的能够识别和捕获移动性基因盒的位点特异性重组系统。一个整合子包括编码整合酶（intI）的基因及其临近的重组识别位点（attI）。整合子不一定包括基因盒，但当基因盒整合入整合子时，这些基因盒就成为整合子的一部分。     

新的细胞壁锚定蛋白编码基因sasX在金黄色葡萄球菌中的分布

目的 研究细胞壁锚定蛋白编码基因sasX在金黄色葡萄球菌中的分布及对细菌耐药性的影响.方法 随机收集上海华山医院2004、2007和2010年从金黄色葡萄球菌感染的住院患者标本中分离鉴定的金黄色葡萄球菌共300株,收集同时期社区健康人群的鼻咽拭子分离鼻腔内定植的金黄色葡萄球菌170株.按照国际通用的MLST以及葡萄球菌A蛋白序列分析(spa typing)方法进行克隆株的鉴定分析.通过苯唑西林MIC值测定方法对MRSA进行检测.采用PCR结合测序方法对金黄色葡萄球菌携带sasX基因情况进行分析,采用纸片琼脂扩散法药敏试验分析临床sasX阳性和sasX阴性金黄色葡萄球菌对抗菌药物的耐药性.结果 300株从金黄色葡萄球菌感染的住院患者标本中分离到的致病性金黄色葡萄球菌克隆分型以ST239(110株,36.7％)和ST5(122株,40.7％)为主.2004至2010年,sasX基因在致病性的金黄色葡萄球菌中的阳性率从17％上升至39％,sasX基因在健康人鼻腔内分离的金黄色葡萄球菌中阳性率平均为0.59％.ST239中sasX的阳性率从47.2％上升至83.8％.携带sasX基因的MRSA百分率从26.4％上升至50.8％,携带sasX基因的MSSA的比率只约占10％.sasX基因阳性组对部分目前临床常用的抗菌药物的耐药性高于sasX基因阴性组.结论 sasX基因主要存在于医院环境内致病性的金黄色葡萄球菌中,SasX可能是金黄色葡萄球菌在医院环境内持续感染毒力因子之一,sasX基因的存在与细菌的耐药有关.     

表皮葡萄球菌附属基因调节子对生物膜形成的调节作用

目的研究表皮葡萄球菌agr对其生物膜形成的调节作用，并探讨其调节机制，以期发现新的生物膜形成调节途径，完善agr调节网络。方法用同源重组方法构建表皮葡萄球菌agr阴性突变株，从体外、体内不同角度观察agr阴性突变株与其agr阳性野生株生物膜形成能力和致病力的差异。结果表皮葡萄球菌agr阴性突变株与其agr阳性野生株相比，黏附能力、致病力均明显增强；在agr阴性突变株中许多蛋白表达是增加的，如ClpP（ATP—dependent Clp protease）、DadL（D—alanine—D—alanine ligase）等；在agr阴性突变株中基因clpP、atlE和dadL mRNA的表达分别是agr阳性野生株的6．4、7．6和3．9倍。而fbe、ica mRNA的表达在agr阴性突变株和agr阳性野生株中差异无统计学意义。结论agr基因可以下调表皮葡萄球菌生物膜的形成，是生物膜形成的抑制因子。agr基因对生物膜的下调作用可能不但通过下调atlE的表达，还可能同时下调clpP的表达；agr对生物膜的下调作用并不通过调节fbe和ica途径；首次发现agr可以通过调节dadL来调节细菌细胞壁的合成。     

健脾消癌方干预结肠癌细胞HCT116来源外泌体中miR-21调控CAFs的活化与糖酵解的研究

目的:研究健脾消癌方干预结肠癌细胞HCT116来源外泌体中小分子含氧核糖核酸-21(miR-21)调控肿瘤相关成纤维细胞(Cancer associated fibroblasts, CAFs)的活化与糖酵解的作用机制。方法:采用超高速离心法收集分泌HCT116细胞来源外泌体(Exosomes, EXO);透射电镜鉴定HCT116细胞来源的外泌体形态;纳米颗粒跟踪分析仪检测外泌体的粒径分布范围;Western blot检测外泌体标志性蛋白TSG101、Alix、Calnexin的表达。制备健脾消癌方无外泌体含药鼠血清,采用含药血清干预HCT116细胞,RT-PCR检测miR-21的表达;收集无外泌体胎牛血清、无外泌体鼠血清、健脾消癌方无外泌体含药鼠血清干预后及miR-21 inhibitor转染后HCT116细胞来源的外泌体(HCT116外泌体1μg/mL组、空白鼠血清处理HCT116外泌体1μg/mL组、含药鼠血清处理HCT116外泌体1μg/mL组、miR-21敲除HCT116外泌体1μg/mL组),分别干预人胚肺成纤维细胞HFL-1,Western blot、RT-PCR法分别检...     

冷凝集和红细胞碎片对血液分析仪测定干扰案例报道

目的探讨血液检验中红细胞碎片、冷凝集影响因素的分析和处理。方法通过仪器提示的红细胞平均血红蛋白浓度(MCHC)、红细胞平均体积(MCV)异常红细胞参数的结果,仪器直方图,标记信号,结合血片镜检,去除干扰。结果冷凝集引起红细胞假性降低及MCHC假性升高;红细胞碎片引起红细胞假性降低,影响红细胞MCHC和MCV值,并引起血小板计数假性增高。结论能更及时、有效地发现各种因素干扰血液分析仪测定产生的红细胞参数假性增高或降低,并通过对标本的处理纠正检测结果,为临床提供有价值的数据。     

虚拟中心实验室及其质量保证体系

继在荷兰 (1 995)、英国 (1 996)建立虚拟中心实验室 (Virtual Central Laboratory,VCL)后 ,为适应临床医学的发展 ,将日益增长的临床药物的实验室研究从各地方的某个实验室转向中心实验室已成为一种趋势。选择中心实验室做研究基于下列几个原因 :实验方案中所有入选者的数据比较 ,实验室工作在高质量的指导下完成 ,参加研究的所有实验室之间的相互交流 (电子信息的交流与传递 )。使病人尽可能在就近的实验室检测 ,这样可得到快速的结果报告、减少实验偏差。VCL的原理通过应用所谓的转换技术使不同实验室条件下产生相似的结果。这些相似…     

trap基因表达在表皮葡萄球菌生物膜形成及附属基因调节(agr)系统活化中的作用

目的研究表皮葡萄球菌trap基因表达与生物膜形成的相关性及其对agr系统的活化作用。方法采用微量板半定量法检测表皮葡萄球菌生物膜表型，二维电泳和高灵敏度的基质辅助激光解吸附飞行时间质谱分析比较表皮葡萄球菌标准株蛋白质表达谱，实时定量逆转录PCR检测trap基因和RNAⅢ的转录水平，CLUSTALX对表皮葡萄球菌trap基因与金黄色葡萄球菌序列进行分析，Mega软件构建进化树。结果比较分析形成生物膜的表皮葡萄球菌ATCC 35984株与不形成生物膜的ATCC 12228株生长中期的蛋白质组，发现ATCC 35984株的TRAP蛋白量明显高于ATCC 12228株。转录水平的检测显示ATCC 12228株和生物膜阳性临床SE1457、SE671株的trap基因均低转录，但RNAⅢ的转录水平未降低。SE1457株agr系统突变后，RNAⅢ的转录明显降低，trap基因的转录无变化。RNAⅢ的转录随细菌生长变化而增加，trap基因转录保持不变。trap序列分析显示其在表皮葡萄球菌与金黄色葡萄球菌中较为保守，但存在明显的进化距离。结论在本论文所研究的表皮葡萄球菌菌株中，trap基因的转录和翻译与细菌生物膜的形成不存在直接的调控相关性；并提示TRAP蛋白不是表皮葡萄球菌agr系统活化所必需的细菌产物；表皮葡萄球菌trap基因序列与金黄色葡萄球菌之间存在差异，可能与其功能差异相关。